Skimunarþjónusta fyrir fagasýningarbókasafn

Alpha Lifetech hefur unnið djúpt að þróun fagasýningartækni í mörg ár. Fyrirtækið hefur byggt upp fullkomna og stöðuga fagasýningartækni sem sparar tíma fyrir vísindarannsóknir eða verkefnarannsóknir og auðveldar síðari framleiðslu. Alpha Lifetech getur einnig veitt viðskiptavinum þjónustu eins og framleiðslu á vhh mótefnum, framleiðslu á scFv mótefnum og framleiðslu á Fab mótefnum.

Alpha Lifetech býr yfir alhliða M13/T7 fagasýningarvettvangi til að tryggja smíði og framleiðslu mótefnasafna. Við getum einnig boðið upp á sérsniðna þjónustu, svo sem framleiðslu á scFv mótefnum og háafköst mótefnaskimun, til að mæta þörfum þínum.

Smíðaferli fagasýningarsafns

Ferlið við smíði fagasafns er sem hér segir: sérstakir praimerar eru hannaðir fyrir PCR mögnun sem fá afurðirnar, sem eru ensímbundnar við T7/M13 faga vektorinn, og endurröðuðu faga plasmíðinu er smíðað með góðum árangri. Endurröðuðu faga plasmíðinu var umbreytt í TG1 viðtakafrumur, síðan húðað á miðli sem innihélt viðeigandi sýklalyf, og stækkuð ræktun var framkvæmd eftir skimun umbreytenda. Eftir margar ræktunarumferðir endurtekur faginn afritunartíma í bakteríunni og tjáir markpróteinið eða fjölpeptíðið með góðum árangri. Síðan er fagasafnið hreinsað til að fjarlægja óhreinindi og óbundna faga.

Aðferðir til að skima fagasýningarbókasafn

Árangur framleiðslu á fagasýnismótefnum er aðallega háður fagasýnisbókasöfnum mótefna og algengar aðferðir við fagapönnun eru skimun í föstu og fljótandi fasa. Skimun á föstu mótefnavaka auðgar sértæk mótefni í gegnum 3-4 umferðir af útskilnaði til að fá fagasýnisbókasöfn mótefna; Skimun á fljótandi fasa mótefnavaka er framkvæmd með því að rækta bíótínmerkt mark- og mótefnafagasýnisbókasöfn og fanga bundna faga með segulperlum. Skimun í föstu fasa neytir meira mótefnavaka og sumir mótefnavakaþáttir eyðileggjast. Skimun í fljótandi fasa einkennist af mikilli skilvirkni og auðgun, en mótefnin sem fást eru minna sértæk. Aðferðin við fagapönnun fer eftir tilraunaþörfum, sem allt mun hafa ákveðin áhrif á áhrif framleiðslu á fagasýnismótefnum.

Skimun á mótefnum með mikilli afköstum

Þróun mótefna hefur orðið hröð í nútíma læknisfræði. Ýmsar aðferðir við þróun mótefna eru til, en skimun með mikilli afköstum mótefna er meira notuð í læknavísindum. Ferlið getur náð fram mikilli fjölbreytni í mótefnaskrá. Með því að sameina það við hefðbundnar skimunaraðferðir fyrir mótefnasöfn er hægt að bæta gæði skimunar á fögasýningarsafnum. Eftir líffræðilega skimun er hægt að greina mótefni með lágafköstum ELISA eða háafköstum mótefnaskimun.

Mynd 1. Flæðirit sem sýnir atburðarásina frá smíði faga-mótefnasafna til myndunar einstofna mótefna með mikla sækni í mótefnavaka og litla ónæmissvörun.(Heimild: Fögasýningartækni sem öflugur vettvangur fyrir uppgötvun mótefnalyfja - PMC (nih.gov))

Varúðarráðstafanir við skimun á mótefnafögumVarúðarráðstafanir

Íhugunarefni varðandi biðminni

Við val á stuðpúðum ætti að taka mið af stöðugleika skotmarksins, bindingarumhverfi og lágmarks ósértækri bindingu í raunverulegu notkunarumhverfi. Óskyld prótein, ójónísk þvottaefni og lífeðlisfræðileg saltþéttni stuðla að því að draga úr bakgrunnsljósi. Það eru einnig aðrar aðstæður, svo sem sum skotmörk gætu þurft að bæta tvígildum katjónum eða öðrum meðvirkum þáttum við stuðpúðann, prótein meðvirkir þáttar geta verið bundnir við skotmarkið, bætt þeim við flokkunarstuðpúðann og jafnvel notaðir sem leið til að fanga skotmarkið.

Þrýstingsatriði

Algeng atriði sem þarf að hafa í huga varðandi valþrýsting eru meðal annars styrkur marksameinda, bindingartími, þvottastyrkur o.s.frv. Aðrar aðferðir til að auka valþrýsting eru meðal annars notkun denatúrerandi efna (eins og sýra, þvagefnis og gúanidíns), lífrænna leysiefna, hækkun hitastigs eða aukning á styrk samkeppnisbindla eða marka í þvottalausninni.
Meðal þeirra er fyrsta umferð skimunarinnar mikilvæg. Fyrsta umferð skimunarinnar felst í því að fanga eins marga jákvæða klóna og mögulegt er úr smíðaða safninu og fjarlægja ósértæka klóna. Nota ætti holóttar skotmörk eða fjölda leysanlegra skotmarka til að tryggja að fjöldi bundinna faga sé fangaður til að viðhalda fjölbreytileika safnsins. Í síðari umferðum skimunar ætti að auka valþrýstinginn með aukinni auðgun, endurteknum þvottum og auknum þvottatíma, þannig að hægt sé að skima klóna með mikla sækni.

Neikvæð skimunaraðferð

Mótefnavakamerki og burðarefni. Skimunarferlið felst í því að skima fyrir öllum efnum á mótefnavakasamtengingunum, svo sem merkjum, samrunapróteinum og stuðningshvarfefnum. Neikvæð skimun á öðrum efnum en markmiðsmótefnavakanum getur takmarkað auðgun mótefna, annarra en markmótefnavakans.
Hægt er að skima neikvætt fyrir heilum frumum, lípósómum, nanó-fosfólípíðskífum og VLP með því að nota hermdar erfðabreyttar frumur eða óerfðabreyttar frumur þegar erfðabreyttar frumulínur eru skimaðar.
Fjarlæging flókinna mótefnavakablandna. Hægt er að framkvæma stranga neikvæða skimun fyrir óþekktar eða flóknar marksameindir, svo sem heilar frumur eða óhrein prótein.
Stefna mótefna gegn ákveðnum stöðum mótefnavaka, önnur er að losa mótefnið sem getur keppt við bindilinn með því að bæta við miklum styrk bindla, og hin er að blokka mótefnið.

Notkun fagasýningar

*Uppgötvun mótefna hefur orðið sífellt mikilvægari í nútíma læknisfræði. Mismunandi aðferðir við uppgötvun mótefna eru til, en fagasýningartækni er meira notuð í læknavísindum. Frá árinu 1990 hafa mismunandi mótefnaform verið notuð til að smíða fagasöfn, þar á meðal VH, VHH, scFv, díalíkön og Fab mótefni.
*Peptíðasöfn faga gera kleift að ákvarða röð próteinþátta hratt og hafa orðið öflugt tæki til að rannsaka samspil þátta og mótefnavakaviðtaka.
*Mótefnabrot eru sameinuð G3P í M13 faganum og með því að klóna fjölda gena sem kóða fyrir mótefnabrot er hægt að búa til stór mótefnasöfn fyrir faga sem hægt er að velja úr.
*T7 fagasýningarkerfið hefur marga kosti, þar á meðal einfaldleika, mikið öryggi, stöðugleika, auðvelda geymslu og flutning, þannig að kerfið er notað í fyrirbyggjandi og meðferðarbóluefnum.
*T7 fagasýningarkerfið getur greint ýmis mótefnavaka, svo sem yfirborðsmótefnavaka sjúkdómsvaldandi örvera og krabbameinsmótefnavaka.

Fag

HVERS VEGNA AÐ VELJA OKKUR

Alpha Lifetech getur einnig veitt viðskiptavinum þjónustu eins og framleiðslu á VHH mótefnum, framleiðslu á scFv mótefnum og framleiðslu á Fab mótefnum.