Þjónusta við smíði stöðugra frumulína

Alpha Lifetech hefur unnið djúpt að þróun stöðugra frumulína í mörg ár. Fyrirtækið hefur byggt upp fullkomna vettvang fyrir stöðugar frumulínur, með meira en 300 tegundum af æxlisfrumum og frumfrumum, sem geta framleitt stöðugar frumulínur og sparað tíma fyrir vísindarannsóknir eða verkefnarannsóknir og auðveldað síðari framleiðslu. Alpha Lifetech getur einnig veitt viðskiptavinum þjónustu eins og þróun stofnferla, stofnskimun, stofnsmíði, framleiðslu á endurröðuðum próteinum og mótefnum, sem veitir rannsóknargrunn fyrir ný lyf.

Alpha Lifetech býr yfir frumuvettvangi sem er sýktur af lentiveira og getur sérsniðið tilraunaferlið fyrir mismunandi gerðir af frumustöðugum umbreytingarstofnum. Við notuðum genaútsláttartækni til að smíða CRISPR/Cas9 útsláttarfrumulínur. Ofurtjáning gena og genaþöggunartækni voru notuð til að koma umbreytingarstofnum á stöðugan hátt. Staðbundin samþætting gena lýkur þjónustu við smíði frumulína í hornpunktsamþættingu.

Inngangur að smíði stöðugra frumulína

Stöðug frumulína vísar til frumulínu sem samþættir framandi gen í erfðamengi hýsilfrumunnar þannig að framandi gen geti verið stöðugt tjáð í hýsilfrumunni í langan tíma. Meginreglan er að minnka framandi genið í vektor með ákveðnu ónæmi, umbreyta hýsilfrumum, samþætta framandi genið í litning hýsilsins og skima ónæmisgenin sem eru í vektornum til að fá stöðugar frumulínur með mikilli tjáningu markpróteinsins eða stöðugri þöggun markgensins sem uppfylla kröfur tilraunarinnar.

Alpha Lifetech býður upp á sjálfstætt geymsluverkstæði, hið fullkomna kerfi fyrir frystingu og geymslu frumna og meira en 300 tegundir af æxlisfrumum og frumfrumum til að velja úr, tileinkaðar vísindarannsóknum þínum.

Stöðugt ferli við smíði frumulína

Aðferð við smíði stöðugrar frumulínu

Aðferðirnar til að smíða stöðugar frumulínur eru meðal annars lentiveiru-miðlaðar, transposón-miðlaðar, CRISPR/Cas9-miðlaðar og plasmíðskimun.

Lentiveira-miðluð aðferð er ein algengasta aðferðin til að smíða stöðugar frumulínur. Þessi aðferð hefur þann kost að hún sýkir nánast allar frumugerðir og samþættir erfðaefni í erfðamengi hýsilfrumunnar til að tryggja stöðuga tjáningu yfir langan tíma. Hins vegar hefur þetta kerfi ákveðnar takmarkanir og lentiveira hefur takmarkaða pökkunargetu, þannig að hún hentar ekki til umritunar gena með löngum umritunarsvæðum.

Í samanburði við lentiveira-miðlað hefur transposón-miðlað engin takmörkun á stærð gena og með stöðugri tæknivæðingu hefur skilvirkni transposón-innsetningar batnað nokkrum sinnum. Ókosturinn er að ákveðnar takmarkanir á frumfrumum og frumum eru erfiðar í innleiðingu.

CRISPR/Cas9-miðlað inniheldur crispr-genabrot (e. knockout) og crispr-genabrot (e. knockin). Crispr-genabrot vísar til þess að tvíþátta DNA-brot eru rofin, sem leiðir til þess að markgenið missir virkni þess. Crispr-genabrot vísar til þess að framandi DNA-brot eru sett í tiltekin gen, sem hægt er að nota til að gera við gölluð gen eða kynna ný virk gen.

Plasmíðskimun er frumstæðasta aðferðin við smíði frumulína, sem þarf aðeins að flytja markplasmíðið inn í frumuna með góðum árangri og nota samsvarandi viðnám í langtímaskimun. Þá eru ákveðnar líkur á að fá stöðugar frumulínur.

Aðferðir til að smíða mismunandi stöðugar frumulínur

Miðlunaraðferð	Lentivíruskerfið	Transposon kerfið	CRISP/Cas9-miðluð	Plasmíðskimun
Flutningsgeta	5 kb	10 kb	5 kb	10 kb
Miðluð skilvirkni	Hátt	Venjulegt	Venjulegt	Lágt
Tímalína	1-2 vikur	3-4 vikur	3-4 vikur	4-6 vikur
Kostur	Hratt og skilvirkt	Öryggi og stöðugleiki	Fastpunktssamþætting	Lægri kostnaður
Galli	Líföryggisáhætta	Tjáningargnægð eðlilegt	CAS9 umbreyting er erfið og kostnaðarsöm	Lítil skilvirkni og óstöðugleiki

Tæknilegir erfiðleikar við smíði stöðugra frumulína

Áður en ferlið er aukið er lítið lífrænt hvarfefni notað til að ákvarða breytur eins og gas, ræktunarvökvakerfi, lágmarks vatnsfræðilegt álag sem beitt er á frumurnar o.s.frv., til að tryggja ræktun á mismunandi stærðum. Hins vegar, jafnvel þótt samsvarandi ferlisbreytur séu ákvarðaðar, verður umhverfi stórra lífrænna hvarfa í framleiðandanum ójafnt og auðvelt er að bila. Alpha Lifetech hefur áralanga reynslu af uppskaluðum ræktunarferlum, sem getur komið í veg fyrir mistök að vissu marki, dregið úr áhættu og aukið verulega árangur. Á sama tíma tryggir Alpha Lifetech samræmi hráefna og miðla sem notuð eru, sem dregur úr bilunartíðni í uppskalningu frumuræktunarferla.

Alpha Lifetech býður upp á alhliða þróunarvettvang fyrir stöðugar frumulínur til að tryggja stöðugleika frumulína meðan á framleiðslu stendur. Við getum einnig veitt þér sérsniðna þjónustu til að mæta þörfum þínum.

Efni þjónustu við smíði stöðugra frumulína

Efni	Tímalína
Ræktunar-HEK293 frumulína frá viðskiptavininum.	3-5 mánuðir
Smíði sgRNA-Cas9 plasmíðs (með skimunargeni G418).
sgRNA-Cas9 og viðgerðar-DNA sniðmátið voru flutt samtímis yfir í HEK293 frumulínuna.
Skimun á einstofna frumulínum (GFP gen) (knockin jákvæður klón).
Afhending: Vektor, GFP gen-knock-in stofn, raðgreiningarniðurstöður, öll hrá gögn, rannsóknarskýrsla

Hægt er að rekja frumur

Hleðslurnar eru keyptar frá fagfélögum eins og ATCC og geta veitt sönnun þess að þær uppfylli skráningarkröfur þínar.

Framleiðslukostur

Alpha Lifetech býr yfir áralangri reynslu af því að mæta fjölbreyttum þróunarþörfum; Við höfum fjölbreytt úrval af frumum, sjálfstætt geymsluverkstæði, fullkomna frumfrystingu og geymslustjórnunarkerfi.

Gæðaeftirlit verkefnis

Hvert verkefni gengst undir strangar gæðaeftirlitsferla til að tryggja að viðskiptavinir fái frumulínur sem uppfylla strangar kröfur.

Tæknilegur kostur

Auk verkfræðinga með mikla reynslu af frumuvinnslu, höfum við háþróaða tækniþróunarreiknirit til að bæta aðstæður í hvarfkerfum og breyta ferlisbreytum.

Ef þú hefur einhverjar spurningar, vinsamlegast hafðu samband við okkur hvenær sem er.

Leave Your Message

Valin þjónusta

0102