Piattaforma per l'immunizzazione animale

Le fonti animali di Alpha Lifetech sono chiare, con permessi di ispezione e quarantena, background genetici chiari, frequenza di immunizzazione chiara e registrazioni dettagliate degli intervalli di immunizzazione, offrendo servizi convenienti per la produzione di anticorpi. Immunizza principalmente animali Camelidi (Alpaca Liama e Cammelli), gettando le basi per la produzione di nanocorpi. Inoltre, può immunizzare anche animali comuni (come conigli bianchi neozelandesi, topi e altri animali) in base alla frequenza di immunizzazione richiesta e ai requisiti di immunogenicità dei clienti, estrarli e isolarli in PBMC e utilizzarli per esperimenti successivi (come lo sviluppo di anticorpi monoclonali, anticorpi policlonali, ecc.). I clienti possono fornire i propri immunogeni e noi effettueremo rigorosi controlli di qualità su di essi. Se i clienti forniscono immunogeni virali, questi devono essere inattivati e noi effettueremo test di inattivazione per garantirne la sicurezza. Allo stesso tempo, possiamo anche personalizzare gli immunogeni corrispondenti in base alle esigenze del cliente.

Introduzione all'immunizzazione animale

Nella produzione di anticorpi di origine animale, come anticorpi monoclonali, anticorpi policlonali e nanobodies, il primo passo è immunizzare gli animali e ottenere le corrispondenti cellule B, anticorpi o PBMC per preparare l'ulteriore produzione di anticorpi, promuovere la ricerca scientifica di base, sviluppare strumenti diagnostici clinici e facilitare la scoperta e lo sviluppo di nuovi farmaci. Cammelli, alpaca, Liama e altri cammelli della famiglia Camelidae possono produrre librerie di nanobody (anticorpi a dominio singolo) attraverso la raccolta di sangue immune e l'estrazione di PBMC. Conigli e altri animali possono essere immunizzati e gli anticorpi possono essere estratti dai loro corpi. Dopo la purificazione, possono essere utilizzati per produrre anticorpi policlonali. Topi, ratti, ecc. possono essere utilizzati per produrre anticorpi monoclonali fondendo le cellule B immuni estratte con cellule di mieloma. Prima dell'immunizzazione, è necessario prestare attenzione ai principi delle 3R (sostituzione, riduzione, raffinamento), che possono ridurre significativamente il numero di animali utilizzati al minimo necessario, migliorare le procedure sperimentali e minimizzare la sofferenza degli animali. È inoltre necessario seguire un'adeguata progettazione sperimentale, la selezione di anticorpi appropriati e rigorose procedure di convalida.

Classificazione degli immunogeni - produzione di nanocorpi

Tipi di immunogeni	Esempio	Preparazione immunogena	Note
immunogeni proteici	Enzimi, proteine, tossine batteriche e altre sostanze	Scegli diversi sistemi di espressione proteica: E. coli, lievito, cellule di insetto, cellule di mammifero e sistema acellulare	Prestare attenzione a fattori come temperatura, tempo, pH e corpi di inclusione che influenzano l'espressione proteica
immunogeni degli acidi nucleici	DNA, RNA	Immunogeno del DNA: costruire DNA plasmidico, clonare vettori di espressione adatti per i geni bersaglio, coltivare cellule per amplificare il DNA plasmidico ed estrarre DNA plasmidico ad alta purezza Immunogeno RNA: necessità di aggiungere la struttura del cappello e la coda di PolyA per prevenire la degradazione	Quando si preparano immunogeni del DNA, occorre prestare attenzione alle cellule ospiti appropriate, mentre quando si preparano immunogeni dell'RNA, occorre fare attenzione a prevenire la degradazione dell'RNA.
immunogeni virali	Vaccino inattivato a virus intero, vaccino subunitario, vaccino a vettore virale (adenovirus, lentivirus, ecc.), vaccino mRAN.	Quando si prepara un vaccino inattivato a virus intero, il virus viene prima inattivato per aumentarne la sicurezza. I test di tossicità vengono utilizzati per determinare se l'inattivazione è completa. I vaccini a subunità richiedono solo le proteine di superficie del virus come antigeni e devono considerare l'efficacia immunitaria.	Per ottenere effetti immunitari è necessario aggiungere adiuvanti, prestare attenzione al virus che deve essere inattivato, sono richiesti titoli virali appropriati per garantire effetti immunitari e la sicurezza del processo di preparazione deve essere rigorosamente controllata.

Processo o cronologia dell'immunizzazione animale

Selezione degli animali e preparazione degli antigeni

Selezione degli animali: selezionare alpaca di età idonea e con fisico sano da gruppi sani, ed effettuare esami del sangue e screening delle malattie per assicurarsi che non vi siano malattie infettive o altri problemi di salute.

Preparazione degli immunogeni: gli immunogeni sono fondamentali per indurre risposte immunitarie e richiedono la selezione di proteine, peptidi o altre sostanze adatte in base ai requisiti dell'anticorpo bersaglio.

Un alpaca può essere immunizzato con 1-3 antigeni contemporaneamente, con una quantità totale di antigene di 1-2 mg per immunizzazione e un volume inferiore a 2 ml. Prima dell'immunizzazione, l'antigene e l'adiuvante vengono emulsionati in un rapporto 1:1 per formare una miscela uniforme, che viene conservata a 4 °C.

Alpaca immunologica

Registrare il numero dell'orecchio dell'alpaca e iniziare l'esperimento di immunizzazione. Iniettare nei linfonodi vicino al collo dell'alpaca su entrambi i lati, con 2 punti per lato e circa 0,4 ml di antigene emulsionato iniettati in ciascun punto. Dopo l'immunizzazione, osservare per mezz'ora per confermare che l'alpaca non presenti sintomi di disagio. L'immunizzazione deve essere somministrata ogni 2 settimane, con almeno 4 vaccinazioni.

Raccolta del sangue

Dopo 4 immunizzazioni per 5-7 giorni, raccogliere 50 ml di sangue dalla vena del collo dell'alpaca.

Separazione del siero

Campioni di sangue vengono raccolti per la valutazione immunitaria prima di ogni immunizzazione antigenica, prelevando 5 ml di sangue ogni volta; lo stesso giorno, il sangue è stato centrifugato a 400 xg per 30 minuti utilizzando una centrifuga preraffreddata a 25 °C. Lo strato superiore di siero è stato separato e conservato per la successiva analisi del titolo anticorpale.

Linfociti separati

Aggiungere prima 15 mL di soluzione di separazione cellulare, quindi aggiungere lentamente 15 mL di sangue in una provetta da centrifuga da 50 mL. Prestare attenzione e procedere lentamente durante l'aggiunta del sangue per evitare che si mescolino con la soluzione di separazione. Centrifugare preraffreddato a 25 °C, centrifugare a 400 xg per 30 minuti e conservare il siero superiore in una nuova provetta da centrifuga a -80 °C; utilizzare una pipetta per aspirare le cellule immunitarie dello strato superiore a forma di cotone intermedio in una nuova provetta da centrifuga da 50 mL. Aggiungere 10 mL di tampone PBS a temperatura ambiente a ciascuna provetta, centrifugare a 25 °C e 400 xg per 20 minuti. Rimuovere il surnatante, aggiungere 5 mL di tampone PBS a temperatura ambiente a ciascuna provetta, mescolare delicatamente, calcolare il numero di cellule utilizzando un emocitometro e quindi centrifugare a 25 °C e 400 xg per 20 minuti. Rimuovere il surnatante e sciogliere i linfociti ottenuti con RNAiso Plus in base al numero di cellule per ottenere 10 ^ 7/mL di lisato cellulare, che viene conservato a -80 ℃.

Fig. 1: Rappresentazione schematica delle diverse strategie di scoperta degli anticorpi e delle relative fasi sperimentali. (Fonte della figura:Laustsen, Andreas H. et al.)

I clienti forniscono immunogeni - rigoroso controllo di qualità

Tipi di immunogeni	Requisito	Metodo di controllo di qualità
Campioni di peptidi/piccole molecole	Condizioni di dissoluzione (principalmente a seconda che inattivino o meno i fagi), struttura molecolare/sequenza peptidica, rapporto di sintesi (HPLC/MS/HNMR)	Rilevazione HPLC/MS
Campioni di proteine	SDS-PAGE/WB, condizioni di ricostituzione, tampone, informazioni sull'etichetta, quantità totale (20-50 ug), concentrazione, purezza, ecc.	SDS-PAGE/WB
Campioni cellulari	Tipo di cellula (cellule primarie/cellule geneticamente modificate), forma cellulare (fresca/congelata/scongelata), tipo di crescita (aderente/sospesa), requisiti del terreno di coltura, numero di cellule fornite, numero di cellule fornite, cellule geneticamente modificate per garantire un'espressione stabile dei target di screening (anticorpo primario corrispondente del cliente), cellule congelate/scongelate per determinare il tasso di recupero	Mira principalmente a cellule geneticamente modificate, utilizzando anticorpi primari forniti dal cliente per l'identificazione ELISA dell'espressione target (la nostra azienda fornisce anticorpi secondari HRP), rilevamento tramite citometria a flusso (la nostra azienda può fornire anticorpi secondari fluorescenti).

Quali sono le applicazioni dell'immunità animale?

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Gli anticorpi policlonali possono essere prodotti mediante immunizzazione degli animali, gli anticorpi monoclonali possono essere prodotti fondendo le cellule B con le cellule del mieloma e i PBMC possono essere estratti da fonti di cammello (alpaca, cammello, alpaca, ecc.) per produrre varie forme di frammenti di anticorpi come nanobodies, frammenti Fab, frammenti di anticorpi scFv, ecc.
Quali sono le precauzioni per l'immunità degli animali?

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Per produrre nanoanticorpi per animali derivati da cammelli, sono necessarie 5-6 immunizzazioni. Campioni di sangue devono essere raccolti come controllo prima dell'immunizzazione, con un intervallo di 2 settimane tra ogni immunizzazione. Dopo la quarta immunizzazione, è necessario raccogliere campioni di sangue positivi e negativi non immunizzati per il test ELISA al fine di determinare il titolo anticorpale. Se il titolo è inferiore a 10^6, il numero di immunizzazioni deve essere aumentato fino a raggiungere un livello appropriato. Per altre immunizzazioni animali come l'immunizzazione dei conigli (il livello ottimale o comune di antigene proteico per l'immunizzazione dei conigli è 50-1000 ug), l'immunizzazione dei topi (il livello ottimale o comune di antigene proteico per l'immunizzazione dei topi è 5-50 ug, che richiede 10^6 cellule se si tratta di una cellula e 10-50 ug per l'acido nucleico o i carboidrati), l'immunizzazione delle capre (il livello ottimale o comune di antigene proteico per l'immunizzazione delle capre è 250-5000 ug), ecc., occorre prestare attenzione al dosaggio, alla sicurezza e all'efficacia degli immunogeni.
Come scegliere gli animali immuni?

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A seconda del tipo di anticorpo richiesto dal cliente, se è necessario produrre nanocorpi o altri frammenti di anticorpi, è possibile scegliere animali derivati da cammelli (cammelli, alpaca, ecc.) per l'immunizzazione. Se è necessario produrre anticorpi monoclonali o policlonali, è necessario selezionare la specie corrispondente in base alla quantità di siero, all'antigene e alla fonte dell'antigene. La quantità massima di siero per i conigli è di 500 ml, che richiede una bassa quantità di antigene ed è la scelta principale per la produzione di anticorpi policlonali. La quantità massima di siero per i topi è di 2 ml e la quantità massima di siero per i ratti è di 20 ml, che di solito è la scelta ottimale per gli anticorpi monoclonali. Gli anticorpi prodotti da capre hanno un'elevata affinità e Alpha Lifetech può personalizzare un piano di immunizzazione esclusivo per voi in base alle vostre esigenze.
Gli antigeni devono essere utilizzati insieme agli adiuvanti? Come scegliere?

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Esistono due tipi di adiuvanti: a base oleosa e a base acquosa. Un uso razionale degli adiuvanti è fondamentale per indurre risposte anticorpali efficaci contro gli antigeni solubili. Il rilascio prolungato degli adiuvanti consente di utilizzare dosi inferiori di antigeni e di ottenere risposte anticorpali più durature. La prima iniezione deve essere somministrata in combinazione con un adiuvante. Generalmente, si raccomanda l'uso dell'adiuvante di Freund quando la quantità di immunogeno è ridotta.
Precauzioni per l'immunizzazione dell'alpaca?

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(1) La selezione dell'alpaca e dell'antigene dell'immunità sono la chiave per un'immunizzazione efficace. Non è consigliabile scegliere un cammello ben proporzionato. La purezza e la corretta conformazione degli antigeni immunitari sono cruciali per lo screening di anticorpi idonei per le successive applicazioni dopo l'immunizzazione con alpaca. La purezza degli antigeni proteici è generalmente non inferiore al 90%.

(2) Separazione dei linfociti: la separazione tempestiva delle cellule può prevenire efficacemente l'emolisi dopo il prelievo del sangue per ottenere il miglior effetto di separazione.

(3) Il ciclo immunitario può influenzare la risposta immunitaria: un intervallo immunitario di 1-2 settimane consente agli alpaca di avere una buona risposta immunitaria alla maggior parte degli antigeni.

adiuvante sviluppato indipendentemente

La nostra formula esclusiva di adiuvanti è stata ottimizzata per il sistema immunitario dell'alpaca, garantendo maggiore potenza e specificità rispetto agli adiuvanti tradizionali.

Somministrazione delle vaccinazioni
standard

Ci impegniamo a completare l'immunizzazione entro i tempi stabiliti, a fornire siero ad alto titolo e a registrare ogni passaggio attraverso resoconti dettagliati.

Controllo di qualità del progetto

Ogni progetto è sottoposto a rigorosi processi di controllo qualità per garantire ai clienti la consegna di anticorpi che soddisfano elevati standard.

chiaramenteAlpacaSfondo

Disponiamo di una popolazione sana di alpaca che fornisce supporto a vari programmi di immunizzazione.

Per qualsiasi domanda non esitate a contattarci in qualsiasi momento.

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