Servizio di maturazione dell'affinità degli anticorpi

Alpha Lifetech Inc.Possiamo offrire il servizio di maturazione dell'affinità degli anticorpi utilizzando tecnologie di mutazione e selezione. Utilizziamo solitamente scFv come formato anticorpale nei processi di maturazione dell'affinità e un sistema fagemidico monovalente, utilizzato per ridurre gli effetti di avidità durante lo screening del legame antigenico. Il nostro team di professionisti può fornire servizi di maturazione dell'affinità anche per anticorpi a dominio singolo.

Alpha Lifetech Inc.è orgogliosa di offrire servizi completi per soddisfare le diverse esigenze dei clienti globali. Il nostro obiettivo è comprendere e soddisfare le esigenze dei diversi clienti e fornire assistenza per qualsiasi problema emergente e futuro nell'attività di ricerca.

Che cosa è la maturazione dell'affinità?

La maturazione dell'affinità è il processo mediante il quale gli anticorpi subiscono ripetute mutazioni e selezioni per aumentare la loro affinità per specifici antigeni. Principalmente nel centro germinativo degli organi linfoidi secondari, i linfociti B subiscono ipermutazione somatica e selezione sotto l'influenza dei linfociti T e delle cellule dendritiche follicolari.
Durante il processo di maturazione dell'affinità, le cellule B con recettori di superficie delle immunoglobuline a bassa affinità vengono attivate dall'incontro con l'antigene e vanno incontro a proliferazione e differenziazione. Attraverso la maturazione dell'affinità per ipermutazione somatica, si verificano sostituzioni nucleotidiche casuali nella regione variabile dei geni delle immunoglobuline, che portano alla produzione di diverse varianti anticorpali. Dopo l'ipermutazione somatica, viene eseguita una selezione antigenica sulle cellule B con recettori delle immunoglobuline mutati. Le cellule B che producono anticorpi con maggiore affinità antigenica vengono preferibilmente trattenute e lasciate proliferare, mentre le cellule B con affinità ridotta o invariata vanno incontro ad apoptosi. Questo processo iterativo di mutazione e selezione porta alla produzione di cloni di cellule B, che producono anticorpi con affinità gradualmente maggiore per l'antigene.

Servizio di maturazione dell'affinità degli anticorpi

I principali vantaggi dei metodi basati sulla PCR sono che le mutazioni sono mirate con precisione al frammento amplificato; il tasso di errore è facilmente controllabile e il metodo è rapido e semplice da impostare, senza l'utilizzo di sostanze chimiche pericolose. È noto che la Taq DNA polimerasi duplica il DNA con bassa fedeltà, sostanzialmente a causa dell'assenza di attività di proofreading 3'-5'.Alpha LifetechLa piattaforma di ingegneria anticorpale applica un approccio PCR soggetto a errori per mutare principalmente le regioni CDR durante la costruzione della sottolibreria. Spesso creiamo mutazioni in posizioni completamente casuali nell'intero frammento VH e VL, al fine di aumentare la diversità genetica della sottolibreria. Dopo la costruzione di una libreria genica di anticorpi mutati tramite PCR soggetto a errori, la selezione delle varianti ad alta affinità (l'affinità degli anticorpi scFv può raggiungere 10^8 - 10^10 M) viene eseguita tramite panning in soluzione o su antigene immobilizzato con condizioni di lavaggio ottimizzate per la selezione dipendente dalla velocità di ossidazione.
  
Scienziati inAlpha Lifetech Inc.Utilizzare i ceppi mutatori di Escherichia coli mutAD5TM come una delle diverse strategie di mutazione per introdurre mutazioni casuali e quindi modificare l'affinità e l'espressione dei frammenti di anticorpi ricombinanti. Le condizioni di selezione possono essere modificate per i frammenti di anticorpi con livelli di produzione più elevati. Le condizioni di crescita nelle cellule mutatrici di Escherichia coli possono essere regolate per introdurre una singola mutazione puntiforme casuale per kilobase di DNA, quasi equivalente a un cambio di codone per frammento scFv. Dopo diversi cicli di mutazione, visualizzazione e selezione, possiamo migliorare la costante di affinità da 105-106 M a 108-1010 M.

Migliorare le strategie di maturazione dell'affinità

Alcune posizioni degli anticorpi possono essere randomizzate con una diversità definita (ad esempio, randomizzazione completa con tutti i 20 amminoacidi o randomizzazione distorta con amminoacidi selezionati a percentuali fisse) per migliorarne l'affinità. Disponiamo di due strategie per migliorare l'affinità degli anticorpi: in primo luogo, le mutazioni vengono introdotte in posizioni ristrette nelle regioni che determinano la complementarietà (CDR) mediante mutagenesi sito-specifica; in secondo luogo, le mutazioni vengono introdotte nell'intera regione codificante V mediante mutagenesi casuale. Utilizzando questi due metodi, le sequenze amminoacidiche conservate o l'intera regione strutturale dell'anticorpo saranno sostituite da altri amminoacidi, il che, combinato con le nostre tecnologie di scansione delle librerie peptidiche, potrebbe aumentare notevolmente l'affinità degli anticorpi di interesse a un livello molto elevato.

Affinità anticorpale-Phage Display

Una volta costruita la libreria di mutanti scFv, sono disponibili due strategie di screening: il biopanning e il sorting dell'antigene solido. Nel primo caso, si utilizza una concentrazione sottrattiva del substrato per isolare l'anticorpo ad alta affinità, poiché i mutanti a bassa affinità verrebbero eliminati, lasciando le particelle fagiche ad alta avidità. La seconda strategia utilizza un antigene marcato in soluzione, una selezione basata sulla costante di equilibrio (Kd) e una selezione basata sulla cinetica di legame; questo approccio di selezione individua le varianti anticorpali con Kd migliorata.

Per qualsiasi domanda non esitate a contattarci in qualsiasi momento.