Servizio di analisi e caratterizzazione degli aptameri

L'affinità ottimizzata dell'aptamero è stata verificata mediante tecniche appropriate, come il saggio di legame dell'aptamero. Esempi includono la calorimetria di titolazione isotermica (ITC), la citometria a flusso (FCM), la risonanza plasmonica di superficie (SPR), la microfluidica, ecc. L'affinità dell'aptamero è solitamente espressa dalla costante di dissociazione (KD), una grandezza fisica utilizzata per quantificare il grado di dissociazione molecolare in una reazione reversibile. Minore è il valore di KD, più stabile è il complesso, ovvero maggiore è l'affinità; al contrario, maggiore è il valore di KD, più instabile è il complesso e più debole è l'affinità. Questa fase è fondamentale per identificare le prestazioni dell'aptamero, garantendo la maturazione dell'affinità dell'aptamero e la sua capacità di legarsi alla molecola bersaglio con elevata affinità e selettività nelle applicazioni pratiche.

Figura 1. Processo di maturazione dell'affinità dell'aptamero. Fonte di riferimento:Kinghorn AB, Fraser LA, 2017.

Oltre alla verifica dell'affinità, è necessario verificare anche la funzionalità dell'aptamero. Ciò include la verifica della stabilità, della specificità e delle interazioni dell'aptamero con altre molecole in un determinato ambiente. I risultati della verifica funzionale influenzeranno direttamente il valore degli aptameri nella ricerca scientifica e nelle applicazioni industriali.

Verifica specifica

Il metodo appropriato viene solitamente selezionato in base allo specifico obiettivo applicativo dell'aptamero dell'acido nucleico.

(1) Test a livello molecolare: Utilizzo di tecniche di biologia molecolare, come l'elettroforesi su gel, il Western blot, ecc., per rilevare i complessi formati dopo che l'aptamero si combina con la molecola bersaglio, o rilevare i cambiamenti nel livello di espressione della molecola bersaglio causati dall'aptamero.

(2) Test a livello cellulare: Utilizzando la tecnologia di coltura cellulare, gli aptameri vengono incubati con le cellule bersaglio per osservare i cambiamenti biologici come la morfologia cellulare, la proliferazione e l'apoptosi e valutare l'attività biologica degli aptameri.

(3) Test su modelli animali: In modelli animali appropriati, gli aptameri degli acidi nucleici vengono somministrati tramite iniezione o somministrazione di farmaci e si osservano gli indicatori fisiologici e i cambiamenti patologici degli animali per valutare l'attività biologica e la sicurezza degli aptameri in vivo.