Servizio di ottimizzazione degli aptameri
Alpha Lifetech si impegna a fornire ai propri clienti servizi accurati ed efficienti di screening e ottimizzazione degli aptameri per acidi nucleici.
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Servizio di ottimizzazione degli aptameri
Gli aptameri sono oligonucleotidi a catena singola in grado di legarsi specificamente alle molecole bersaglio. Formano una specifica struttura tridimensionale dopo un ripiegamento adattivo attraverso varie forze di interazione, come l'appaiamento complementare delle basi nucleotidiche, i legami idrogeno, l'impilamento π-π, la forza elettrostatica, ecc. Questa struttura si lega specificamente alle molecole bersaglio tramite forze intermolecolari. Gli aptameri vengono solitamente prodotti tramite screening SELEX. I metodi di ottimizzazione degli aptameri si concentrano principalmente sul miglioramento dell'affinità, della selettività e della stabilità degli aptameri.
Alpha Lifetech si impegna a fornire ai propri clienti servizi accurati ed efficienti di screening e ottimizzazione di aptameri per acidi nucleici. Il processo di screening e ottimizzazione non è solo una fase chiave per ottenere aptameri di alta qualità, ma anche un fondamento importante per lo sviluppo di queste applicazioni. Alpha Lifetech continua a introdurre tecnologie all'avanguardia e a ottimizzare i processi di servizio per garantire che i propri servizi siano sempre in prima linea nel settore e offrano ai clienti un'esperienza più efficiente nello screening e nell'ottimizzazione di aptameri per acidi nucleici.
Selezione di aptameri SELEX
Da molti anni Alpha Lifetech si concentra sullo sviluppo di aptameri per acidi nucleici, principalmente nelle seguenti fasi: progettazione di aptameri per acidi nucleici, costruzione di librerie di aptameri per acidi nucleici, screening di aptameri per acidi nucleici e sintesi di aptameri per acidi nucleici.
La tecnica di screening SELEX è il metodo principale per la selezione degli aptameri. Alpha Lifetech offre non solo la selezione di aptameri tramite SELEX, ma anche altri metodi basati sulla tecnologia SELEX, come Cell-SELEX, CE-SELEX, Capture-SELEX, ecc. Attraverso lo screening in vitro degli aptameri, si ottengono quelli in grado di identificare specificamente la molecola bersaglio e che presentano un'elevata affinità per essa. Successivamente, gli aptameri selezionati vengono sottoposti a sequenziamento ad alto rendimento e, infine, sintetizzati tramite sintesi chimica in vitro. Inoltre, Alpha Lifetech è in grado di ottimizzare gli aptameri selezionati e di verificarne le funzionalità.
Introduzione all'ottimizzazione degli aptameri
Sebbene gli aptameri di acidi nucleici selezionati mediante la tecnologia SELEX mostrino una forte affinità per le molecole bersaglio, nelle applicazioni pratiche è ancora necessario ottimizzarli per migliorarne ulteriormente la specificità, l'affinità e la stabilità, al fine di soddisfare le esigenze di specifici scenari applicativi.
I principali metodi di ottimizzazione degli aptameri includono i seguenti aspetti:
Taglio della struttura
Troncamento: rimuovendo le parti della sequenza dell'aptamero che non influenzano o influenzano in minima parte la capacità di legame con la molecola bersaglio, preservando l'area di riconoscimento centrale, è possibile accorciare la lunghezza dell'aptamero e migliorarne l'efficienza di sintesi e la stabilità.
Basandosi sulla simulazione della struttura secondaria e su tentativi ed errori empirici, la struttura superiore locale dell'aptamero (come l'anello dello stelo, la pseudogiunzione, il G-quadrupletto, ecc.) è stata definita artificialmente, le catene singole non formate o accoppiate sono state rimosse, lo stelo è stato accorciato, i piccoli anelli convessi sono stati rimossi, gli anelli sono stati ridotti, ecc. La tecnologia di docking molecolare viene utilizzata per prevedere la struttura tridimensionale dell'aptamero e della molecola bersaglio per una personalizzazione più accurata.
Introduzione della mutazione
mutazione casualeUtilizzando tecniche di mutagenesi (come la mutagenesi PCR) per introdurre mutazioni casuali nella sequenza dell'aptamero e sottoponendolo a un nuovo screening tramite la tecnologia SELEX, è possibile ottenere mutanti con maggiore affinità e selettività. Questo metodo permette di esplorare la diversità delle sequenze di aptameri e di scoprire nuovi modelli di legame e direzioni di ottimizzazione.
mutazione sito-specificaSulla base dell'analisi strutturale e della previsione del sito di legame, vengono selezionati possibili siti di mutazione per la sostituzione di una singola base o di più basi, al fine di esplorare gli effetti di diverse sequenze sulle prestazioni dell'aptamero. La mutazione sito-specifica consente di controllare con precisione i cambiamenti strutturali dell'aptamero per ottimizzarne le prestazioni.
modificazione chimica
L'aptamero viene modificato chimicamente e vengono introdotti gruppi di modificazione in diverse posizioni dell'aptamero (come base, anello dello zucchero, gruppo fosfato, ecc.) per migliorarne la stabilità, la capacità antinucleasica e l'affinità.
Fig.1 Modifiche comuni degli aptameri. (Fonte di riferimento:Libro "Acidi nucleici", Capitolo "Aptameri degli acidi nucleici"
Le modifiche più comuni includono 2'-fluororibosio, 2'-amminoribosio, 2'-o-metilribosio, LNA (acido nucleico bloccato) e acido nucleico purinico non metilato (UNA). Queste modifiche possono ridurre il riconoscimento da parte delle nucleasi, aumentare la capacità degli aptameri di resistere alla degradazione o alterare le loro proprietà di legame alle molecole bersaglio.
Introduzione all'area funzionale
L'aptamero è dotato di nuove funzioni, come l'attività enzimatica e la capacità di segnalare la fluorescenza. La regione di legame del ligando viene combinata con la regione catalitica per produrre un aptamero con attività enzimatica. Ad esempio, l'aggiunta di regioni che si legano a molecole che emettono fluorescenza crea un aptamero auto-segnalante che emette un segnale fluorescente dopo il legame con il bersaglio.
KACHI
Vantaggi del servizio di ottimizzazione degli aptameri
Controllo totale della qualità
Aptameri ottimizzati con maggiore stabilità
Economico ed efficiente. Prezzo più competitivo, servizio migliore.
Diversi metodi di ottimizzazione
Servizi professionali di consulenza pre-vendita e assistenza post-vendita.
Vasta esperienza nell'ottimizzazione degli aptameri
Team di ricerca e sviluppo di alto livello
Servizi personalizzati di ottimizzazione degli aptameri
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