Piattaforma per lo sviluppo di anticorpi tramite visualizzazione fagica

Alpha Lifetech, grazie alla sua vasta esperienza nella scoperta di anticorpi, è in grado di fornire servizi personalizzati per la produzione di anticorpi monoclonali e policlonali per diverse specie, nonché servizi di costruzione e screening di librerie di anticorpi. Alpha Lifetech offre ai propri clienti prodotti a base di anticorpi e anticorpi ricombinanti di qualità garantita, insieme ai relativi servizi, per la preparazione di anticorpi efficienti, altamente specifici e stabili. Utilizzando piattaforme e tecniche di ingegneria anticorpale complete, forniamo servizi che coprono tutte le fasi della produzione di anticorpi, inclusi servizi tecnici come la preparazione, la purificazione, il sequenziamento e la validazione degli anticorpi.

Alpha Lifetech possiede una piattaforma matura per la scoperta di anticorpi che offre ai clienti una gamma di servizi, tra cui immunità animale, costruzione e screening di librerie di anticorpi tramite phage display, sequenziamento, espressione, purificazione, validazione ed etichettatura di anticorpi basati su tecnologie di ibridoma, cellule B singole, phage display e altro ancora. Alpha Lifetech dispone di una linea di produzione standard e, oltre ai servizi di preparazione di anticorpi, offre anche servizi di supporto come umanizzazione, maturazione dell'affinità, progettazione e sviluppo di farmaci ADC e successiva progettazione della sequenza CAR-T. Allo stesso tempo, Alpha Lifetech ha costruito una libreria di anticorpi basata su piattaforme tecnologiche di phage display M13, T4 e T7, con una capacità di archiviazione fino a 10^8-10^9. Il tasso di positività, il tasso di inserzione e la diversità della libreria possono raggiungere oltre il 90%.

Tecnologia di visualizzazione dei fagi

La produzione di anticorpi monoclonali è stata inizialmente realizzata utilizzando la tecnologia degli anticorpi monoclonali ibridoma per produrre anticorpi monoclonali ibridoma di topo. Nello specifico, fondendo cellule spleniche di topi immunizzati con cellule di mieloma umane o murine, si formano cellule ibridoma che secernono anticorpi monoclonali ibridoma specifici. Attraverso la modificazione umanizzante degli anticorpi monoclonali di topo e la modificazione genetica degli anticorpi per conferire loro una regione immunoglobulinica umana costante, è possibile ridurne l'immunogenicità. L'ingegneria degli anticorpi monoclonali è ampiamente utilizzata in applicazioni biomediche e cliniche.

Alpha Lifetech offre servizi completi di ingegneria anticorpale, dalla progettazione del protocollo di ricerca preclinica alla scoperta di coniugati anticorpo-farmaco (ADC) e alla validazione su animali. I coniugati anticorpo-farmaco (ADC) sono in grado di veicolare farmaci chemioterapici alle cellule tumorali. Dopo essersi legati a specifici bersagli espressi sulle cellule tumorali, gli ADC rilasciano farmaci citotossici al loro interno. Alpha Lifetech fornisce inoltre ai propri clienti servizi completi di maturazione dell'affinità anticorpale. Grazie all'ottimizzazione avanzata delle mutazioni e alla tecnologia di screening ad alto rendimento con display fagico, vengono inizialmente selezionati anticorpi con una determinata affinità, sui quali vengono poi introdotte mutazioni aminoacidiche per generare diverse varianti. Successivamente, gli anticorpi ad alta affinità vengono valutati e selezionati mediante tecniche di screening. Dopo molteplici cicli di ottimizzazione e analisi strutturale, si ottengono infine anticorpi con maggiore affinità e specificità.

Alpha Lifetech è in grado di costruire diverse tipologie di librerie di anticorpi basate sulla tecnologia del phage display, tra cui librerie immunitarie, native, semisintetiche e sintetiche. Grazie all'elevata capacità delle librerie di anticorpi, è possibile ottenere anticorpi altamente specifici. Sono disponibili diversi vettori fagemidici, come pMECS, pComb3X e pCANTAB 5E, nonché ceppi come TG1 E. coli, XL1 Blue ed ER2738. Oltre a una capacità della libreria fino a 10^9, anche il tasso di inserimento del frammento target è elevato, creando le condizioni ideali per lo screening degli anticorpi, soddisfacendo così le esigenze dei clienti. Il diagramma di flusso del servizio di preparazione di anticorpi di Alpha Lifetech basato sulla tecnologia del phage display è illustrato nella Figura 1.

Figura 1. Schema di processo per la preparazione di anticorpi monoclonali basati sulla tecnologia del phage display.

Flusso di lavoro per la produzione di anticorpi tramite visualizzazione fagica

Passaggi	Contenuto del servizio	cronologia
Fase 1: Immunizzazione degli animali	(1) Immunizzazione animale 4 volte, immunizzazione di richiamo 1 dose, per un totale di 5 dosi di immunizzazione. (2) È stato raccolto il siero negativo prima dell'immunizzazione ed è stato eseguito un test ELISA sulla quarta dose per rilevare il titolo sierico. (3) Se il titolo anticorpale sierico della quarta dose soddisfa i requisiti, verrà somministrata una dose aggiuntiva di immunizzazione 7 giorni prima del prelievo di sangue. Se non soddisfa i requisiti, l'immunizzazione di routine continuerà. (4) Potenza qualificata, raccolta del sangue e separazione dei monociti	10 settimane
Fase 2: Preparazione del cDNA	(1) Estrazione dell'RNA totale delle PBMC (Kit di estrazione dell'RNA) (2) Preparazione di cDNA mediante RT-PCR ad alta fedeltà (kit di trascrizione inversa)	1 giorno
Fase 3: Costruzione della libreria di anticorpi	(1) Utilizzando il cDNA come stampo, i geni sono stati amplificati mediante due cicli di PCR. (2) Costruzione e trasformazione di fagi: vettore fagemidico per lo splicing genico, trasformazione mediante elettroporazione di batteri ospiti TG1, costruzione di una libreria di anticorpi. (3) Identificazione: Selezionare casualmente 24 cloni, tasso di positività dell'identificazione PCR + tasso di inserzione. (4) Preparazione assistita del fago: amplificazione e purificazione del fago M13. (5) Salvataggio della libreria di visualizzazione dei fagi	3-4 settimane
Fase 4: Screening della libreria di anticorpi (3 cicli)	(1) Screening predefinito a 3 fasi (screening in fase solida): screening a pressione per rimuovere gli anticorpi non specifici nella massima misura possibile. (2) Amplificazione di un singolo clone con batteriofago selezionato + espressione indotta da IPTG + rilevamento ELISA dei cloni positivi. (3) Tutti i cloni positivi sono stati selezionati per il sequenziamento genico.	4-5 settimane

Vantaggi della tecnologia di visualizzazione dei fagi

Alpha Lifetech vanta una solida esperienza nel campo dello sviluppo di anticorpi. Nel corso degli anni, Alpha Lifetech ha creato una piattaforma completa per lo sviluppo di anticorpi.

Servizi di supporto

In base alle esigenze del cliente, possiamo fornire diversi servizi di costruzione di librerie immunitarie basate su animali e servizi di screening di librerie di anticorpi naturali.

Bersaglio multiplo

Sono disponibili servizi di scoperta di anticorpi mirati a diversi bersagli: proteine, peptidi, piccole molecole, virus, proteine di membrana, mRNA, ecc.

Vettori multipli

Offriamo un servizio personalizzato di costruzione di librerie, fornendo diversi vettori batteriofagici tra cui PMECS, pComb3X e pCANTAB 5E, e modificandoli in base alle esigenze del cliente.

Piattaforma matura

La capacità di stoccaggio può raggiungere 10^8-10^9, i tassi di inserimento sono tutti superiori al 90% e l'affinità degli anticorpi ottenuti tramite screening è generalmente a livello di nM pM

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Siamo in grado di fornire servizi di sviluppo di anticorpi monoclonali di alta qualità, elevata purezza e alta specificità, inclusa la produzione di anticorpi monoclonali di topo e anticorpi monoclonali di coniglio.

Piattaforma tecnologica Hybrido

Tra cui programmi di immunizzazione, servizi di preparazione di anticorpi, purificazione di anticorpi, sequenziamento ad alto rendimento di anticorpi, validazione di anticorpi, ecc.

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Alpha Lifetech offre vantaggi in termini di tempi di screening e ottenimento di anticorpi di alta qualità. È in grado di fornire servizi di progettazione, sintesi e modifica di antigeni, immunità animale, screening di arricchimento di singole cellule B e sequenziamento di singole cellule.