Piattaforma di sviluppo di anticorpi Phage Display

Alpha Lifetech, grazie alla sua vasta esperienza progettuale nella scoperta di anticorpi, è in grado di fornire servizi personalizzati per anticorpi monoclonali e policlonali per diverse specie, nonché servizi di creazione e screening di librerie anticorpali. Alpha Lifetech è in grado di fornire ai clienti anticorpi e anticorpi ricombinanti di qualità garantita, nonché servizi correlati, per la preparazione di anticorpi efficienti, altamente specifici e stabili. Utilizzando piattaforme anticorpali complete e un'ingegneria anticorpale completa, forniamo servizi che coprono l'intero processo di produzione di anticorpi, inclusi servizi tecnici come la preparazione, la purificazione, il sequenziamento e la convalida degli anticorpi.

Alpha Lifetech dispone di una piattaforma matura per la scoperta di anticorpi che offre ai clienti una vasta gamma di servizi, tra cui immunità animale, costruzione e screening di librerie di anticorpi per phage display, sequenziamento di anticorpi, espressione di anticorpi, purificazione di anticorpi, validazione di anticorpi e marcatura di anticorpi basata sulla tecnologia degli ibridomi, tecnologia delle singole cellule B, tecnologia phage display e altro ancora. Alpha Lifetech dispone di una linea di produzione standard e, oltre ai servizi di preparazione di anticorpi, può fornire anche servizi di supporto come umanizzazione di anticorpi, maturazione dell'affinità di anticorpi, progettazione e sviluppo di farmaci ADC e progettazione di sequenze successive per CAR-T. Allo stesso tempo, Alpha Lifetech ha costruito una libreria di anticorpi basata sulle piattaforme tecnologiche phage display M13, T4 e T7, con una capacità di archiviazione fino a 10^8-10^9. Il tasso di positività, il tasso di inserimento e la diversità della libreria possono superare il 90%.

Tecnologia di visualizzazione dei fagi

La produzione di anticorpi monoclonali è stata inizialmente preparata utilizzando la tecnologia degli anticorpi monoclonali da ibridoma per produrre anticorpi monoclonali da ibridoma murino. Nello specifico, fondendo cellule spleniche di topi immunizzati con cellule di mieloma umano o di topo, si formano cellule di ibridoma che secernono anticorpi monoclonali da ibridoma specifici. Attraverso la modificazione umanizzata degli anticorpi monoclonali murini e la modificazione genetica degli anticorpi per conferire loro una regione immunoglobulinica umana costante, è possibile ridurne l'immunogenicità. L'ingegneria degli anticorpi monoclonali è ampiamente utilizzata in applicazioni biomediche e cliniche.

Alpha Lifetech è in grado di fornire servizi completi di ingegneria anticorpale, dalla progettazione di protocolli di ricerca preclinica alla scoperta di coniugati farmaco-anticorpo (ADC) e alla validazione su animali. I coniugati farmaco-anticorpo (ADC) possono veicolare farmaci chemioterapici alle cellule tumorali. Dopo essersi legati a specifici target espressi sulle cellule tumorali, gli ADC rilasciano i farmaci citotossici nelle cellule tumorali. Alpha Lifetech può anche offrire ai clienti servizi completi di maturazione dell'affinità anticorpale. Grazie all'ottimizzazione avanzata delle mutazioni e alla tecnologia di screening phage display ad alto rendimento, vengono prima analizzati gli anticorpi con una determinata affinità, quindi vengono introdotte mutazioni amminoacidiche per generare diverse varianti. Successivamente, gli anticorpi ad alta affinità sono stati valutati e sottoposti a screening utilizzando tecniche di screening. Dopo diversi cicli di ottimizzazione e analisi strutturale, sono stati infine ottenuti anticorpi con maggiore affinità e maggiore specificità.

Alpha Lifetech è in grado di costruire diverse tipologie di librerie di anticorpi phage display, tra cui librerie immunitarie, librerie native, librerie semisintetiche e librerie sintetiche. Grazie all'elevata capacità delle librerie di anticorpi, è possibile ottenere anticorpi altamente specifici. Sono disponibili diversi vettori fagemidici come pMECS, pComb3X e pCANTAB 5E, nonché ceppi come E. coli TG1, XL1 Blue ed ER2738. Oltre a una capacità di libreria fino a 10^9, anche l'elevata velocità di inserimento dei frammenti target della libreria è elevata, creando condizioni sufficienti per lo screening di anticorpi che soddisfano le esigenze dei clienti. Il diagramma di flusso del servizio di preparazione di anticorpi di Alpha Lifetech basato sulla tecnologia phage display è illustrato nella Figura 1.

Fig.1 Diagramma del processo per la preparazione di anticorpi monoclonali basato sulla tecnologia phage display.

Flusso di lavoro per la produzione di anticorpi Phage Display

Passi	Contenuto del servizio	Cronologia
Fase 1: Immunizzazione degli animali	(1) Immunizzazione animale 4 volte, immunizzazione di richiamo 1 dose, per un totale di 5 dosi immunizzate. (2) È stato raccolto il siero negativo prima dell'immunizzazione ed è stato eseguito l'ELISA sulla quarta dose per rilevare il titolo sierico. (3) Se il titolo anticorpale sierico della quarta dose soddisfa i requisiti, verrà somministrata un'ulteriore dose di immunizzazione 7 giorni prima del prelievo del sangue. In caso contrario, la vaccinazione di routine proseguirà. (4) Potenza qualificata, prelievo del sangue e separazione dei monociti	10 settimane
Fase 2: Preparazione del cDNA	(1) Estrazione di RNA totale da PBMC (kit di estrazione di RNA) (2) Preparazione RT-PCR ad alta fedeltà del cDNA (kit di trascrizione inversa)	1 giorno
Fase 3: Costruzione della libreria di anticorpi	(1) Utilizzando il cDNA come stampo, i geni sono stati amplificati mediante due cicli di PCR. (2) Costruzione e trasformazione del fago: vettore fagemidico per lo splicing genico, trasformazione mediante elettroporazione dei batteri ospiti TG1, costruzione della libreria di anticorpi. (3) Identificazione: selezionare casualmente 24 cloni, tasso di positività dell'identificazione PCR + tasso di inserimento. (4) Preparazione assistita del fago: amplificazione + purificazione del fago M13. (5) Salvataggio della libreria di visualizzazione dei fagi	3-4 settimane
Fase 4: Screening della libreria di anticorpi (3 round)	(1) Screening predefinito a 3 round (screening in fase solida): screening a pressione per rimuovere il più possibile gli anticorpi non specifici. (2) Amplificazione di un singolo clone di batteriofago selezionato + espressione indotta da IPTG + rilevamento ELISA di cloni positivi. (3) Tutti i cloni positivi sono stati selezionati per il sequenziamento genico.	4-5 settimane

Vantaggi della tecnologia di visualizzazione dei fagi

Alpha Lifetech vanta una vasta esperienza nel campo dello sviluppo di anticorpi. Nel corso degli anni, Alpha Lifetech ha sviluppato una piattaforma completa per lo sviluppo di anticorpi.

Servizi di supporto

Possiamo fornire diversi servizi di costruzione di librerie immunitarie basate su animali e servizi di screening di librerie di anticorpi naturali in base alle esigenze del cliente

Bersaglio multiplo

Sono disponibili servizi di scoperta di anticorpi a bersaglio multiplo: proteine, peptidi, piccole molecole, virus, proteine di membrana, mRNA, ecc.

Vettori multipli

Servizio di costruzione di biblioteche personalizzate, possiamo fornire vari vettori batteriofagi tra cui PMECS, pComb3X e pCANTAB 5E e modificarli in base alle esigenze del cliente

Piattaforma matura

La capacità di stoccaggio può raggiungere 10^8-10^9, i tassi di inserimento sono tutti superiori al 90% e l'affinità degli anticorpi ottenuti tramite screening è generalmente al livello nM pM

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sviluppo di anticorpi monoclonali - Alpha Lifetech

Servizio di sviluppo di anticorpi monoclonali

Possiamo fornire servizi di sviluppo di anticorpi monoclonali di alta qualità, elevata purezza e altamente specifici, inclusa la produzione di anticorpi monoclonali di topo e anticorpi monoclonali di coniglio

Piattaforma tecnologica degli ibridomi

Inclusi programmi di immunizzazione, servizi di preparazione di anticorpi, purificazione di anticorpi, sequenziamento ad alto rendimento di anticorpi, convalida di anticorpi, ecc.

Screening delle cellule B - Alpha Lifetech

Piattaforma di smistamento di singole cellule B

Alpha Lifetech offre vantaggi in termini di tempi di screening e di ottenimento di anticorpi di alta qualità. È in grado di fornire servizi di progettazione, sintesi e modifica di antigeni, immunità animale, screening di arricchimento di singole cellule B e sequenziamento di singole cellule.