Piattaforma di libreria peptidica Phage Display

Grazie alla tecnologia phage display, Alpha Lifetech può fornire ai clienti servizi di screening e costruzione di librerie peptidiche phage display di alta qualità, tra cui librerie peptidiche lineari 7, librerie peptidiche lineari 9, librerie peptidiche lineari 10, librerie peptidiche lineari 15, librerie peptidiche lineari 12, librerie peptidiche cicliche 7 e altre librerie peptidiche. La diversità delle librerie, il tasso di inserimento e il tasso positivo possono raggiungere oltre il 90%, per soddisfare le diverse esigenze dei vari clienti per le librerie peptidiche phage display.

Le librerie phage display sono ampiamente utilizzate nella ricerca e nelle applicazioni biomediche. Ad esempio, nell'ingegneria e nello sviluppo di anticorpi, le librerie phage display possono essere utilizzate per lo screening e il miglioramento delle varianti anticorpali; nello screening e nella scoperta di bersagli farmacologici, le librerie phage display possono essere utilizzate per la ricerca di proteine o peptidi con potenziale farmacologico. Nella ricerca sui vaccini, le librerie phage display possono essere utilizzate per la selezione dell'antigene e lo sviluppo di vaccini. Inoltre, le librerie phage display possono essere utilizzate anche in molti campi, come la ricerca sull'interazione proteica, la diagnosi e il trattamento del cancro.

Tecnologia Phage Display

La tecnologia "phage display" è una tecnologia che fonde il gene della proteina bersaglio con il gene della proteina di superficie del fago e rende la proteina bersaglio presente sulla superficie del fago sotto forma di proteina di fusione attraverso l'espressione genica. Queste proteine visualizzate sulla superficie del fago possono mantenere una struttura spaziale relativa e un'attività biologica e possono essere analizzate, rilevate e riconosciute interagendo con anticorpi specifici o altre molecole. Gli oggetti visualizzati dalla tecnologia "phage display" includono anticorpi, frammenti di anticorpi, segmenti peptidici, cDNA, ecc.

Il sistema di tecnologia di phage display include principalmente il sistema di fago display M13 (come il sistema di display PⅢ, il sistema di display PⅧ, ecc.), il sistema di display fagico λ, il sistema di display fagico T4, il sistema di display fagico T7, ecc. Ognuno di questi sistemi ha le sue caratteristiche ed è adatto a diverse esigenze di ricerca. Il fago M13, grazie alle sue proprietà lisogene, non lisa la cellula ospite dopo averla infettata, il che gli consente di replicarsi ed esprimere continuamente frammenti estranei al suo interno, il che lo rende adatto per lo screening a lungo termine e l'espressione stabile. Grazie al suo breve ciclo di vita e all'elevata efficienza di replicazione, il fago T7 può produrre rapidamente un gran numero di fagi progenitori, il che lo rende adatto per lo screening ad alto rendimento e l'espressione rapida.

	Fago M13	Fago T7
1. Struttura morfologica	Fago filamentoso	Fago poliedrico
2. Materiale genetico	Molecola di DNA circolare a singolo filamento	DNA lineare, a doppio filamento, terminalmente superfluo
3. Replicazione e infezione	I fagi lisogenici, assemblati nel periplasma, possono essere secreti dalle membrane batteriche senza lisare le cellule ospiti.	I fagi virulenti, progenie dei fagi assemblati nel citoplasma batterico, vengono rilasciati mediante lisi della membrana cellulare.
4. Sistema di visualizzazione	È stato costruito un sistema di visualizzazione utilizzando le proteine del capside pIII e PVIII, adatto per visualizzare peptidi/proteine estranei di diverse dimensioni.	Il sistema di visualizzazione è costruito con la proteina del capside 10B, che non richiede un processo di secrezione ed è adatta per visualizzare peptidi/proteine che hanno un effetto inibitorio sul processo di secrezione.
5. Vantaggio applicativo	È adatto per la visualizzazione e lo screening a lungo termine di peptidi a piccole molecole.	Presenta vantaggi nell'espressione rapida e nello screening ad alto rendimento delle proteine macromolecolari.

Tipi di libreria peptidica Phage Display

Alpha Lifetech vanta una solida esperienza nella costruzione e nello screening di librerie peptidiche per la tecnica phage display e offre una vasta gamma di tipologie di librerie peptidiche tra cui scegliere. In base alla lunghezza del peptide, le librerie possono essere suddivise in 7 librerie peptidiche, 9 librerie peptidiche, 10 librerie peptidiche, 12 librerie peptidiche e 15 librerie peptidiche. In base alla conformazione spaziale dei polipeptidi, le librerie peptidiche possono essere suddivise in librerie peptidiche fagiche lineari e librerie peptidiche fagiche cicliche.

Libreria di peptidi fagici lineari

Il gene del peptide viene inserito nella regione codificante la proteina capside del genoma del fago, solitamente pIII o PVIII, e si presenta come una catena lineare. I peptidi a catena lineare possono degradarsi facilmente in vivo, compromettendone la capacità di legame e la stabilità.

libreria di peptidi fagici ciclici

Il peptide ad anello modificato formerà una conformazione fissa sotto l'azione di legami disolfuro o altri legami di legame, che non solo miglioreranno notevolmente la stabilità metabolica e la biodisponibilità, ma soddisferanno anche meglio i requisiti di legame della conformazione recettore-ligando (anticorpo-antigene).

Processo di libreria peptidica Phage Display

Selezione dei fagi

Di solito vengono selezionati come vettori i fagi di tipo M13 o i fagi di tipo T7.

Costruzione della libreria peptidica di visualizzazione dei fagi

Costruire un vettore fagico in grado di contenere una sequenza codificante per una proteina o un polipeptide estraneo, che solitamente include un promotore, marcatori selettivi ed elementi regolatori appropriati. L'inserimento della sequenza codificante di una proteina o di un peptide estraneo in un carrier fagico, solitamente mediante metodi di taglio e legatura con enzimi di restrizione. Il vettore fagico costruito viene trasformato nella cellula ospite, consentendo al fago di replicarsi ed esprimere proteine o peptidi estranei al suo interno. Le librerie fagiche contenenti diverse proteine o peptidi estranei vengono preparate attraverso un'ampia trasformazione e amplificazione.

screening della libreria peptidica con visualizzazione dei fagi

Fissare le molecole bersaglio (come proteine, recettori o anticorpi) su un supporto in fase solida. Incubare la libreria peptidica phage display costruita con un bersaglio fissato per consentire ai peptidi sul fago di legarsi alla molecola bersaglio. Durante questo processo, i batteriofagi non legati vengono rimossi mediante lavaggio, mantenendo quelli che si legano al bersaglio, e i batteriofagi legati ad alta affinità vengono eluiti. I batteriofagi recuperati vengono amplificati infettando Escherichia coli e quindi sottoposti al successivo ciclo di screening. Di solito sono necessari 3-5 cicli di screening per ottenere peptidi con elevata efficienza di legame.

Progettazione e sintesi di peptidi

Sintetizzare peptidi in base ai siti di screening.

Fig.1 Processo di costruzione e screening della libreria peptidica Phage Display

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Alpha Lifetech vanta una vasta esperienza nello screening di librerie di fagi peptidici, fornendo un solido supporto tecnico per la scoperta di farmaci a piccole molecole, la diagnosi clinica, il trattamento delle malattie e la ricerca biologica.

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