Gli anticorpi monoclonali (mAb), pionieri dei farmaci a base di anticorpi, vantano oltre 100 anticorpi monoclonali approvati per il trattamento di tumori e malattie infettive, con un proprio mercato di sviluppo farmaceutico e un valore terapeutico unico. La tecnologia di isolamento di anticorpi da singole cellule B, una tecnologia di nuova generazione per lo sviluppo di anticorpi, consente di isolare in modo efficiente e rapido gli anticorpi da singole cellule B, rappresentando una svolta nella tecnologia di produzione di anticorpi dopo gli ibridomi e il phage display. La tecnologia di isolamento di singole cellule B può essere utilizzata per la generazione di anticorpi contro diverse specie, come conigli, topi, cammelli, pecore e polli. La tecnologia di isolamento di singole cellule B offre vantaggi eccezionali quali elevata specificità, attività e affinità. Basandosi sulla piattaforma di isolamento di singole cellule B, Alpha Lifetech vanta vantaggi in termini di tempi di screening e ottenimento di anticorpi di alta qualità. L'azienda è in grado di fornire servizi tecnici completi, tra cui progettazione, sintesi e modifica di antigeni, immunità animale, screening di arricchimento di singole cellule B, sequenziamento di singole cellule, screening ad alto rendimento, espressione e purificazione, nonché servizi tecnici integrati come la verifica funzionale, per soddisfare le diverse esigenze dei clienti.

Selezionare l'antigene appropriato per gli animali da esperimento (come topi, conigli, ecc.) al fine di stimolare il sistema immunitario, in modo che possano produrre anticorpi specifici contro l'antigene.

L'immunizzazione animale rappresenta la fase iniziale della generazione di anticorpi. Essa si basa sull'utilizzo del meccanismo di risposta immunitaria umorale dell'organismo stesso: attraverso la stimolazione continua con antigeni, gli animali sviluppano una forte risposta immunitaria e secernono anticorpi specifici contro tali antigeni.

Le cellule B sono state isolate dal sangue periferico, dalla milza o dai linfonodi di animali immunizzati. Queste cellule B sono state stimolate immunologicamente per produrre anticorpi contro antigeni specifici.

Attraverso metodi fisici o chimici (come la centrifugazione a gradiente di densità, la separazione con microsfere magnetiche, ecc.) si arricchiscono le cellule B, si rimuovono le cellule impure, si migliora la purezza delle cellule B e l'efficienza della successiva separazione.

La citometria a flusso (FACS), la separazione cellulare magnetica (MACS), la citometria a flusso microfluidica (MCS) o altre tecniche di screening ad alto rendimento, combinate con la marcatura antigene-specifica, possono essere utilizzate per selezionare singole cellule B da cellule B arricchite al fine di produrre anticorpi mirati.

Quando una singola cellula B viene isolata da una popolazione mista di cellule B, i suoi geni anticorpali devono essere sequenziati mediante la tecnologia di sequenziamento a singola cellula e analizzati per ottenere le informazioni sulla sequenza del DNA della regione variabile della catena pesante (VH) e della regione variabile della catena leggera (VL). La tecnologia di sequenziamento a singola cellula comprende principalmente tre fasi: isolamento della singola cellula, amplificazione degli acidi nucleici intracellulari e analisi del sequenziamento. Il principio del sequenziamento a singola cellula consiste nell'amplificare tracce di DNA o RNA dell'intero genoma delle singole cellule isolate per ottenere un genoma o un trascrittoma completo con un'elevata copertura per il sequenziamento ad alto rendimento.

Grazie allo screening ad alto rendimento, è possibile ottenere simultaneamente le sequenze geniche degli anticorpi di migliaia di cellule B, accelerando notevolmente la scoperta di nuovi anticorpi. Queste informazioni di sequenza possono essere ulteriormente utilizzate per la costruzione e lo screening di librerie di anticorpi.

Figura 2. Schema del processo di cattura di una singola cellula B, costruzione della libreria, screening ad alto rendimento e sequenziamento.(Fonte di riferimento: Il sequenziamento massivo parallelo del recettore delle cellule B a singola cellula consente la rapida scoperta di diversi anticorpi reattivi all'antigene..)

(1)Proteina ricombinante: ≥2,5 mg, purezza proteica >85%, peso molecolare della proteina superiore a 10 kDa, concentrazione di proteina solubile compresa tra 0,5 e 5 mg/mL. Se è richiesta la purificazione per affinità antigenica, sono necessari ulteriori 10 mg di proteina ricombinante.

(2) Polipeptidi e piccole molecole: Peptide nudo ≥ 10 mg, purezza del peptide > 90%, non meno di 10 AA, accoppiamento con KLH/BSA/OVA o altre proteine ​​vettrici; Le piccole molecole richiedono una valutazione strutturale preventiva.