Servizio di costruzione di linee cellulari stabili

Alpha Lifetech è impegnata da molti anni nello sviluppo di processi di costruzione di linee cellulari stabili. Ha sviluppato una piattaforma di processo di costruzione di linee cellulari stabili perfetta, con oltre 300 tipi di cellule tumorali e cellule primarie, in grado di fornire linee cellulari stabili, risparmiando tempo per la ricerca scientifica o di progetto e facilitando la successiva produzione. Alpha Lifetech può inoltre fornire ai clienti servizi come lo sviluppo di processi di ceppi, lo screening di ceppi, la costruzione di ceppi, la produzione di proteine ricombinanti e anticorpi, fornendo una base di ricerca per nuovi farmaci.

Alpha Lifetech dispone di una piattaforma cellulare infettata da lentivirus, in grado di personalizzare il processo sperimentale per diversi tipi di ceppi cellulari stabili a trasmutazione. Abbiamo utilizzato la tecnologia di knockout genico per costruire linee cellulari knockout per CRISPR/Cas9. Tecniche di sovraespressione genica e silenziamento genico sono state utilizzate per stabilizzare i ceppi a trasmutazione. L'integrazione genica sito-specifica completa i servizi di costruzione di linee cellulari di integrazione di vertice.

Introduzione alla costruzione di linee cellulari stabili

Una linea cellulare stabile si riferisce alla linea cellulare che integra geni estranei nel genoma della cellula ospite in modo che possano essere espressi stabilmente nella cellula ospite per lungo tempo. Il principio è quello di ridurre il gene estraneo a un vettore con una certa resistenza, trasfettare le cellule ospiti, integrare il gene estraneo nel cromosoma ospite e sottoporre a screening i geni di resistenza contenuti nel vettore per ottenere linee cellulari stabili con elevata espressione della proteina bersaglio o silenziamento stabile del gene bersaglio che soddisfino i requisiti dell'esperimento.

Alpha Lifetech dispone di un laboratorio di stoccaggio indipendente, di un sistema perfetto di congelamento e gestione dello stoccaggio delle cellule e di oltre 300 tipi di cellule tumorali e cellule primarie tra cui scegliere, dedicate alla tua ricerca scientifica.

Processo di costruzione di linee cellulari stabili

linea cellulare stabile - Alpha Lifetech

Metodo di costruzione di linee cellulari stabili

I metodi di costruzione di linee cellulari stabili includono lo screening mediato da lentivirus, mediato da trasposoni, mediato da CRISPR/Cas9 e plasmide.

La trascrizione mediata da lentivirus è uno dei metodi più comunemente utilizzati per costruire linee cellulari stabili. Questo approccio ha il vantaggio di infettare quasi tutti i tipi di cellule e di integrare il materiale genetico nel genoma della cellula ospite per un'espressione stabile a lungo termine. Tuttavia, questo sistema presenta alcune limitazioni e i lentivirus hanno una capacità di impacchettamento limitata, quindi non sono adatti alla trascrizione di geni con lunghe regioni di trascrizione.

Rispetto alla tecnica mediata da lentivirus, quella mediata da trasposoni non presenta alcuna restrizione sulle dimensioni del gene e, grazie alla continua ottimizzazione della tecnologia, l'efficienza dell'inserimento dei trasposoni è stata notevolmente migliorata. Lo svantaggio è che alcune restrizioni sulle cellule primarie e sulle cellule sono difficili da trasfettare.

La tecnologia CRISPR/Cas9 contiene il gene knockout Crispr e il gene knockin Crispr. Il gene knockout Crispr si riferisce all'introduzione di frammenti di DNA estraneo in geni specifici, che possono essere utilizzati per riparare geni difettosi o introdurre nuovi geni funzionali.

Lo screening plasmidico è lo schema di costruzione di linee cellulari più primitivo, che richiede solo di trasfettare con successo il plasmide bersaglio nella cellula e di utilizzare la resistenza corrispondente nello screening a lungo termine. Si ottiene quindi una certa probabilità di ottenere linee cellulari stabili.

Metodi di costruzione di diverse linee cellulari stabili

Metodo di mediazione	Sistema lentivirale	Sistema di trasposone	Mediato da CRISP/Cas9	Screening dei plasmidi
Capacità del vettore	5 kB	10 kB	5 kB	10 kB
Efficienza mediata	Alto	Normale	Normale	Basso
Cronologia	1-2 settimane	3-4 settimane	3-4 settimane	4-6 settimane
Vantaggio	Veloce ed efficiente	Sicurezza e stabilità	Integrazione a punto fisso	Costo inferiore
Difetto	Rischio di biosicurezza	Abbondanza di espressione normale	La trasduzione CAS9 è difficile e costosa	Bassa efficienza e instabilità

Difficoltà tecniche nella costruzione di linee cellulari stabili

Prima di aumentare la scala del processo, viene utilizzato un piccolo bioreattore per determinare parametri quali gas, sistema di fluidi di coltura, stress idrodinamico minimo applicato alle cellule, ecc., per garantire una coltura su più scale. Tuttavia, anche se vengono determinati i parametri di processo corrispondenti, l'ambiente dei grandi bioreattori nel produttore sarà irregolare e sarà facile che si verifichino guasti. Alpha Lifetech vanta molti anni di esperienza nella coltura su scala di processo, che può evitare in una certa misura errori, ridurre i rischi e migliorare notevolmente il tasso di successo. Allo stesso tempo, Alpha Lifetech garantisce l'uniformità delle materie prime e dei lotti di terreno utilizzati, riducendo il tasso di fallimento del processo di coltura cellulare su scala di processo.

Alpha Lifetech dispone di una piattaforma completa per lo sviluppo di processi di linee cellulari stabili, per garantire la stabilità delle linee cellulari durante la produzione. Possiamo anche fornirvi servizi personalizzati per soddisfare le vostre esigenze.

Contenuto del servizio di costruzione di linee cellulari stabili

Contenuto	Cronologia
Coltura della linea cellulare HEK293 fornita dal cliente.	3-5 mesi
Costruzione del plasmide sgRNA-Cas9 (con gene di screening G418).
Il modello sgRNA-Cas9 e il DNA di riparazione sono stati co-trasferiti alla linea cellulare HEK293.
Screening di linee cellulari monoclonali (gene GFP clone positivo knockin).
Consegna: vettore, ceppo knock-in del gene GFP, risultati del sequenziamento, tutti i dati grezzi, rapporto di laboratorio

Le cellule possono essere tracciate

Le celle vengono acquistate da organizzazioni professionali come ATCC e possono fornire la prova per soddisfare le vostre esigenze di registrazione.

Vantaggio produttivo

Alpha Lifetech vanta molti anni di esperienza nel soddisfare le diverse esigenze di sviluppo; disponiamo di una varietà di celle, di un laboratorio di stoccaggio indipendente, di un perfetto congelamento delle celle e di un sistema di gestione dello stoccaggio.

Controllo di qualità del progetto

Ogni progetto è sottoposto a rigorosi processi di controllo qualità per garantire ai clienti la consegna di linee cellulari che soddisfano elevati standard.

Vantaggio tecnico

Oltre a ingegneri con una vasta esperienza nel campo cellulare, disponiamo di algoritmi evolutivi tecnologici avanzati per migliorare le condizioni del reattore e modificare i parametri di processo.

Per qualsiasi domanda non esitate a contattarci in qualsiasi momento.

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