פלטפורמת חיסוני בעלי חיים

מקורות החי של Alpha Lifetech ברורים, עם אישורי בדיקה והסגר, רקע גנטי ברור, תדירות חיסונים ברורה ורישומים מפורטים של מרווחי חיסונים, המספקים שירותים נוחים לייצור נוגדנים. החברה מחסנת בעיקר בעלי חיים מסוג Camelidae (אלפקה ליאמא וגמלים), ומניחה את היסודות לייצור ננו-גופים. בנוסף, היא יכולה גם לחסן בעלי חיים רגילים (כגון ארנבות לבנות ניו זילנדיות, עכברים ובעלי חיים אחרים) בהתאם לתדירות החיסונים ולדרישות האימונוגניות הנדרשות של הלקוחות, לחלץ ולבודד אותם לתוך PBMCs, ולהשתמש בהם לניסויים נוספים (כגון נוגדנים חד שבטיים, פיתוח נוגדנים פולישבטיים וכו'). לקוחות יכולים לספק אימונוגנים משלהם, ואנו נבצע בקרת איכות קפדנית עליהם. אם לקוחות מספקים אימונוגנים ויראליים, יש להשבית אותם ואנו נבצע בדיקות השבה כדי להבטיח בטיחות. במקביל, אנו יכולים גם להתאים אישית את האימונוגנים המתאימים בהתאם לצורכי הלקוח.

מבוא לחיסון בעלי חיים

בעת ייצור נוגדנים שמקורם בבעלי חיים, כגון נוגדנים חד-שבטיים, נוגדנים פולי-שבטיים וננו-גופים, הצעד הראשון הוא לחסן את בעלי החיים ולהשיג תאי B, נוגדנים או PBMCs תואמים כדי להתכונן לייצור נוגדנים נוסף, לקדם מחקר מדעי בסיסי, לפתח כלי אבחון קליניים ולהקל על גילוי ופיתוח תרופות חדשות. גמלים, אלפקות, ליאמא וגמלים אחרים ממשפחת הקמלידים יכולים לייצר ספריות ננו-גופים (נוגדנים בעלי דומיין יחיד) באמצעות איסוף דם חיסוני ומיצוי PBMCs. ניתן לחסן ארנבות ובעלי חיים אחרים ולחלץ נוגדנים מגופם. לאחר טיהור, ניתן להשתמש בהם לייצור נוגדנים פולי-שבטיים. ניתן להשתמש בעכברים, חולדות וכו' לייצור נוגדנים חד-שבטיים על ידי מיזוג תאי B שחולצו מחיסון עם תאי מיאלומה. לפני החיסון, יש לשים לב לעקרונות 3R (החלפה, צמצום, עידון), שיכולים להפחית משמעותית את מספר בעלי החיים המשמשים למינימום הנדרש, לשפר את הליכי הניסוי ולמזער את סבלם של בעלי החיים. יש גם לפעול לפי תכנון ניסוי נכון, בחירת נוגדנים מתאימים ונהלי אימות קפדניים.

סיווג אימונוגנים - ייצור ננו-גופים

סוגי אימונוגנים	דוּגמָה	הכנת אימונוגן	הערות
אימונוגנים של חלבונים	אנזימים, חלבונים, רעלים חיידקיים וחומרים אחרים	בחרו מערכות ביטוי חלבונים שונות: אי קולי, שמרים, תאי חרקים, תאי יונקים ומערכת ללא תאים	שימו לב לגורמים כמו טמפרטורה, זמן, pH וגופי הכללה המשפיעים על ביטוי חלבונים
אימונוגנים של חומצות גרעין	דנ"א, רנ"א	אימונוגן DNA: בניית DNA פלסמיד, שיבוט וקטורי ביטוי מתאימים לגני מטרה, תרבית תאים להגברת DNA פלסמיד, וחילוץ DNA פלסמיד בעל טוהר גבוה. אימונוגן RNA: יש צורך להוסיף מבנה כובע וזנב PolyA כדי למנוע פירוק	בעת הכנת אימונוגנים של DNA, יש לשים לב לתאי המארח המתאימים, ובעת הכנת אימונוגנים של RNA, יש לשים לב למניעת פירוק RNA.
אימונוגנים ויראליים	חיסון מומת נגד וירוס שלם, חיסון לתת-יחידות, חיסון וקטורי ויראלי (אדנו-וירוס, לנטי-וירוס וכו'), חיסון mRAN.	בעת הכנת חיסון מומת כנגד וירוס שלם, הווירוס עובר תחילה השבתה כדי להגביר את הבטיחות. בדיקות רעילות משמשות כדי לקבוע אם ההשבתה הושלמה. חיסוני תת-יחידות דורשים רק חלבונים על פני השטח של הווירוס כאנטיגנים ויש לקחת בחשבון את יעילות החיסון.	יש להוסיף חומרים אדג'ובנטיים כדי לספק השפעות חיסוניות, יש לשים לב לנגיף שיש להשבית, נדרשים טיטרי נגיף מתאימים כדי להבטיח השפעות חיסוניות, ויש לשלוט בקפדנות על בטיחות תהליך ההכנה.

תהליך או ציר זמן של חיסון בעלי חיים

בחירת בעלי חיים והכנת אנטיגנים

בחירת בעלי חיים: בחרו אלפקות בגיל המתאים ובמבנה גוף בריא מקבוצות בריאות, ובצעו בדיקות דם ובדיקות סקר מחלות כדי לוודא שאין מחלות זיהומיות או בעיות בריאותיות אחרות.

הכנת אימונוגנים: אימונוגנים הם המפתח לגרימת תגובות חיסוניות ודורשים בחירת חלבונים, פפטידים או חומרים מתאימים אחרים בהתבסס על דרישות הנוגדן המטרה.

ניתן לחסן אלפקה עם 1-3 אנטיגנים בו זמנית, כאשר כמות האנטיגן הכוללת היא 1-2 מ"ג לכל חיסון ונפח של פחות מ-2 מ"ל. לפני החיסון, האנטיגן והאדג'ובנט עוברים אמולסיה ביחס של 1:1 ליצירת תערובת אחידה, המאוחסנת בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.

אלפקה אימונולוגית

רשמו את מספר אוזן האלפקה הריק והתחילו את ניסוי החיסון. הזריקו לבלוטות הלימפה ליד צוואר האלפקה משני הצדדים, עם 2 נקודות בכל צד וכ-0.4 מ"ל של אנטיגן מתחלב מוזרק בכל נקודה. לאחר החיסון, יש לצפות במשך חצי שעה כדי לוודא שהאלפקה אינה סובלת מתסמיני אי נוחות. יש לתת חיסון כל שבועיים, עם לפחות 4 חיסונים.

איסוף דם

לאחר 4 חיסונים במשך 5-7 ימים, יש לאסוף 50 מ"ל של דם מווריד הצוואר של האלפקה.

הפרדת סרום

דגימות דם נאספות לצורך הערכה חיסונית לפני כל חיסון אנטיגן, כאשר נלקחים 5 מ"ל דם בכל פעם; באותו היום, הדם נצנטריפוגה ב-400 xg למשך 30 דקות באמצעות צנטריפוגה מקוררת מראש של 25 מעלות צלזיוס. השכבה העליונה של הסרום הופרדה ואוחסנה לבדיקת טיטר נוגדנים לאחר מכן.

לימפוציטים נפרדים

ראשית, הוסיפו 15 מ"ל של תמיסת הפרדת תאים, ולאחר מכן הוסיפו באיטיות 15 מ"ל של דם למבחנה צנטריפוגה של 50 מ"ל. יש להיזהר ולהאט בעת הוספת הדם כדי למנוע ערבוב של הדם ותמיסת ההפרדה. יש לצנטריפוגה מקוררת מראש ב-25 מעלות צלזיוס, בצנטריפוגה ב-400 xg למשך 30 דקות, ואחסנו את הסרום העליון במבחנה צנטריפוגה חדשה ב-80 מעלות צלזיוס-; בעזרת פיפטה, שאבו את תאי החיסון בצורת כותנה באמצעית בשכבה העליונה לתוך מבחנה צנטריפוגה חדשה של 50 מ"ל. הוסיפו 10 מ"ל של בופר PBS בטמפרטורת החדר לכל מבחנה, בצנטריפוגה ב-25 מעלות צלזיוס וב-400 xg למשך 20 דקות. הסירו את הנוזל העליון, הוסיפו 5 מ"ל של בופר PBS בטמפרטורת החדר לכל מבחנה, ערבבו היטב בעדינות, חשבו את מספר התאים באמצעות הומוציטומטר, ולאחר מכן בצנטריפוגה ב-25 מעלות צלזיוס וב-400 xg למשך 20 דקות. הסר את הנוזל העליון והמס את הלימפוציטים שהתקבלו על ידי RNAiso Plus בהתבסס על מספר התאים כדי לקבל ליזט תאים של 10 ^ 7/mL, אשר מאוחסן ב-80- מעלות צלזיוס.

איור 1: ייצוג סכמטי של אסטרטגיות שונות לגילוי נוגדנים ושלבי הניסוי המעורבים. (מקור האיור: לאוסטן, אנדראס ה. ואחרים.)

לקוחות מספקים בקרת איכות קפדנית לאימונוגנים

סוגי אימונוגנים	דְרִישָׁה	שיטת בקרת איכות
דגימות פפטיד / מולקולות קטנות	תנאי המסה (תלויים בעיקר בשאלה האם הם יבטלו פאג'ים), מבנה מולקולרי/רצף פפטידים, דוח סינתזה (HPLC/MS/HNMR)	גילוי HPLC/MS
דגימות חלבון	SDS-PAGE/WB, תנאי שחזור, בופר, מידע על התווית, כמות כוללת (20-50 מיקרוגרם), ריכוז, טוהר וכו'	SDS-PAGE/WB
דגימות תאים	סוג תא (תאים ראשוניים/תאים שעברו עריכה גנטית), צורת תא (טרי/קפוא מופשר), סוג גידול (דבוק/מושעה), דרישות מצע תרבית, מספר תאים שסופקו, מספר תאים שסופקו, תאים שעברו עריכה גנטית כדי להבטיח ביטוי יציב של מטרות סקר (נוגדן ראשוני תואם ללקוח), תאים מופשרים קפואים כדי לקבוע את קצב ההתאוששות.	מיקוד בעיקר בתאים שעברו עריכה גנטית, תוך שימוש בנוגדנים ראשוניים המסופקים על ידי הלקוח לצורך זיהוי ביטוי מטרה באמצעות ELISA (חברתנו מספקת נוגדנים משניים ל-HRP), וגילוי בציטומטריית זרימה (חברתנו יכולה לספק נוגדנים משניים פלואורסצנטיים).

מהם היישומים של חסינות של בעלי חיים?

+

ניתן לייצר נוגדנים פוליקלונאליים על ידי חיסון בעלי חיים, ניתן לייצר נוגדנים חד שבטיים על ידי מיזוג תאי B עם תאי מיאלומה, וניתן להפיק PBMCs ממקורות גמלים (אלפקה, גמל, אלפקה וכו') כדי לייצר צורות שונות של שברי נוגדנים כגון ננו-גופים, שברי Fab, שברי נוגדנים scFv וכו'.
מהם אמצעי הזהירות לחסינות של בעלי חיים?

+

כדי לייצר ננו-נוגדנים עבור בעלי חיים שמקורם בגמלים, נדרשים 5-6 חיסונים. יש לאסוף דגימות דם כביקורת לפני החיסון, עם מרווח של שבועיים בין כל חיסון. לאחר החיסון הרביעי, יש לאסוף דם חיובי ודם שלילי שלא מחוסן לצורך בדיקת ELISA לקביעת הטיטר. אם הטיטר נמוך מ-10 ^ 6, יש להגדיל את מספר החיסונים עד שהטיטר יגיע לרמה מתאימה. עבור חיסונים אחרים של בעלי חיים כגון חיסון ארנבת (רמת אנטיגן החלבון האופטימלית או הנפוצה לחיסון ארנבת היא 50-1000 מיקרוגרם), חיסון עכבר (רמת אנטיגן החלבון האופטימלית או הנפוצה לחיסון עכבר היא 5-50 מיקרוגרם, הדורשת 10 ^ 6 תאים אם מדובר בתא, ו-10-50 מיקרוגרם לחומצה גרעין או פחמימות), חיסון עז (רמת אנטיגן החלבון האופטימלית או הנפוצה לחיסון עז היא 250-5000 מיקרוגרם) וכו', יש לשים לב למינון, לבטיחות וליעילות של אימונוגנים.
כיצד לבחור בעלי חיים חסינים?

+

בהתאם לסוג הנוגדן הנדרש על ידי הלקוח, אם אתם צריכים לייצר ננו-גופים או שברי נוגדנים אחרים, תוכלו לבחור בעלי חיים שמקורם בגמלים (גמלים, אלפקות, אלפקות) לצורך חיסון. אם אתם צריכים לייצר נוגדנים חד-שבטיים או פולי-שבטיים, עליכם לבחור את המין המתאים בהתבסס על כמות הסרום, האנטיגן ומקור האנטיגן. כמות הסרום המקסימלית לארנבות היא 500 מ"ל, דבר הדורש כמות נמוכה של אנטיגן וזו הבחירה העיקרית לייצור נוגדנים פולי-שבטיים. כמות הסרום המקסימלית לעכברים היא 2 מ"ל, וכמות הסרום המקסימלית לחולדות היא 20 מ"ל, שהיא בדרך כלל הבחירה האופטימלית לנוגדנים חד-שבטיים. נוגדנים המיוצרים מעיזים הם בעלי זיקה גבוהה, ו-Alpha Lifetech יכולה להתאים אישית עבורכם תוכנית חיסון בלעדית בהתאם לדרישותיכם.
האם יש צורך להשתמש באנטיגנים יחד עם אדג'ובנטים? כיצד לבחור?

+

ישנם שני סוגים של אדג'ובנטים: על בסיס שמן ועל בסיס מים. שימוש סביר באדג'ובנטים הוא קריטי לגרימת תגובות נוגדנים חזקות לאנטיגנים מסיסים. השחרור המתמשך של האדג'ובנטים פירושו שניתן להשתמש במנות נמוכות יותר של אנטיגנים, ותגובות הנוגדנים ארוכות טווח יותר. יש להשתמש בזריקה הראשונה בשילוב עם אדג'ובנט. בדרך כלל מומלץ להשתמש באדג'ובנט של פרוינד כאשר כמות האימונוגן קטנה.
אמצעי זהירות לחיסון אלפקות?

+

(1) בחירת האלפקה והאנטיגן החיסוני הם המפתח לחיסון מוצלח. בחירת גמל בעל פרופורציות טובות אינה מומלצת. טוהר וקונפורמציה נכונה של אנטיגני החיסון הם קריטיים לסינון נוגדנים מתאימים ליישומים עתידיים לאחר חיסון באלפקות. טוהר אנטיגני החלבון אינו פחות מ-90% בדרך כלל.

(2) הפרדת לימפוציטים: הפרדת תאים בזמן יכולה למנוע ביעילות המוליזה לאחר איסוף דם כדי להשיג את אפקט ההפרדה הטוב ביותר.

(3) מחזור החיסון יכול להשפיע על התגובה החיסונית: מרווח חיסוני של שבוע-שבועיים מאפשר לאלפקות תגובה חיסונית טובה לרוב האנטיגנים.

אדג'ובנט שפותח באופן עצמאי

הנוסחה הייחודית שלנו, אדג'ובנט, מותאמת במיוחד למערכת החיסון של האלפקה, ומספקת עוצמה וספציפיות גבוהות יותר בהשוואה לאדג'ובנטים מסורתיים.

מתן חיסונים
תֶקֶן

אנו מתחייבים להשלים את החיסון בתוך הזמן שנקבע, לספק סרום עם טיטר גבוה ולתעד כל שלב באמצעות דוחות מפורטים.

בקרת איכות הפרויקט

כל פרויקט עובר תהליכי בקרת איכות קפדניים כדי להבטיח אספקת נוגדנים העומדים בסטנדרטים גבוהים ללקוחות.

בְּבִירוּראלפקהרֶקַע

יש לנו אוכלוסיית אלפקות בריאה המספקת תמיכה לתוכניות חיסונים שונות.

אם יש לכם שאלות, אל תהססו לפנות אלינו בכל עת.

Leave Your Message

שירות מומלץ

0102