שירות ניתוח אפיון אפטמרים

זיקת האפטמר האופטימלית אומתה באמצעות טכניקות רלוונטיות של מבחן קישור אפטמר. דוגמאות לכך כוללות קלורימטריית טיטרציה איזותרמית (ITC), ציטומטריית זרימה (FCM), ותהודה פלסמונית שטחית (SPR), מיקרופלואידיקה וכו'. זיקת אפטמר מתבטאת בדרך כלל על ידי קבוע הדיסוציאציה (KD), כמות פיזיקלית המשמשת לכמת את מידת הדיסוציאציה המולקולרית בתגובה הפיכה. ככל שערך KD קטן יותר, כך הקומפלקס יציב יותר, כלומר, כך הזיקה חזקה יותר; לעומת זאת, ככל שערך KD גדול יותר, כך הקומפלקס לא יציב יותר והזיקה חלשה יותר. שלב זה הוא המפתח לזיהוי ביצועי האפטמר, תוך הבטחת הבשלת זיקת האפטמר ויכולה להיקשר למולקולת המטרה בזיקה וסלקטיביות גבוהות ביישומים מעשיים.

איור 1 תהליך הבשלת זיקה של אפטמרים. מקור:קינגהורן, אלברטה, פרייזר, לואיזיאנה, 2017.

בנוסף לאימות זיקה, יש לאמת את תפקוד האפטמר. זה כולל אימות יציבותו, ספציפיותו ואינטראקציותיו עם מולקולות אחרות בסביבה מסוימת. תוצאות האימות הפונקציונלי ישפיעו ישירות על ערכם של אפטמרים במחקר מדעי וביישומים תעשייתיים.

אימות ספציפי

השיטה המתאימה נבחרת בדרך כלל בהתאם למטרת היישום הספציפית של אפטמר חומצת הגרעין.

(1) בדיקה ברמה מולקולרית: שימוש בטכניקות ביולוגיה מולקולרית, כגון אלקטרופורזה בג'ל, כתם מערבי וכו', כדי לזהות את הקומפלקסים שנוצרים לאחר שהאפטמר מתמזג עם מולקולת המטרה, או לזהות את השינויים ברמת הביטוי של מולקולת המטרה הנגרמים על ידי האפטמר.

(2) בדיקות ברמת התא: באמצעות טכנולוגיית תרבית תאים, אפטמרים מודגרים עם תאי מטרה כדי לצפות בשינויים ביולוגיים כגון מורפולוגיה של תאים, התפשטות ואפופטוזיס, ולהעריך את הפעילות הביולוגית של האפטמרים.

(3) בדיקות במודלים של בעלי חיים: במודלים מתאימים של בעלי חיים, אפטמרים של חומצות גרעין ניתנים באמצעות הזרקה או מתן תרופות, ונצפים אינדיקטורים פיזיולוגיים ושינויים פתולוגיים בבעלי חיים כדי להעריך את הפעילות הביולוגית והבטיחות של האפטמרים in vivo.