抗体親和性成熟サービス

アルファライフテック株式会社当社は、変異および選択技術を用いて抗体親和性成熟サービスを提供しています。親和性成熟サービスでは、通常、抗体フォーマットとしてscFvを使用し、抗原結合スクリーニング時のアビディティ効果を低減するために単価表示ファージミドシステムを採用しています。当社の専門チームは、単一ドメイン抗体に対する親和性成熟サービスも提供可能です。

アルファライフテック株式会社当社は、世界中のお客様の多様なニーズにお応えする包括的なサービスを提供できることを誇りに思っています。当社の目標は、様々なお客様のご要望を理解し、それに応えるとともに、研究活動におけるあらゆる潜在的な問題や新たな課題への対応を支援することです。

親和性成熟とは何ですか？

親和性成熟とは、抗体が繰り返し変異と選択を経て、特定の抗原に対する親和性を高める過程のことである。主に二次リンパ器官の胚中心で起こるこの過程において、B細胞はT細胞と濾胞樹状細胞の影響下で体細胞超変異と選択を受ける。
親和性成熟過程において、表面免疫グロブリン受容体の親和性が低いB細胞は、抗原との遭遇によって活性化され、増殖と分化を起こします。体細胞超変異による親和性成熟では、免疫グロブリン遺伝子の可変領域にランダムなヌクレオチド置換が生じ、様々な抗体変異体が産生されます。体細胞超変異後、変異した免疫グロブリン受容体を持つB細胞に対して抗原選択が行われます。抗原親和性が高い抗体を産生するB細胞は優先的に保持され、増殖が促進される一方、親和性が低下した、あるいは変化のないB細胞はアポトーシスを起こします。この変異と選択の反復プロセスによって、抗原に対する親和性が徐々に高まる抗体を産生するB細胞クローンが産生されます。

抗体親和性成熟サービス

PCR法の主な利点は、変異が増幅断片に正確に標的化されること、エラー率の制御が容易であること、迅速かつ簡単にセットアップできること、そして有害な化学物質を使用しないことである。Taq DNAポリメラーゼは、3'から5'の校正活性がないため、DNAを低忠実度で複製することがよく知られている。アルファライフテックの抗体エンジニアリングプラットフォームでは、サブライブラリー構築時に主にCDR領域に変異を導入するために、エラーを起こしやすいPCR法を採用しています。また、サブライブラリーの遺伝的多様性を高めるために、VHおよびVLフラグメント全体にわたって完全にランダムな位置に変異を導入することもよくあります。エラーを起こしやすいPCR法によって変異抗体遺伝子ライブラリーを構築した後、高親和性変異体（scFv抗体の親和性は10^8～10^10 Mに達する可能性があります）の選択は、溶液中でのパニング、または解離速度依存選択に最適化された洗浄条件を用いた固定化抗原上で行われます。
  
科学者たちはアルファライフテック株式会社大腸菌変異株mutAD5TMを、ランダム変異を導入し、それによって組換え抗体断片の親和性と発現を改変するための複数の変異戦略の1つとして使用します。選択条件は、生産レベルが増加した抗体断片に対して変更できます。大腸菌変異細胞の増殖条件を調整することで、DNA 1キロベースあたり1つのランダム点変異を導入でき、これはscFv断片あたり1つのコドン変化にほぼ相当します。変異、表示、選択のサイクルを数回繰り返すことで、親和定数を10^5 - 10^6 Mから10^8 - 10^10 Mに向上させることができます。

親和性成熟戦略の改善

抗体の特定の位置を、定義された多様性（例えば、20種類のアミノ酸すべてを用いた完全ランダム化、または特定のアミノ酸を一定の割合で用いた偏りのあるランダム化）でランダム化することにより、親和性を向上させることができます。抗体の親和性を向上させるための戦略は2つあります。1つ目は、部位特異的変異誘発により、相補性決定領域（CDR）の限られた位置に突然変異を導入する方法です。2つ目は、ランダム変異誘発により、Vコード領域全体に突然変異を導入する方法です。これらの2つの方法を用いることで、保存されたアミノ酸配列または抗体のフレームワーク領域全体が他のアミノ酸に置換され、当社のペプチドライブラリースキャン技術と組み合わせることで、目的の抗体の親和性を極めて高いレベルまで高めることができます。

ファージディスプレイ抗体親和性

scFv変異体ライブラリーが構築されたら、バイオパニングと固体抗原ソーティングという2つのスクリーニング戦略が利用可能です。前者では、基質の濃度を段階的に下げることで高親和性抗体を分離します。低親和性変異体は洗い流され、高親和性ファージ粒子が残ります。後者の戦略では、溶液中の標識抗原を使用し、平衡定数（Kd）に基づく選択と結合速度論に基づく選択を行います。この選択方法では、Kd値が向上した抗体変異体を選別します。

ご不明な点がございましたら、いつでもお気軽にお問い合わせください。