抗体親和性成熟サービス

アルファライフテック株式会社変異技術と選択技術を用いた抗体親和性成熟サービスをご提供いたします。親和性成熟サービスでは、抗体フォーマットとしてscFvを、抗原結合スクリーニングにおけるアビディティ効果を低減するために用いられる一価ディスプレイファージミドシステムを採用しています。専門チームは、シングルドメイン抗体の親和性成熟サービスも提供可能です。

アルファライフテック株式会社世界中のお客様の多様なニーズにお応えする包括的なサービスを提供できることを誇りに思います。私たちの目標は、多様なお客様のニーズを理解し、それに応えること、そして研究活動におけるあらゆる課題の解決を支援することです。

アフィニティ成熟とは何ですか?

親和性成熟とは、抗体が特定の抗原に対する親和性を高めるために、繰り返し変異と選択を受ける過程です。主に二次リンパ器官の胚中心で起こり、B細胞はT細胞と濾胞樹状細胞の影響下で体細胞超変異と選択を受けます。
親和性成熟過程において、低親和性表面免疫グロブリン受容体を持つB細胞は抗原との遭遇によって活性化され、増殖と分化を経ます。体細胞超変異親和性成熟過程において、免疫グロブリン遺伝子の可変領域でランダムなヌクレオチド置換が起こり、様々な抗体変異体が産生されます。体細胞超変異後、変異した免疫グロブリン受容体を持つB細胞に対して抗原駆動型選択が行われます。抗原親和性が向上した抗体を産生するB細胞は優先的に保持され、増殖が促されます。一方、親和性が低下した、あるいは変化のないB細胞はアポトーシスを起こします。この変異と選択の反復プロセスにより、抗原に対する親和性が徐々に高まる抗体を産生するB細胞クローンが生成されます。

抗体親和性成熟サービス

PCR法の主な利点は、変異が増幅断片に正確に標的化されること、エラー率の制御が容易であること、そして迅速かつ容易にセットアップでき、有害な化学物質を使用しないことです。Taq DNAポリメラーゼは、主に3'-5'末端の校正活性が欠如しているため、DNA複製の忠実度が低いことがよく知られています。アルファライフテックの抗体エンジニアリングプラットフォームは、サブライブラリ構築時にエラープローンPCRアプローチを適用し、主にCDR領域を変異させます。また、サブライブラリの遺伝的多様性を高めるために、VHおよびVLフラグメント全体にわたって完全にランダムな位置に変異を導入することがよくあります。エラープローンPCRによって変異抗体遺伝子ライブラリを構築した後、高親和性バリアント（scFv抗体の親和性は10^8～10^10 Mに達することがあります）の選択は、溶液中でのパンニング、またはオフレート依存的な選択に最適化された洗浄条件を用いた固定化抗原上で行われます。
  
科学者たちはアルファライフテック株式会社大腸菌ミューテーター株mutAD5TMを、ランダム変異を導入するための複数の変異戦略の一つとして用いることで、組換え抗体断片の親和性と発現を変化させます。抗体断片の生産レベルを向上させるために、選択条件を調整することも可能です。大腸菌ミューテーター細胞の増殖条件を調整することで、DNA1キロベースあたり1つのランダム点変異を導入できます。これは、scFv断片あたり1つのコドン変化にほぼ相当します。変異、ディスプレイ、選択を数回繰り返すことで、親和定数を10^5 - 10^6 Mから10^8 - 10^10 Mに向上させることができます。

アフィニティ成熟戦略の改善

抗体の特定の位置を、定義された多様性（例えば、20種類のアミノ酸すべてを対象とした完全ランダム化、または特定のアミノ酸を一定の割合で偏りのあるランダム化）でランダム化することで、親和性を向上させることができます。抗体の親和性を向上させるための戦略は2つあります。1つ目は、部位特異的変異誘発によって相補性決定領域（CDR）の特定の位置に変異を導入する方法です。2つ目は、ランダム変異誘発によってVコード領域全体に変異を導入する方法です。これら2つの方法を用いることで、抗体の保存アミノ酸配列またはフレームワーク領域全体を他のアミノ酸に置換することができ、当社のペプチドライブラリスキャン技術と組み合わせることで、対象抗体の親和性を極めて高いレベルにまで高めることができます。

ファージディスプレイ-抗体親和性

scFv変異体ライブラリを構築したら、バイオパニングと固体抗原選別という2つのスクリーニング戦略が利用可能です。前者では、基質濃度を減算することで高親和性抗体を単離します。低親和性変異体は洗い流され、高親和性のファージ粒子が残るためです。後者の戦略では、溶液中の標識抗原、平衡定数（Kd）に基づく選択、そして結合速度論に基づく選択を用います。この選択アプローチでは、Kdが向上した抗体変異体を選別します。

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