アプタマー特性解析サービス

Alpha Lifetechは長年にわたりアプタマー関連サービスを提供しており、現在ではアプタマー合成、SELEXスクリーニング、ハイスループットシーケンス、アプタマー最適化および特性評価など、包括的なアプタマー開発スキームを提供できます。SELEX法によるアプタマースクリーニングの利点を活かし、Alpha Lifetechはさらに多くのスクリーニング手法を開発してきました。

アプタマー特性解析入門

アフィニティ検証

最適化されたアプタマー親和性は、アプタマー結合アッセイの関連技術によって検証されました。例としては、等温滴定カロリメトリー（ITC）、フローサイトメトリー（FCM）、表面プラズモン共鳴（SPR）、マイクロ流体などが挙げられます。アプタマー親和性は通常、解離定数（KD）で表されます。これは、可逆反応における分子解離の程度を定量化するために使用される物理量です。KD値が小さいほど複合体は安定し、つまり親和性が強くなります。逆に、KD値が大きいほど複合体は不安定になり、親和性は弱くなります。このステップは、アプタマーの性能を特定し、アプタマー親和性の成熟を保証し、実用的なアプリケーションで標的分子に高い親和性と選択性で結合できるようにするための鍵となります。

図1 アプタマー親和性成熟の過程。参考文献：キングホーン（アルバータ州）、フレイザー（ルイジアナ州）、2017年。

機能検証

親和性の検証に加えて、アプタマーの機能性も検証する必要があります。これには、アプタマーの安定性、特異性、および特定の環境下での他の分子との相互作用の検証が含まれます。機能検証の結果は、科学研究および産業応用におけるアプタマーの価値に直接影響を与えます。

具体的な検証

競合実験：アプタマーが特定の標的に結合する能力を、他の類似標的が存在する状況下で評価する。アプタマーが他の分子の干渉を受けずに標的分子に特異的に結合できる場合、高い特異性を持つと判断される。

交差反応実験：アプタマーを関連する、あるいは関連しない一連の標的に結合させ、特定の標的にのみ結合するかどうかを調べ、その特異性を検証する。

安定性検証

ヌクレアーゼ分解実験：アプタマーを様々な濃度のヌクレアーゼに曝露し、その分解を観察した。異なる時点における分解度を比較することで、アプタマーの抗ヌクレアーゼ分解能力を評価できる。

温度および時間安定性実験：アプタマーを様々な温度および時間条件下に置き、その構造的および機能的な安定性を観察した。これにより、アプタマーの最適な保管および使用条件を決定するのに役立つ。

生物活性の同定

適切な方法は通常、核酸アプタマーの具体的な用途に応じて選択される。

（１）分子レベルの試験：ゲル電気泳動、ウェスタンブロットなどの分子生物学的手法を用いて、アプタマーが標的分子と結合した後に形成される複合体を検出したり、アプタマーによって引き起こされる標的分子の発現レベルの変化を検出したりする。

（２）細胞レベルの試験：細胞培養技術を用いて、アプタマーを標的細胞とインキュベートし、細胞形態、増殖、アポトーシスなどの生物学的変化を観察し、アプタマーの生物学的活性を評価する。

（３）動物モデル試験：適切な動物モデルにおいて、核酸アプタマーを注射または投与し、動物の生理学的指標および病理学的変化を観察して、アプタマーの生体内における生物学的活性および安全性を評価する。

KACHI