アプタマー特性解析サービス

アルファライフテックは長年にわたりアプタマー関連サービスを提供しており、現在ではアプタマー合成、SELEXスクリーニング、ハイスループットシーケンシング、アプタマーの最適化と特性評価といった包括的なアプタマー開発スキームを提供しています。アプタマースクリーニングにおけるSELEX法の利点に基づき、アルファライフテックはアプタマースクリーニングのための新たな手法を開発しています。

アプタマー特性解析入門

親和性検証

最適化されたアプタマー親和性は、アプタマー結合アッセイの関連技術によって検証されました。例としては、等温滴定熱量測定（ITC）、フローサイトメトリー（FCM）、表面プラズモン共鳴（SPR）、マイクロフルイディクスなどがあります。アプタマー親和性は通常、解離定数（KD）で表されます。これは、可逆反応における分子の解離度を定量化するために使用される物理量です。KD値が小さいほど、複合体は安定しており、親和性が強くなります。逆に、KD値が大きいほど、複合体は不安定であり、親和性が弱くなります。このステップは、アプタマーの性能を特定し、アプタマー親和性の成熟を確保し、実際のアプリケーションで高い親和性と選択性で標的分子に結合できるようにする鍵となります。

図1 アプタマー親和性成熟のプロセス。出典：キングホーンAB、フレーザー、LA、2017年。

機能検証

親和性の検証に加えて、アプタマーの機能も検証する必要があります。これには、アプタマーの安定性、特異性、および特定の環境における他の分子との相互作用の検証が含まれます。機能検証の結果は、科学研究および産業応用におけるアプタマーの価値に直接影響を及ぼします。

具体的な検証

競合実験：アプタマーが特定の標的に結合する能力を、他の類似の標的の存在下で評価します。アプタマーが他の分子からの干渉を受けずに標的分子に特異的に結合できる場合、高い特異性を有することを示します。

交差反応実験: アプタマーを一連の関連または無関係なターゲットに結合させて、特定のターゲットにのみ結合するかどうかを確認し、その特異性を検証します。

安定性の検証

ヌクレアーゼ分解実験：アプタマーを異なる濃度のヌクレアーゼに曝露し、その分解を観察した。異なる時点における分解の程度を比較することで、アプタマーの抗ヌクレアーゼ分解能を評価することができる。

温度および時間安定性実験：アプタマーを様々な温度および時間条件下に置き、その構造および機能の安定性を観察しました。これは、アプタマーの最適な保管および使用条件を決定するのに役立ちます。

生物活性の特定

通常、核酸アプタマーの具体的な応用目的に応じて適切な方法が選択されます。

（１）分子レベルの試験：ゲル電気泳動、ウエスタンブロットなどの分子生物学技術を用いて、アプタマーが標的分子と結合した後に形成される複合体を検出したり、アプタマーによって引き起こされる標的分子の発現レベルの変化を検出したりします。

（２）細胞レベルの試験：細胞培養技術を用いて、アプタマーを標的細胞とインキュベートし、細胞の形態、増殖、アポトーシスなどの生物学的変化を観察し、アプタマーの生物学的活性を評価する。

（３）動物モデル試験：適切な動物モデルにおいて、核酸アプタマーを注射または薬物投与し、動物の生理学的指標および病理学的変化を観察し、生体内でのアプタマーの生物学的活性および安全性を評価する。

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