1960年に二重特異性抗体の概念が提唱されました。二重特異性抗体は、二重特異性モノクローナル抗体とも呼ばれ、遺伝子工学技術を用いて人工的に合成された抗体です。人工的に作製された抗体である二重特異性抗体は、通常IgGサブクラスに属し、CD3サブユニットを標的とする抗原結合フラグメントを有しています。二重特異性抗体は、2つの異なる抗原、または抗原の2つの異なるエピトープに同時に結合・認識できる2つの特異的抗原結合部位を有しています。モノクローナル抗体と比較して、二重特異性抗体は追加の特異的抗原結合部位を有するため、より強い特異性と標的化能を有し、腫瘍細胞をより正確に標的とし、オフターゲット毒性を低減することができます。二重特異性抗体は、免疫細胞のリクルート、シグナル伝達経路の遮断、腫瘍細胞の直接的な殺傷など、複数の生物学的機能を同時に発揮することができます。初期の二重特異性抗体は主に化学結合または細胞融合によって作製されていましたが、この方法はランダムな組み合わせと標的組み合わせの単離の難しさのために、発展が遅れた可能性があります。遺伝子工学技術の継続的な発展に伴い、ノット・イン・ホールズ（KIH）、CrossMab、DVD Igなど、多くの新しい技術プラットフォームが開発されました。これらのプラットフォームは、重鎖と軽鎖のミスマッチなどの問題を効果的に解決し、二重特異性抗体の均一性と収量を向上させます。

二重特異性抗体の主な製造方法には、化学カップリング法、四元ハイブリドーマ法、遺伝子工学抗体作製法などがある。このうち、化学カップリング法は、フタルイミドやジチオアシル安息香酸などの化学カップリング剤を用いて、2つのIgGまたは2つのF(ab')2抗体断片を二重特異性抗体に結合する。この方法は操作が簡便であるが、抗原結合部位を損傷し、抗体の活性を低下させる可能性があり、カップリング剤自体にもある程度の発がん性がある。四元ハイブリドーマ法は、2つの異なるハイブリドーマ細胞株の体細胞を融合させ、対応するマウスIgGを発現させる。遺伝子工学技術を用いて、抗体を遺伝子改変し、二重特異性抗体を作製することができる。まず、2つの異なるモノクローナル抗体を作製し、2つの抗体のFab断片または重鎖および軽鎖可変領域を個別に切断する。架橋反応または鎖組換え技術を用いて、2つの断片を結合させ、二重特異性抗体を形成する。遺伝子工学技術は比較的複雑であるものの、抗体の構造と機能を調整するために、現在、二重特異性抗体の生産において最も一般的に用いられている手法です。二重特異性抗体の設計においては、抗体の交差反応性の原理を利用することができますが、抗体の交差反応性は非特異的反応を引き起こす可能性があるため、二重特異性抗体療法などの二重特異性抗体設計の実用化においては、この点を慎重に考慮する必要があります。

二重特異性抗体の精製は、高純度の標的抗体を分離・精製するプロセスです。遠心分離と深層濾過という2つの方法を用いて、可溶性不純物を除去します。標的の二重特異性抗体は、まずアフィニティークロマトグラフィーによって捕捉されます。IgG様二重特異性抗体の場合はプロテインAアフィニティークロマトグラフィーが、IgG様でない二重特異性抗体の場合は軽鎖アフィニティークロマトグラフィーが用いられます。その後、抗体を低pH条件下で一定時間インキュベートすることで、ウイルスエンベロープ表面のタンパク質構造が破壊され、細胞への感染能力が失われます。さらに、中間の深層濾過を行うことで、宿主細胞タンパク質（HCP）などの不純物が除去されます。抗体の純度は、イオン交換クロマトグラフィーなどの方法によって向上させ、残留ウイルスはナノ濾過または限外濾過技術によって除去されます。最後に、サンプルを濃縮し、適切な製剤緩衝液に置き換えます。