1960年に二重特異性抗体の概念が提唱されました。二重特異性抗体は、二重特異性モノクローナル抗体とも呼ばれ、遺伝子工学技術を用いて人工的に合成された抗体です。人工的に作られた抗体である二重特異性抗体は、通常IgGサブクラスに属し、CD3サブユニットを標的とする抗原結合断片を含んでいます。二重特異性抗体は、2つの異なる抗原、または抗原の2つの異なるエピトープに同時に結合して認識できる2つの特異的な抗原結合部位を持っています。モノクローナル抗体と比較して、二重特異性抗体は追加の特異的な抗原結合部位を持つため、より強い特異性と標的化能力を持ち、腫瘍細胞をより正確に標的とし、非標的毒性を低減することができます。二重特異性抗体は、免疫細胞の動員、シグナル伝達経路の遮断、腫瘍細胞の直接殺傷など、複数の生物学的機能を同時に実行できます。初期の二重特異性抗体は主に化学的結合または細胞融合によって作られていましたが、この方法はランダムな組み合わせと標的の組み合わせの分離の難しさから、進歩が遅かった可能性があります。遺伝子工学技術の継続的な発展に伴い、ノット・イン・ホール（KIH）、CrossMab、DVD Igなど、多くの新しい技術プラットフォームが開発されてきました。これらのプラットフォームは、重鎖と軽鎖のミスマッチなどの問題を効果的に解決し、二重特異性抗体の均一性と収量を向上させます。

二重特異性抗体の作製方法には、化学結合法、四元ハイブリドーマ法、遺伝子工学による抗体作製法などがあります。中でも、化学結合法は、フタルイミドやジチオアシル安息香酸などの化学結合剤を用いて、2つの完全なIgGまたは2つのF（ab'）2抗体断片を結合させて二重特異性抗体を作製する方法です。この方法は操作が簡単で簡便ですが、抗原結合部位を損傷したり、抗体活性を低下させたりする可能性があり、結合剤自体にもある程度の発がん性があります。四元ハイブリドーマ法は、2つの異なるハイブリドーマ細胞株由来の体細胞を融合させて対応するマウスIgGを発現させる方法に基づいています。遺伝子工学技術により、抗体を遺伝子改変して二重特異性抗体を作製することも可能です。2つの異なるモノクローナル抗体を作製し、それぞれの抗体のFab断片または重鎖および軽鎖可変領域を別々に切断します。架橋反応または鎖再結合技術により、2つの断片を結合させて二重特異性抗体を作製します。遺伝子工学技術は比較的複雑ではあるものの、抗体の構造と機能を調整するための二重特異性抗体生産において、現在最も一般的に用いられている方法である。二重特異性抗体の設計を行う際には、抗体交差反応性の原理を利用できるが、抗体交差反応性は非特異的な反応を引き起こす可能性があるため、二重特異性抗体療法などの実用化においては、この点を慎重に検討する必要がある。

二重特異性抗体の精製は、高純度の標的抗体を分離・精製するプロセスです。遠心分離と深層ろ過の2つの方法を用いて、可溶性不純物を除去します。まず、標的となる二重特異性抗体をアフィニティークロマトグラフィーで捕捉します。IgG様二重特異性抗体にはプロテインAアフィニティークロマトグラフィーを用い、IgG様でない二重特異性抗体には軽鎖ベースのアフィニティークロマトグラフィーを用います。その後、抗体を一定時間低pH条件下でインキュベートすることで、ウイルスエンベロープ表面のタンパク質構造を破壊し、細胞感染能を失わせます。中間段階で深層ろ過を行い、宿主細胞タンパク質（HCP）などの不純物をさらに除去します。イオン交換クロマトグラフィーなどの方法を用いて抗体の純度を高め、ナノろ過または限外ろ過技術を用いて残留ウイルスを除去します。最後に、サンプルを濃縮し、適切な製剤バッファーに置き換えます。