ハイブリドーマ技術プラットフォーム
アルファライフテックは抗体開発分野において豊富な経験を有しており、長年にわたり、包括的な抗体開発プラットフォーム(モノクローナル抗体開発、ポリクローナル抗体開発、組み換えモノクローナル抗体開発、その他の抗体調製・開発サービスを含む)を構築してきました。
アルファライフテックは、品質保証された抗体および組み換え抗体製品とサービスをお客様に提供しており、調製された抗体は高い特異性と優れた安定性を備えています。複数の抗体精製機器と設備を駆使し、ウサギ、ヒツジ、ニワトリ、マウスモノクローナル抗体など、様々な由来の抗体精製サービス、プロテインA/Gアフィニティー精製サービス、抗体分離サービスを提供しています。
アルファライフテックは、ハイブリドーマ細胞技術をはじめとする様々な抗体調製技術を基盤として、様々な種のモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体を対象としたカスタマイズサービスを提供しています。さらに、ハイスループットシーケンシング、抗体調製、抗体精製、抗体検証まで、幅広いサービスを提供しています。お客様の具体的な目的に応じて精製方法を選択いたします。アルファライフテックは、抗体開発プラットフォームやタンパク質プラットフォームといった包括的なプラットフォームシステムを基盤として、抗体生産の上流から下流までを網羅し、抗体精製、抗体ハイスループットシーケンシング、抗体検証などの技術サービスを提供しています。
ハイブリドーマ技術
ハイブリドーマ技術は、モノクローナル抗体の調製に用いられます。免疫マウスの脾臓細胞をヒトまたはマウスの骨髄腫細胞と融合させることで、ハイブリドーマ細胞が形成され、特異的な抗体を分泌します。生成されたマウス由来のモノクローナル抗体は、酵素結合免疫吸着法、放射免疫測定法、免疫組織化学、フローサイトメトリー、タンパク質精製などの科学研究に用いられます。モノクローナル抗体のサンプルには、腹水、ハイブリドーマ上清などがあります。ハイブリドーマ細胞を動物の腹腔内に注入し、動物の腹腔内の生理的環境を利用して抗体を産生させることで得られるサンプルは、腹水サンプルと呼ばれます。動物の腹腔内に注入されたハイブリドーマ細胞は増殖してモノクローナル抗体を分泌し、それが腹水中に蓄積することがあります。これらの抗体には不純物(動物性タンパク質、ホルモンなど)が混入している可能性があるため、精製が必要です。 Bリンパ球の分泌機能に基づき、ハイブリドーマ細胞を培養すると、モノクローナル抗体が培養液中に分泌されることがよくあります。培養液中のモノクローナル抗体を含む液体はハイブリドーマ上清と呼ばれます。上清中のモノクローナル抗体の純度は比較的高いですが、in vitro培養によって得られるため、大量調製にはさらなる精製が必要です。
抗体精製は、複合体から高純度の抗体を単離することができます。現在、抗体精製には、抗体アフィニティー精製と抗体分離精製が一般的に用いられており、主にプロテインA/G精製、イオン交換クロマトグラフィー、ゲルろ過、沈殿、疎水性相互作用クロマトグラフィーが含まれます。中でも、プロテインA/Gアフィニティー精製サービスは、様々な抗体精製アプリケーションで広く利用されています。図1は、アルファライフテックがハイブリドーマ技術に基づいてモノクローナル抗体を調製するプロセスを示しています。

図1 ハイブリドーマ技術に基づくモノクローナル抗体の調製プロセス図。
抗体薬物複合体およびハイブリドーマ技術
抗体薬物複合体(ADC)は、抗体と細胞傷害性薬剤を化学的に結合させた新しい生物学的製剤です。抗体薬物複合体は、抗体の特異的認識能力と細胞傷害性薬剤の強力な殺傷作用を組み合わせ、抗体を介して細胞傷害性薬剤を腫瘍細胞に正確に送達することで、精密な治療を実現します。ADC薬剤中の抗体部分は、ハイブリドーマ技術や遺伝子工学抗体技術などの抗体生産技術によって調製されることが多く、ハイブリドーマ技術はADC薬剤に高品質な抗体原料を提供します。ハイブリドーマ技術によって調製されたADC薬剤とモノクローナル抗体は、がん治療などの分野で重要な役割を果たしており、単独または併用することで治療効果を高めることができます。
ハイブリドーマ技術によって作製されたモノクローナル抗体は、高い特異性を有し、特定の抗原に正確に結合・認識することができ、大量生産が可能です。ハイブリドーマシークエンシング技術により、ハイブリドーマ細胞内の抗体遺伝子を抽出・配列決定することで、対応する配列を得ることができ、その後の抗体発現に有益です。ハイブリドーマ技術によって作製されたモノクローナル抗体は、腫瘍マーカーやウイルス抗原などの特定の疾患マーカーの検出に使用でき、疾患の早期診断を強力にサポートします。さらに、免疫ブロッティングや免疫組織化学などの実験にも使用でき、タンパク質の発現、局在、構造、機能を研究することができます。
ハイブリドーマ技術抗体生産サービスワークフロー
| 手順 | サービス内容 | タイムライン |
|---|---|---|
| ステップ1:動物の免疫 | (1)動物免疫を4回、追加免疫を1回行い、計5回免疫する。 (2)免疫前の陰性血清を採取し、4回目の接種時にELISAを行って血清力価を測定した。 (3)4回目の接種で血清抗体価が基準を満たした場合、採血7日前に追加接種を1回行う。基準を満たさない場合は、定期接種を継続する。 (4)適格な効力を有する脾臓細胞を分離し、細胞融合を行う。 | 10~12週間 |
| ステップ2:融合とスクリーニング | (1)融合:免疫後、マウスの脾臓細胞を採取し、骨髄腫細胞と融合させた。 (2)増殖およびスクリーニング:得られたハイブリドーマ細胞を増殖およびELISAスクリーニングにかけて、高効率のクローンを得た。 | 6週間 |
| ステップ3:サブクローン | 限界希釈法を用いて15~25個の陽性母細胞をサブクローニングし、最終的に10~15個の陽性クローンを決定する | 3~4週間 |
| ステップ4:腹水の生成と抗体の精製 | (1)腹水生産:マウス腹水生産には10~15株のハイブリドーマ株を使用する(ハイブリドーマ株が多数得られた場合は細胞株のまま送付する) (2)腹水の同定:腹水ELISA検出、下流精製のための効力(タンパク質/ウイルス>10^5、小分子/ペプチド>10^4) (3)タンパク質A/Gの精製:腹水の精製 | 3~4週間 |
| ステップ5: 配送 | (1)モノクローナル抗体ハイブリドーマ株を3~5株用意する。 (2)ハイブリドーマ細胞1個あたり1mgの精製抗体(腹水精製)が得られる。 (3)実験プロセスレポート | 1週間 |
複数の種
免疫は、マウス、ウサギ、羊などを含むさまざまな動物に提供できます。
複数のターゲット
ハイブリドーマ技術に基づいて、タンパク質、ペプチド、小分子、ウイルス、膜タンパク質、mRNA など、複数のターゲット抗体検出サービスが利用可能です。
トレーサビリティ記録
QC品質管理基準(免疫力価、PBMC品質管理、ライブラリー品質管理、スクリーニングバリデーション品質管理)、英語実験報告書、オリジナル実験記録
パーソナライズされたプログラム
さまざまなクライアントの研究プロジェクトのニーズを満たすための、1対1のパーソナライズされたプログラムのカスタマイズ
単一B細胞選別プラットフォーム
Alpha Lifetechは、スクリーニング時間と高品質な抗体の取得において優位性を有しています。抗原の設計、合成、改変、動物免疫、単一B細胞濃縮スクリーニング、単一細胞シーケンシングを提供できます。
関連技術リソース
ハイブリドーマ技術入門ビデオ
ご不明な点がございましたら、いつでもお気軽にお問い合わせください。
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2018年7月16日 

