モノクローナル抗体開発サービス

アルファライフテック株式会社エピトープ予測、ペプチド合成、タンパク質発現、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体の産生、および細胞培養、腹水または全血清からの抗体精製を提供できます。

アルファライフテック株式会社ハイブリドーマ細胞、ゲノム編集細胞株、ノックダウン細胞株、過剰発現細胞株など、様々な安定細胞株サービスをお客様に提供してきた実績があります。当社は、あらゆるお客様に高度なカスタム細胞株サービスを提供するよう努めており、そのサービスは実績と信頼を得ています。

抗体開発戦略

1.抗原の設計と調製
これらの抗原は、タンパク質、ペプチド、またはその他の分子です。免疫原の設計には、抗原の構造、免疫学、そして送達システムに関する知識を統合した包括的なアプローチが必要です。Alpha Lifetechは、お客様のニーズに合わせて免疫原を設計できる抗原設計技術を有しています。
Alpha Lifetechは、お客様が選択できる組換えタンパク質製品を提供しています。大腸菌発現系、酵母発現系、バキュロウイルス-昆虫発現系、哺乳類発現系など、様々なタンパク質発現系を取り揃えており、研究に必要な組換えタンパク質を製造できます。

2.動物の予防接種
Alpha Lifetech ではお客様に免疫原をご提供しており、マウス、ウサギ、ヒツジ、アルパカ、モルモット、ハムスターなどの免疫動物からお選びいただけます。

3.モノクローナル抗体の製造方法

●ハイブリドーマ技術によるMabs生産
ハイブリドーマは、マウス骨髄腫細胞株と形質細胞（Bリンパ球）の2種類の細胞を融合させて作製されるハイブリッド細胞です。このヘテロ接合性細胞は、in vitroで目的抗原に対する抗体を継続的に産生することができます。ハイブリドーマ細胞株の作製は、抗原設計（ハプテン、低分子化合物、ペプチド）、動物免疫、細胞融合、陽性クローンスクリーニングの3つの段階から構成されます。独自の免疫化手法を用いることで、非常に高い細胞融合効率（B細胞1000個あたり1～10個のハイブリドーマ）と高い抗体価を実現し、生化学的スクリーニング、in vitro細胞アッセイ、動物実験といった後続の分析試験における成功率を最大限に高めています。

●ファージディスプレイ技術によるモノクローナル抗体の生産
ファージディスプレイ法は、モノクローナル抗体を生成する別の方法です。動物の血液からBリンパ球を分離し、mRNAを抽出します。PCRにより、このmRNAはcDNAに変換され、すべてのVHおよびVLセグメントが増幅されます。次に、これらのセグメントは、バクテリオファージのPIIIタンパク質とともに、通常は単鎖可変断片（scFv）としてベクターにクローニングされます。次に、このコンストラクトを使用して大腸菌に感染させ、ヘルパーファージを接種することで、約10^10個の細胞を含むライブラリが作成されます。すると、大腸菌は、その外殻の一部としてVHおよびVLセグメントを含むバクテリオファージを分泌できるようになります。その後、目的の抗原を標的とする特定のVHおよびVLセグメントを選択し、バクテリオファージを大腸菌に再接種するために使用できます。次に、プラスミドを含む細胞を分離し、配列を決定します。

4.融合スクリーニング

●細胞融合と選択
採取したB細胞は、培養下で無限に増殖する癌細胞である骨髄腫細胞と融合されます。この融合は、通常、ポリエチレングリコール（PEG）融合などの技術を用いて行われます。
融合後、ハイブリドーマ細胞はハイブリドーマのみが生存できる選択培地で培養されます。この培地には通常、融合していない骨髄腫細胞の増殖を阻害するアミノプテリンが含まれています。

●スクリーニングとクロング
得られたハイブリドーマ細胞は、標的抗原に特異的な抗体の産生の有無についてスクリーニングされます。これは通常、酵素免疫測定法（ELISA）、ウェスタンブロット法、免疫沈降法、フローサイトメトリーなどの手法を用いて行われます。

抗体を産生するハイブリドーマ細胞が特定されると、それらをクローン化して同一の細胞集団を生成します。これにより、各ハイブリドーマ細胞が産生する抗体が同一であることが保証されます。

5.抗体機能検証
Alpha Lifetech は、ウェスタンブロッティング、免疫組織化学、機能アッセイなどの抗体機能検証を提供し、モノクローナル抗体の特性評価や抗体の特異性、親和性、機能性の確認を行っています。

6.抗体の最適化
プロテインAまたはプロテインGアフィニティークロマトグラフィーなどの技術を使用して培養上清から抗体を精製し、Alpha Lifetechは抗体の親和性を向上させる抗体修飾方法も提供できます。

7.抗体産生
Alpha Lifetech は、ハイスループットスクリーニングアプリケーションおよび大規模生産向けの候補抗体を評価できます。

よくある質問よくある質問

モノクローナル抗体開発に関するFAQ

1

適切な融合ハイブリドーマを選択するにはどうすればいいですか?

融合プロセスでは、融合ハイブリッド混合物を10～15枚の96ウェルマイクロタイタープレートに播種します。各プレートにHAT-IMDM選択培地を添加後、37℃の二酸化炭素インキュベーター内で培養します。融合後9～14日後、ハイブリッド上清を採取し、目的の特異的抗体の有無を確認します。
2

選択効率を向上させるにはどうすればよいでしょうか?

形質細胞と対応する骨髄腫細胞の融合は100%効果的ではありません。最適な条件と最も効果的な刺激下であっても、細胞融合によって未融合細胞と融合細胞の混合物が生成され、それらを分離する必要があります。選択プロセスの効率を高めるため、融合に用いる骨髄腫細胞は、ヌクレオチド回収経路の重要な酵素であるHGPRTを欠損しています。その後、混合物をHAT培地で培養すると、HGPRT酵素を持つ細胞、すなわち形質細胞からHGPRTを受け継いだハイブリドーマのみが生存しました。
3

ハイブリドーマ細胞株を抗体活性についてスクリーニングするにはどうすればいいですか?

交配種の評価は重要なステップです。通常、ハイブリドーマ、クローン、サブクローンの上清のスクリーニングは、酵素免疫測定法（ELISA）、ウェスタンブロット法、蛍光活性化細胞選別法（FACS）によって行われます。当社では、上清のスクリーニングをすべて自社研究室で実施しています。
4

抗体活性スクリーニングの実施方法について詳細な手順を提供しますか?

検査対象となるハイブリドーマ上清は 500 ～ 1,440 サンプルの範囲で、9 日目から 14 日目までに検査準備が整います。検査は 3 ～ 5 日かけて行われる場合もあれば、すべて同じ日に完了する場合もあります。そのため、クライアントラボでは、選択した特定の二次スクリーニングアッセイを数週間前から準備しておくことが重要です。
5

陽性ハイブリドーマをサブクローニングする必要があるのはなぜですか?

最初のELISAスクリーニング手順で陽性ウェルが特定された後、ハイブリドーマはサブクローニング手順の準備として、より大きな容量、すなわち24ウェルプレートに移されました。ハイブリドーマのサブクローニングは、安定したモノクローンを確実に単離するために、通常、限界希釈法によって行われます。この手法では、ハイブリドーマ培養物を希釈し、96ウェルプレートに分散させてモノクローナル（1ウェルあたり1細胞）を実現します。ハイブリドーマの混合集団が発生するリスクを低減するため、少なくとも2回の限界希釈を実施する必要があります。
6

抗体の発見にハイブリドーマ技術を使用する利点は何ですか?

ハイブリッド細胞株は、最も費用対効果の高い方法で、高い親和性、安定性、特異性を備えた抗体を生産する能力が高く評価されています。