ファージディスプレイ抗体開発プラットフォーム
アルファライフテックは、抗体探索における豊富なプロジェクト経験を有し、複数の生物種を対象としたモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体のカスタマイズサービス、ならびに抗体ライブラリーの構築およびスクリーニングサービスを提供しています。アルファライフテックは、お客様に品質保証された抗体および組み換え抗体製品、ならびに関連サービスを提供することで、効率的で特異性が高く安定した抗体を調製します。包括的な抗体プラットフォームと抗体エンジニアリングを活用し、抗体調製、精製、抗体シーケンシング、検証といった技術サービスを含め、抗体製造の上流から下流までをカバーするサービスを提供しています。
Alpha Lifetechは成熟した抗体発見プラットフォームを有し、ハイブリドーマ技術、シングルB細胞技術、ファージディスプレイ技術などを基盤として、動物免疫、ファージディスプレイ抗体ライブラリーの構築とスクリーニング、抗体シークエンシング、抗体発現、抗体精製、抗体検証、抗体標識など、幅広いサービスを顧客に提供しています。Alpha Lifetechは標準的な生産ラインを有し、抗体調製サービスに加え、抗体ヒト化、抗体親和性成熟、ADC医薬品の設計開発、CAR-T後続配列設計などの支援サービスも提供可能です。同時に、Alpha LifetechはM13、T4、T7ファージディスプレイ技術プラットフォームを基盤として、最大10^8~10^9の保存容量を持つ抗体ライブラリーを構築しています。ライブラリーの陽性率、挿入率、多様性はいずれも90%以上に達します。
ファージディスプレイ技術
モノクローナル抗体の生産は、当初、マウスハイブリドーマモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマモノクローナル抗体技術を用いていました。具体的には、免疫マウスの脾臓細胞とヒトまたはマウスの骨髄腫細胞を融合させることでハイブリドーマ細胞が形成され、この細胞が特異的なハイブリドーマモノクローナル抗体を分泌します。マウスモノクローナル抗体をヒト化改変し、また、抗体にヒト免疫グロブリン領域を付加する遺伝子工学的改変を行うことで、免疫原性を低下させることができます。モノクローナル抗体工学は、生物医学および臨床応用において広く利用されています。
Alpha Lifetechは、前臨床研究プロトコルの設計から抗体薬物複合体(ADC)の創製、動物実験での検証まで、ワンストップの抗体エンジニアリングサービスを提供しています。抗体薬物複合体(ADC)は、がん細胞に化学療法薬を送達することができます。がん細胞に発現した特定の標的に結合した後、ADCは細胞傷害性薬剤をがん細胞に放出します。Alpha Lifetechは、お客様に包括的な抗体親和性成熟サービスも提供しています。高度な変異最適化とハイスループットファージディスプレイスクリーニング技術を駆使し、まず特定の親和性を持つ抗体をスクリーニングし、次にアミノ酸変異を導入して多様な変異体を生成します。その後、スクリーニング技術を用いて高親和性抗体を評価・スクリーニングします。複数回の最適化と構造解析を経て、最終的により高い親和性とより強い特異性を持つ抗体が得られます。
アルファライフテックは、免疫ライブラリー、ネイティブライブラリー、半合成ライブラリー、合成ライブラリーなど、様々なタイプの抗体ファージディスプレイライブラリーを構築できます。抗体ライブラリーの大容量化により、特異性の高い抗体が得られます。pMECS、pComb3X、pCANTAB 5Eなどの多様なファージミドベクターに加え、TG1 E. coli、XL1 Blue、ER2738などの菌株も提供可能です。最大10^9のライブラリー容量に加え、ライブラリーへの標的断片挿入率も高く、お客様が満足する抗体スクリーニングに十分な条件を備えています。アルファライフテックのファージディスプレイ技術に基づく抗体作製サービスのフローチャートを図1に示します。

図1 ファージディスプレイ技術に基づくモノクローナル抗体の調製プロセス図。
ファージディスプレイ抗体作製ワークフロー
| 手順 | サービス内容 | タイムライン |
|---|---|---|
| ステップ1:動物の免疫 | (1)動物免疫を4回、追加免疫を1回行い、計5回免疫する。 (2)免疫前の陰性血清を採取し、4回目の接種時にELISAを行って血清力価を測定した。 (3)4回目の接種で血清抗体価が基準を満たした場合、採血7日前に追加接種を1回行う。基準を満たさない場合は、定期接種を継続する。 (4)適格な効力、採血および単球の分離 | 10週間 |
| ステップ2:cDNAの準備 | (1)PBMC全RNA抽出(RNA抽出キット) (2)高忠実度RT-PCRによるcDNAの調製(逆転写キット) | 1日 |
| ステップ3:抗体ライブラリの構築 | (1)cDNAを鋳型として2回のPCRにより遺伝子を増幅した。 (2)ファージ構築と形質転換:遺伝子スプライシングファージミドベクター、TG1宿主細菌のエレクトロポレーション形質転換、抗体ライブラリーの構築。 (3)同定:ランダムに24個のクローンを選択し、PCR同定陽性率+挿入率を測定した。 (4)補助ファージ調製:M13ファージの増幅+精製。 (5)ファージディスプレイライブラリーレスキュー | 3~4週間 |
| ステップ4:抗体ライブラリスクリーニング(3ラウンド) | (1)デフォルト3ラウンドスクリーニング(固相スクリーニング):非特異的抗体を可能な限り除去するための圧力スクリーニング。 (2)単一クローン増幅バクテリオファージ選択+IPTG誘導発現+陽性クローンのELISA検出。 (3)陽性クローンは全て遺伝子配列決定のために選択された。 | 4~5週間 |
サポートサービス
お客様のニーズに応じて、さまざまな動物ベースの免疫ライブラリ構築サービスと自然抗体ライブラリスクリーニングサービスを提供できます。
複数のターゲット
タンパク質、ペプチド、小分子、ウイルス、膜タンパク質、mRNA など、複数のターゲット抗体検出サービスが利用可能です。
複数のベクトル
パーソナライズされたライブラリ構築サービスでは、PMECS、pComb3X、pCANTAB 5Eなどのさまざまなバクテリオファージベクターを提供し、お客様のニーズに合わせて変更することができます。
成熟したプラットフォーム
貯蔵容量は10^8-10^9に達し、挿入率はすべて90%を超え、スクリーニングによって得られた抗体の親和性は一般にnM pMレベルである。
単一B細胞選別プラットフォーム
Alpha Lifetechは、スクリーニング時間と高品質な抗体の取得において優位性を有しています。抗原の設計、合成、改変、動物免疫、単一B細胞濃縮スクリーニング、単一細胞シーケンシングを提供できます。
ファージディスプレイ抗体開発プラットフォーム
Alpha Lifetech は、抗体の調製、抗体の精製、抗体の配列決定など、ファージディスプレイ抗体開発の技術サービスを提供できます。
ご不明な点がございましたら、いつでもお気軽にお問い合わせください。
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2018年7月16日 

