ファージディスプレイ抗体開発プラットフォーム
アルファライフテックは、抗体探索における豊富なプロジェクト経験に基づき、複数の生物種に対応したモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体のカスタマイズサービス、ならびに抗体ライブラリーの構築およびスクリーニングサービスを提供しています。アルファライフテックは、お客様に品質保証された抗体および組換え抗体製品、ならびに関連サービスを提供し、効率的で特異性が高く、安定性に優れた抗体の作製を支援します。包括的な抗体プラットフォームと抗体エンジニアリングを活用することで、抗体製造の上流から下流までを網羅するサービスを提供しており、抗体調製、精製、抗体配列決定、検証などの技術サービスも含まれています。
Alpha Lifetechは、動物免疫、ファージディスプレイ抗体ライブラリーの構築とスクリーニング、抗体シーケンス、抗体発現、抗体精製、抗体検証、ハイブリドーマ技術、シングルB細胞技術、ファージディスプレイ技術などに基づく抗体標識など、幅広いサービスを顧客に提供する成熟した抗体発見プラットフォームを有しています。Alpha Lifetechは標準的な生産ラインを備えており、抗体調製サービスに加え、抗体ヒト化、抗体親和性成熟、ADC創薬設計・開発、CAR-T後続シーケンス設計などのサポートサービスも提供可能です。同時に、Alpha LifetechはM13、T4、T7ファージディスプレイ技術プラットフォームに基づく抗体ライブラリーを構築しており、最大10^8~10^9の容量を有しています。ライブラリーの陽性率、挿入率、多様性はいずれも90%を超えています。
ファージディスプレイ技術
モノクローナル抗体の生産は、当初、ハイブリドーマモノクローナル抗体技術を用いてマウスハイブリドーマモノクローナル抗体を生産することから始まった。具体的には、免疫したマウスの脾臓細胞とヒトまたはマウスの骨髄腫細胞を融合させることでハイブリドーマ細胞が形成され、この細胞が特異的なハイブリドーマモノクローナル抗体を分泌する。マウスモノクローナル抗体をヒト化したり、抗体に一定のヒト免疫グロブリン領域を付与する遺伝子工学的改変を行うことで、免疫原性を低減することができる。モノクローナル抗体工学は、生物医学および臨床応用において広く利用されている。
Alpha Lifetechは、前臨床研究プロトコルの設計から抗体薬物複合体(ADC)の発見、動物実験による検証まで、ワンストップの抗体エンジニアリングサービスを提供しています。抗体薬物複合体(ADC)は、化学療法薬をがん細胞に送達することができます。がん細胞上に発現する特定の標的に結合した後、ADCは細胞毒性薬をがん細胞内に放出します。Alpha Lifetechは、包括的な抗体親和性成熟サービスもお客様に提供しています。高度な変異最適化とハイスループットファージディスプレイスクリーニング技術により、まず特定の親和性を持つ抗体をスクリーニングし、次にアミノ酸変異を導入して多様な変異体を生成します。その後、スクリーニング技術を用いて高親和性抗体を評価およびスクリーニングします。複数回の最適化と構造解析を経て、最終的により高い親和性とより強い特異性を持つ抗体が得られます。
Alpha Lifetechは、免疫ライブラリー、ネイティブライブラリー、セミシンセティックライブラリー、シンセティックライブラリーなど、様々なタイプの抗体ファージディスプレイライブラリーを構築できます。抗体ライブラリーの高い容量に基づき、特異性の高い抗体を得ることができます。pMECS、pComb3X、pCANTAB 5Eなどの複数のファージミドベクターに加え、TG1大腸菌、XL1 Blue、ER2738などの菌株も提供可能です。ライブラリー容量は最大10^9に達するだけでなく、ライブラリーへの標的断片挿入率も高く、お客様のご要望を満たす抗体スクリーニングに十分な条件を備えています。ファージディスプレイ技術に基づくAlpha Lifetechの抗体調製サービスのフローチャートを図1に示します。

図1 ファージディスプレイ技術に基づいたモノクローナル抗体の製造工程図。
ファージディスプレイ抗体産生ワークフロー
| 手順 | サービスコンテンツ | タイムライン |
|---|---|---|
| ステップ1:動物の予防接種 | (1)動物への免疫接種4回、追加免疫接種1回、合計5回の免疫接種。 (2)免疫前に陰性血清を採取し、4回目の投与時にELISAを実施して血清力価を検出した。 (3)4回目の接種後の血清抗体価が基準を満たしている場合は、採血の7日前に追加の免疫接種を1回行う。基準を満たしていない場合は、通常の免疫接種を継続する。 (4)適格な効力、採血および単球の分離 | 10週間 |
| ステップ2:cDNAの調製 | (1)PBMC全RNA抽出(RNA抽出キット) (2)高精度RT-PCRによるcDNAの調製(逆転写キット) | 1日 |
| ステップ3:抗体ライブラリーの構築 | (1)cDNAを鋳型として、2回のPCRにより遺伝子を増幅した。 (2)ファージの構築と形質転換:遺伝子スプライシングファージミドベクター、TG1宿主細菌の電気穿孔形質転換、抗体ライブラリーの構築。 (3)同定:ランダムに24個のクローンを選択し、PCR同定陽性率+挿入率を算出する。 (4)ファージ調製補助:M13ファージの増幅+精製。 (5)ファージディスプレイライブラリーの救済 | 3~4週間 |
| ステップ4:抗体ライブラリースクリーニング(3ラウンド) | (1)デフォルトの3ラウンドスクリーニング(固相スクリーニング):非特異的抗体を可能な限り最大限除去するための圧力スクリーニング。 (2)単一クローン増幅バクテリオファージ選択+IPTG誘導発現+陽性クローンのELISA検出。 (3)すべての陽性クローンは遺伝子配列決定のために選択された。 | 4~5週間 |
サポートサービス
お客様のニーズに応じて、様々な動物由来免疫ライブラリー構築サービスおよび天然抗体ライブラリースクリーニングサービスを提供できます。
複数のターゲット
タンパク質、ペプチド、低分子化合物、ウイルス、膜タンパク質、mRNAなど、複数の標的を対象とした抗体探索サービスをご利用いただけます。
複数のベクトル
パーソナライズされたライブラリー構築サービスでは、PMECS、pComb3X、pCANTAB 5Eなどの様々なバクテリオファージベクターを提供し、お客様のニーズに合わせて改変することができます。
成熟したプラットフォーム
記憶容量は10^8~10^9に達し、挿入率はすべて90%以上であり、スクリーニングによって得られた抗体の親和性は一般的にnM/pMレベルである。
単一B細胞選別プラットフォーム
Alpha Lifetechは、スクリーニング時間の短縮と高品質抗体の取得において優位性を持っています。抗原設計、合成、修飾、動物免疫、単一B細胞濃縮スクリーニング、単一細胞シーケンス解析などのサービスを提供可能です。
ファージディスプレイ抗体開発プラットフォーム
Alpha Lifetechは、抗体調製、抗体精製、抗体配列決定など、ファージディスプレイ抗体開発に関する技術サービスを提供できます。
ご不明な点がございましたら、いつでもお気軽にお問い合わせください。
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2018年7月16日 

