図1 Co-IPアッセイの模式図。（参考元： 共免疫沈降アッセイ - PubMed (nih.gov)）

プルダウンアッセイは、既知のタンパク質を磁気ビーズ上に固定し、検出対象物質を添加します。溶出液中の相互作用タンパク質の吸着を検出します。

1988 年、スミスらはプルダウン アッセイに応用された GST 融合タンパク質を精製しました。これは Gst プル ダウンと呼ばれ、標的タンパク質に GST タグを追加し、相互作用するタンパク質を GSH を介して捕捉し、結合を溶出させて WB アッセイで検証します。

図2 GSTプルダウンアッセイの概略図。（参考元： PIF4結合をin vitroで研究するためのGSTプルダウンアッセイ - PubMed (nih.gov) ）

WB実験（ウエスタンブロット実験またはウェスタンブロットとも呼ばれます）の本質は抗原と抗体の特異的反応であり、基本原理はSDSポリアクリルアミドゲル電気泳動によって変性タンパク質を分離し、膜転写（湿式または半乾式回転）を介して固相担体（PVDF膜、NC膜など）に転写することです。ブロッキング（BSA、バターミルクなどを使用）に続いて、一次抗体を適用してタンパク質に特異的に結合させ、フィルムを洗浄した後、フルオレセイン標識二次抗体を添加します。二次抗体を一次抗体に結合させることにより、基質の発色と化学発光によって標的タンパク質を観察できます。一般的には、サンプル中に特定のタンパク質が発現しているかどうかを判断し、その発現レベルを大まかに分析するために使用されます。

共免疫沈降技術は、免疫沈降実験に基づいて、2つ以上のタンパク質間に相互作用があるかどうかを分析するために使用されます。他の実験技術（GSTプルダウン、ウエスタンブロット、クロマチン免疫沈降アッセイなど）のタンパク質相互作用分析と比較して、Co-IP技術はより高い特異性、感度、および高い再現性を備えており、非特異的結合の干渉を回避し、自然な状態でのタンパク質の相互作用を反映できます。