安定細胞株構築サービス

Alpha Lifetechは長年にわたり、安定細胞株構築プロセス開発の分野に深く携わってきました。300種類以上の腫瘍細胞および初代細胞を用いた、完璧な安定細胞株構築プロセスプラットフォームを構築しており、科学研究やプロジェクト研究にかかる時間を節約しながら安定細胞株を提供し、その後の生産を容易にします。Alpha Lifetechは、菌株プロセス開発、菌株スクリーニング、菌株構築、組換えタンパク質および抗体生産などのサービスも顧客に提供し、新薬開発のための研究基盤を提供します。

Alpha Lifetechは、様々な種類の細胞安定形質転換株に対応した実験プロセスをカスタマイズできるレンチウイルス感染細胞プラットフォームを有しています。当社は遺伝子ノックアウト技術を用いてCRISPR/Cas9ノックアウト細胞株を構築しました。形質転換株の安定化には、遺伝子過剰発現および遺伝子サイレンシング技術を用いました。遺伝子部位特異的統合により、頂点統合細胞株構築サービスが完成します。

安定細胞株構築入門

安定細胞株とは、外来遺伝子を宿主細胞のゲノムに組み込み、宿主細胞内で外来遺伝子を長期間安定的に発現させることができる細胞株を指します。その原理は、外来遺伝子を一定の耐性を持つベクターに縮小し、宿主細胞にトランスフェクションを行い、外来遺伝子を宿主染色体に組み込み、ベクターに含まれる耐性遺伝子をスクリーニングすることで、実験の要件を満たす、標的タンパク質の高発現または標的遺伝子の安定的なサイレンシングを示す安定細胞株を得るというものです。

Alpha Lifetechは、独立した保管施設、完璧な細胞凍結・保管管理システム、そして300種類以上の腫瘍細胞と初代細胞を取り揃え、お客様の科学研究に特化してサービスを提供しています。

安定細胞株構築プロセス

安定細胞株の構築方法

安定細胞株の構築方法には、レンチウイルス媒介法、トランスポゾン媒介法、CRISPR/Cas9媒介法、およびプラスミドスクリーニング法が含まれる。

レンチウイルスを用いた遺伝子導入は、安定細胞株を構築するための最も一般的な方法の一つです。この方法は、ほぼすべての種類の細胞に感染し、遺伝物質を宿主細胞ゲノムに組み込むことで、長期間にわたって安定的に遺伝子発現を維持できるという利点があります。しかし、このシステムにはいくつかの限界があり、レンチウイルスのパッケージング容量には限りがあるため、転写領域が長い遺伝子の転写には適していません。

レンチウイルスを用いた方法と比較して、トランスポゾンを用いた方法は遺伝子サイズに制限がなく、技術の継続的な最適化により、トランスポゾン挿入効率は数倍向上している。欠点としては、初代細胞に一定の制限があり、細胞へのトランスフェクションが難しいことが挙げられる。

CRISPR/Cas9を用いた技術には、CRISPR遺伝子ノックアウトとCRISPR遺伝子ノックインが含まれます。CRISPR遺伝子ノックアウトとは、DNA二本鎖切断を導入することで標的遺伝子の機能を喪失させる技術です。CRISPR遺伝子ノックインとは、外来DNA断片を特定の遺伝子に導入する技術で、欠陥遺伝子の修復や新たな機能遺伝子の導入に利用できます。

プラスミドスクリーニングは最も原始的な細胞株構築法であり、標的プラスミドを細胞に導入し、対応する耐性を利用して長期スクリーニングを行うだけで、一定の確率で安定した細胞株が得られる。

様々な安定細胞株を構築する方法

仲介方法	レンチウイルスシステム	トランスポゾンシステム	CRISP/Cas9を介した	プラスミドスクリーニング
キャリア容量	5KB	10KB	5KB	10KB
媒介効率	高い	普通	普通	低い
タイムライン	1～2週間	3～4週間	3～4週間	4～6週間
アドバンテージ	速くて効率的	安全性と安定性	固定小数点積分	低コスト
欠点	バイオセーフティリスク	発現量普通	CAS9遺伝子導入は困難で費用がかかる。	効率が低く不安定

安定細胞株の構築における技術的な困難

プロセスをスケールアップする前に、小型バイオリアクターを使用して、ガス、培養液システム、細胞に加わる最小流体力学的ストレスなどのパラメータを決定し、スケール間の培養の一貫性を確保します。しかし、対応するプロセスパラメータが決定されたとしても、製造現場の大型バイオリアクターの環境は均一ではなく、失敗しやすいものです。Alpha Lifetechは、プロセススケールアップ培養において長年の経験を有しており、ミスをある程度回避し、リスクを低減し、成功率を大幅に向上させることができます。同時に、Alpha Lifetechは使用する原材料と培地バッチの一貫性を確保し、細胞培養プロセスのスケールアップにおける失敗率を低減します。

Alpha Lifetechは、生産過程における細胞株の安定性を確保するための包括的な安定細胞株プロセス開発プラットフォームを有しています。また、お客様のニーズに合わせたカスタマイズサービスも提供可能です。

安定細胞株構築サービスの内容

コンテンツ	タイムライン
細胞培養には、顧客から提供されたHEK293細胞株を使用しました。	3-5 数ヶ月
sgRNA-Cas9プラスミド（スクリーニング遺伝子G418を含む）の構築。
sgRNA-Cas9と修復DNAテンプレートをHEK293細胞株に同時に導入した。
モノクローナル細胞株スクリーニング（GFP遺伝子）ノックイン陽性クローン）。
納品物：ベクター、GFP遺伝子ノックイン株、シーケンス解析結果、すべての生データ、実験レポート

細胞は追跡できる

これらの細胞はATCCなどの専門機関から購入されており、登録要件を満たすための証明書を提供できます。

生産上の優位性

Alpha Lifetechは、多様な開発ニーズに対応できる長年の経験を有しています。当社は、様々な種類の細胞、独立した保管工場、完璧な細胞凍結設備、そして保管管理システムを備えています。

プロジェクトの品質管理

各プロジェクトは厳格な品質管理プロセスを経て、高い基準を満たす細胞株をお客様にお届けすることを保証しています。

技術的優位性

豊富な細胞培養経験を持つエンジニアに加え、当社には反応器の状態を改善し、プロセスパラメータを変更するための高度な技術進化アルゴリズムがあります。

ご不明な点がございましたら、いつでもお気軽にお問い合わせください。

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