安定細胞株構築サービス

アルファライフテックは長年にわたり、安定細胞株構築プロセスの開発に深く関わってきました。300種類以上の腫瘍細胞と初代培養細胞を保有する完璧な安定細胞株構築プロセスプラットフォームを構築し、安定した細胞株を提供するとともに、科学研究やプロジェクト研究の時間を節約し、その後の製造を円滑化します。また、アルファライフテックは、株プロセス開発、株スクリーニング、株構築、組み換えタンパク質、抗体生産などのサービスをお客様に提供し、新薬研究の基盤を提供しています。

Alpha Lifetechは、レンチウイルス感染細胞プラットフォームを有しており、様々な細胞種における安定した形質転換株の実験プロセスをカスタマイズできます。遺伝子ノックアウト技術を用いてCRISPR/Cas9ノックアウト細胞株を構築しました。遺伝子過剰発現および遺伝子サイレンシング技術を用いて、形質転換株の安定化を図りました。遺伝子部位特異的な統合により、頂点統合細胞株構築サービスが完結します。

安定細胞株構築入門

安定細胞株とは、外来遺伝子を宿主細胞のゲノムに組み込み、宿主細胞内で外来遺伝子を長期にわたって安定的に発現させる細胞株を指します。その原理は、外来遺伝子を一定の耐性を持つベクターに導入し、宿主細胞に導入後、宿主染色体に外来遺伝子を組み込み、ベクターに含まれる耐性遺伝子をスクリーニングすることで、実験の要件を満たす、標的タンパク質の高発現または標的遺伝子の安定したサイレンシングを示す安定細胞株を取得することです。

Alpha Lifetech には独立した保管ワークショップ、完璧な細胞凍結および保管管理システムがあり、科学研究専用の 300 種類以上の腫瘍細胞と原発細胞からお選びいただけます。

安定細胞株構築プロセス

安定細胞株構築方法

安定した細胞株の構築方法には、レンチウイルス媒介、トランスポゾン媒介、CRISPR/Cas9 媒介、およびプラスミドスクリーニングが含まれます。

レンチウイルスを介した方法は、安定した細胞株を構築するために最も一般的に用いられる方法の一つです。このアプローチは、ほぼすべての種類の細胞に感染し、遺伝物質を宿主細胞のゲノムに組み込むことで、長期間にわたって安定した発現を実現できるという利点があります。しかし、このシステムには一定の限界があり、レンチウイルスのパッケージング能力には限界があるため、長い転写領域を持つ遺伝子の転写には適していません。

レンチウイルスを介した方法と比較して、トランスポゾンを介した方法は遺伝子サイズに制限がなく、技術の継続的な最適化により、トランスポゾン挿入効率は数倍向上しています。欠点は、初代培養細胞や細胞への導入に一定の制限があり、導入が困難なことです。

CRISPR/Cas9を介した技術には、CRISPR遺伝子ノックアウトとCRISPR遺伝子ノックインが含まれます。CRISPR遺伝子ノックアウトとは、DNA二本鎖切断を導入することで標的遺伝子の機能を喪失させることを指します。CRISPR遺伝子ノックインとは、特定の遺伝子に外来DNA断片を導入することで、欠陥遺伝子の修復や新たな機能遺伝子の導入に利用することができます。

プラスミドスクリーニングは最も原始的な細胞株構築手法であり、標的プラスミドを細胞に導入し、対応する耐性を長期スクリーニングに用いるだけで済みます。これにより、安定した細胞株が得られる確率が一定になります。

さまざまな安定細胞株の構築方法

仲介方法	レンチウイルスシステム	トランスポゾンシステム	CRISP/Cas9を介した	プラスミドスクリーニング
キャリア容量	5 KB	10 KB	5 KB	10 KB
媒介効率	高い	普通	普通	低い
タイムライン	1～2週間	3～4週間	3～4週間	4～6週間
アドバンテージ	高速かつ効率的	セキュリティと安定性	固定小数点積分	低コスト
欠点	バイオセーフティリスク	表現の豊かさ普通	CAS9の導入は困難でコストがかかる	低い効率と不安定さ

安定した細胞株の構築における技術的な困難

プロセスをスケールアップする前に、小型バイオリアクターを用いて、ガス、培養液システム、細胞に作用する最小流体力学的ストレスなどのパラメータを決定し、スケール間の培養を保証します。しかし、対応するプロセスパラメータを決定したとしても、生産設備内の大型バイオリアクターの環境は不均一であり、失敗しやすい状況にあります。アルファライフテックは、プロセスのスケールアップ培養において長年の経験を有しており、ある程度のミスを回避し、リスクを軽減し、成功率を大幅に向上させることができます。同時に、アルファライフテックは使用する原材料と培地バッチの一貫性を確保し、細胞培養プロセスのスケールアップにおける失敗率を低減します。

Alpha Lifetechは、製造中の細胞株の安定性を確保するための包括的な安定細胞株プロセス開発プラットフォームを備えています。また、お客様のニーズに合わせたカスタマイズサービスも提供可能です。

安定細胞株構築サービスの内容

コンテンツ	タイムライン
顧客から提供されたHEK293細胞株を培養します。	3-5 ヶ月
sgRNA-Cas9 プラスミドの構築（スクリーニング遺伝子 G418 を含む）。
sgRNA-Cas9 と修復 DNA テンプレートは HEK293 細胞株に共に移されました。
モノクローナル細胞株スクリーニング（GFP遺伝子ノックイン陽性クローン）。
納品内容: ベクター、GFP遺伝子ノックイン株、シーケンシング結果、すべての生データ、ラボレポート

細胞は追跡できる

細胞は ATCC などの専門組織から購入され、登録要件を満たす証明を提供できます。

生産上の優位性

Alpha Lifetech は、多様な開発ニーズを満たす長年の経験を持っています。当社は、さまざまな細胞、独立した保管ワークショップ、完璧な細胞凍結、および保管管理システムを備えています。

プロジェクト品質管理

各プロジェクトは厳格な品質管理プロセスを経て、高い基準を満たす細胞株を顧客に提供します。

技術的優位性

当社は、細胞に関する豊富な経験を持つエンジニアに加え、リアクターの条件を改善し、プロセスパラメータを変更するための高度な技術進化アルゴリズムを備えています。

ご不明な点がございましたら、いつでもお気軽にお問い合わせください。

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