Apa kuwi Rekayasa Antibodi?

Kanthi bantuan rekayasa antibodi, wis bisa ngowahi ukuran molekul, farmakokinetik, imunogenisitas, afinitas pengikatan, spesifisitas lan fungsi efektor antibodi. Sawise nyintesis antibodi, pengikatan spesifik antibodi ndadekake antibodi kasebut migunani banget ing diagnosis lan perawatan klinis. Liwat rekayasa antibodi, antibodi kasebut bisa nyukupi kabutuhan pangembangan awal obat lan diagnostik.

Tujuan saka rekayasa antibodi yaiku kanggo ngrancang lan ngasilake fungsi sing spesifik banget lan stabil sing ora bisa ditindakake dening antibodi alami, sing dadi pondasi kanggo produksi antibodi terapeutik.

Alpha Lifetech, kanthi pengalaman proyek sing ekstensif ing rekayasa antibodi, bisa nyedhiyakake layanan antibodi monoklonal lan poliklonal sing disesuaikan kanggo macem-macem spesies, uga layanan konstruksi lan skrining perpustakaan antibodi tampilan fag. Alpha Lifetech bisa nyedhiyakake antibodi biosimilar sing berkualitas lan produk protein rekombinan kanggo para pelanggan, uga layanan sing cocog, kanggo ngasilake antibodi sing efisien, spesifik banget, lan stabil. Kanthi nggunakake platform antibodi, protein, lan sistem tampilan fag sing komprehensif, kita nyedhiyakake layanan sing nyakup hulu lan hilir produksi antibodi, kalebu layanan teknis kayata humanisasi antibodi, pemurnian antibodi, sekuensing antibodi, lan validasi antibodi.

Tahap perintis rekayasa antibodi ana hubungane karo rong teknologi:

--Teknologi DNA Rekombinan

--Teknologi Hibridoma

Perkembangan rekayasa antibodi sing cepet iki ana gandheng cenenge karo telung teknologi penting:

--Teknologi kloning gen lan reaksi rantai polimerase

--Ekspresi protein: Protein rekombinan diprodhuksi dening sistem ekspresi kayata ragi, virus bentuk batang, lan tanduran

--Desain struktural sing dibantu komputer

Generasi pertama antibodi dimanusiakake kanggo produksi antibodi kimerik, ing ngendi wilayah variabel antibodi monoklonal tikus digandhengake karo wilayah konstan molekul IgG manungsa. Wilayah pengikatan antigen (CDR) saka antibodi monoklonal tikus generasi kapindho ditransplantasikan menyang IgG manungsa. Kajaba wilayah CDR, kabeh antibodi liyane meh padha karo antibodi manungsa, lan upaya ditindakake kanggo nyegah respon antibodi anti tikus manungsa (HAMA) nalika nggunakake antibodi klon tikus kanggo perawatan manungsa.

 

Kanggo mbangun perpustakaan tampilan fag, langkah pertama yaiku njupuk gen sing ngode antibodi, sing bisa diisolasi saka sel B kewan sing diimunisasi (konstruksi perpustakaan kekebalan), diekstrak langsung saka kewan sing ora diimunisasi (konstruksi perpustakaan alami), utawa malah dirakit in vitro karo fragmen gen antibodi (konstruksi perpustakaan sintetik). Banjur, gen kasebut diamplifikasi dening PCR, dilebokake menyang plasmid, lan diekspresikan ing sistem inang sing cocog (ekspresi ragi (biasane Pichia pastoris), ekspresi prokariotik (biasane E. coli), ekspresi sel mamalia, ekspresi sel tanduran, lan ekspresi sel serangga sing kena infeksi virus bentuk batang). Sing paling umum yaiku sistem ekspresi E. coli, sing nggabungake urutan antibodi pengkodean tartamtu menyang fag lan ngode salah sawijining protein cangkang fag (pIII utawa pVIII). Fusi gen, Lan ditampilake ing permukaan bakteriofag. Inti saka teknologi iki yaiku mbangun perpustakaan tampilan fag, sing nduweni kaunggulan tinimbang perpustakaan alami amarga bisa duwe ikatan tartamtu. Sabanjure, antibodi kanthi spesifisitas antigen disaring liwat proses seleksi biologis, antigen target difiksasi, fag sing ora kaiket dibilas bola-bali, lan fag sing kaiket dibilas kanggo pengayaan luwih lanjut. Sawise telung babak utawa luwih pengulangan, antibodi spesifisitas dhuwur lan afinitas dhuwur diisolasi.

Gambar 3: Konstruksi lan Penyaringan Pustaka Antibodi

Teknologi DNA rekombinan bisa digunakake kanggo ngasilake fragmen antibodi. Antibodi Fab wiwitane mung bisa dihidrolisis dening protease lambung kanggo ngasilake 2 fragmen (Fab'), sing banjur dicerna dening papain kanggo ngasilake fragmen Fab individu. Fragmen Fv kasusun saka VH lan VL, sing nduweni stabilitas sing kurang amarga ora ana ikatan disulfida. Mulane, VH lan VL digandhengake bebarengan liwat peptida cendhak saka 15-20 asam amino kanggo mbentuk antibodi fragmen variabel rantai tunggal (scFv) kanthi bobot molekul kira-kira 25KDa.

Panliten babagan struktur antibodi ing Camelidae (Camel, LIama, lan Alpaca) wis njlentrehake manawa antibodi mung duwe rantai abot lan ora duwe rantai entheng, mula diarani antibodi rantai abot (hcAb). Domain variabel antibodi rantai abot diarani antibodi domain tunggal utawa nanobodi utawa VHH, kanthi ukuran 12-15 kDa. Minangka monomer, ora duwe ikatan disulfida lan stabil banget, kanthi afinitas sing dhuwur banget kanggo antigen.

Gambar 5: Antibodi Rantai Abot lan VHH/Nanobody

Ekspresi bebas sel migunakake ekspresi DNA alami utawa sintetis kanggo nggayuh sintesis protein in vitro, biasane nggunakake sistem ekspresi E. coli. Sistem iki ngasilake protein kanthi cepet lan ngindhari beban metabolisme lan sitotoksik ing sel nalika ngasilake protein rekombinan kanthi jumlah akeh in vivo. Sistem iki uga bisa ngasilake protein sing angel disintesis, kayata sing angel diowahi sawise translasi utawa disintesis protein membran.