Apa Rekayasa Antibodi?

Kanthi bantuan rekayasa antibodi, bisa ngowahi ukuran molekul, farmakokinetik, imunogenisitas, afinitas ikatan, spesifik lan fungsi efektor antibodi. Sawise nyintesis antibodi, ikatan spesifik antibodi ndadekake dheweke dadi penting banget ing diagnosis lan perawatan klinis. Liwat rekayasa antibodi, dheweke bisa nyukupi kabutuhan pangembangan awal obat lan diagnostik.

Tujuan rekayasa antibodi yaiku ngrancang lan ngasilake fungsi stabil sing spesifik banget sing ora bisa digayuh antibodi alami, nggawe dhasar kanggo produksi antibodi terapeutik.

Alpha Lifetech, kanthi pengalaman proyek ekstensif ing rekayasa antibodi, bisa nyedhiyakake layanan antibodi monoklonal lan poliklonal sing disesuaikan kanggo macem-macem spesies, uga layanan konstruksi perpustakaan lan skrining antibodi tampilan phage. Alpha Lifetech bisa nyedhiyakake antibodi biosimilar kualitas lan produk protein rekombinan marang pelanggan, uga layanan sing cocog, kanggo ngasilake antibodi sing efisien, spesifik, lan stabil. Kanthi nggunakake antibodi lengkap, platform protein lan sistem tampilan phage, kita nyedhiyakake layanan sing nyakup hulu lan hilir produksi antibodi, kalebu layanan teknis kayata humanisasi antibodi, pemurnian antibodi, urutan antibodi, lan validasi antibodi.

Tahap perintis rekayasa antibodi ana gandhengane karo rong teknologi:

--Teknologi DNA rekombinan

--Teknologi Hybridoma

Perkembangan teknik antibodi kanthi cepet ana gandhengane karo telung teknologi penting:

--Teknologi kloning gen lan reaksi rantai polimerase

--Ekspresi protein: Protein rekombinan diprodhuksi dening sistem ekspresi kayata ragi, virus sing bentuke rod, lan tanduran.

- Desain struktur sing dibantu komputer

Antibodi generasi pisanan digawe manungsa kanggo produksi antibodi chimeric, ing ngendi wilayah variabel antibodi monoklonal tikus disambung menyang wilayah konstan molekul IgG manungsa. Wilayah pengikat antigen (CDR) saka antibodi monoklonal tikus generasi kapindho ditransplantasikan menyang IgG manungsa. Kajaba wilayah CDR, kabeh antibodi liyane meh dadi antibodi manungsa, lan upaya ditindakake supaya ora nyebabake respon antibodi anti tikus manungsa (HAMA) nalika nggunakake antibodi klon tikus kanggo perawatan manungsa.

 

Kanggo mbangun perpustakaan tampilan phage, langkah pisanan yaiku njupuk antibodi sing ngodhe gen, sing bisa diisolasi saka sel B kewan sing diimunisasi (konstruksi perpustakaan kekebalan), diekstrak langsung saka kewan sing ora diimunisasi (konstruksi perpustakaan alam), utawa malah dirakit in vitro kanthi fragmen gen antibodi (konstruksi perpustakaan sintetik). Banjur, gen kasebut digedhekake dening PCR, dilebokake ing plasmid, lan diekspresikake ing sistem inang sing cocog (ekspresi ragi (biasane Pichia pastoris), ekspresi prokariotik (biasane E. coli), ekspresi sel mamalia, ekspresi sel tanduran, lan ekspresi sel serangga sing kena infeksi virus berbentuk batang). Sing paling umum yaiku sistem ekspresi E. coli, sing nggabungake urutan antibodi enkoding spesifik menyang phage lan ngode salah sawijining protèin cangkang phage (pIII utawa pVIII). The fusi gen saka, Lan ditampilake ing lumahing bacteriophages. Inti saka teknologi iki yaiku mbangun perpustakaan tampilan phage, sing nduweni kaluwihan tinimbang perpustakaan alam amarga bisa duwe ikatan khusus. Salajengipun, antibodi kanthi spesifisitas antigen disaring liwat proses seleksi biologis, antigen target tetep, fag sing ora kaiket bola-bali dikumbah, lan fag sing kaiket dicuci kanggo pengayaan luwih lanjut. Sawise telung utawa luwih babak pengulangan, spesifisitas dhuwur lan antibodi afinitas dhuwur diisolasi.

Fig 3: Konstruksi lan Screening Pustaka Antibodi

Teknologi DNA rekombinan bisa digunakake kanggo ngasilake fragmen antibodi. Antibodi Fab wiwitane mung bisa dihidrolisis dening protease lambung kanggo ngasilake (Fab ') 2 fragmen, sing banjur dicerna dening papain kanggo ngasilake fragmen Fab individu. Fragmen Fv kasusun saka VH lan VL, sing nduweni stabilitas sing kurang amarga ora ana ikatan disulfida. Mula, VH lan VL disambung bebarengan liwat peptida cendhak 15-20 asam amino kanggo mbentuk antibodi fragmen variabel rantai tunggal (scFv) kanthi bobot molekul kira-kira 25KDa.

Panliten babagan struktur antibodi ing Camelidae (Camel, LIama, lan Alpaca) wis njlentrehake manawa antibodi mung duwe rantai abot lan ora ana rantai entheng, mula diarani antibodi rantai abot (hcAb). Domain variabel antibodi rantai abot diarani antibodi domain tunggal utawa nanobodies utawa VHH, kanthi ukuran 12-15 kDa. Minangka monomer, padha ora duwe ikatan disulfida lan stabil banget, kanthi afinitas dhuwur banget kanggo antigen.

Gambar 5: Antibodi Rantai Berat lan VHH/ Nanobody

Ekspresi bebas sel nggunakake ekspresi DNA alami utawa sintetik kanggo entuk sintesis protein in vitro, biasane nggunakake sistem ekspresi E. coli. Ngasilake protein kanthi cepet lan ngindhari beban metabolik lan sitotoksik ing sel nalika ngasilake protein rekombinan sing akeh ing vivo. Uga bisa ngasilake protein sing angel disintesis, kayata sing angel diowahi sawise terjemahan utawa sintesis protein membran.