Layanan Penyaringan Pustaka Tampilan Permukaan Ragi

Alpha Lifetech spesialisasi ing konstruksi perpustakaan tampilan ragi lan penyaringan perpustakaan antibodi, nawakake kemampuan kanggo ngasilake macem-macem bentuk perpustakaan ragi lan nyaring antibodi afinitas dhuwur lan spesifik kanggo klien ing saindenging jagad. Kanthi tim peneliti ahli, teknologi lan peralatan canggih, kita bisa mbangun perpustakaan ragi sing nargetake macem-macem protein sing ana gandhengane karo penyakit. Kita bisa nyedhiyakake teknologi tampilan fag lan tampilan ragi, kalebu tampilan ragi protein, tampilan ragi molekul cilik, tampilan ragi antibodi, lan liya-liyane.

Pustaka tampilan ragi kita duwé kapasitas gedhé lan keragaman sing dhuwur, sing nyedhiyakaké pondasi sing dhuwur kanggo skrining efektif saka urutan antibodi tartamtu. Kita bisa mbangun macem-macem wujud pustaka tampilan ragi antibodi (IgG, scFv, VHH, pustaka antibodi Fab), pustaka protein, pustaka peptida, pustaka cDNA, lan liya-liyané miturut kabutuhan sampeyan. Kajaba iku, kita uga bisa ngembangaké pustaka antibodi kanthi macem-macem sifat, kalebu pustaka imun, pustaka alami, pustaka sintetik, pustaka semi-sintetik, lan pustaka antibodi penyakit.

Pambuka Sistem Tampilan Ragi

Teknologi tampilan permukaan ragi minangka metode kanggo nampilake protein rekombinan ing permukaan ragi liwat fusi gen. Sistem tampilan ragi sing paling umum nggunakake protein target sing digabungake karo C-terminus saka subunit Aga2p saka protein kawin alfa lektin, utamane kasusun saka tag epitop ing loro-lorone protein target: tag N-terminal 9-asam amino hemagglutinin (HA) lan tag C-terminus 10 asam amino c-myc. Subunit 69 asam amino Aga2p kaiket karo subunit 725 alfa lektin asam amino Aga1p liwat rong ikatan disulfida, lan Aga1p diikat menyang dinding sel liwat ikatan kovalen β 1,6-glukan. Mulane, protein target ditampilake ing permukaan sel ragi lan banjur dikenali dening ligan sing cocog. Pisah protein fungsional saka perpustakaan liwat skrining sitometri aliran.

Gambar 1: Prinsip tampilan permukaan ragi. (Sumber gambar: Aplikasi Tampilan Permukaan Ragi kanggo Rekayasa Protein.)

Pambuka kanggo Pustaka Tampilan Permukaan Ragi

Pemilahan tampilan ragi adhedhasar tampilan permukaan ragi, utamane digunakake kanggo nyaring perpustakaan antibodi sing nargetake protein permukaan sel. Amarga ikatan non-spesifik sing kurang antarane sel ragi lan permukaan sel liyane, seleksi biologis ragi bisa nyaring perpustakaan ikatan gedhe kanggo nemokake klon langka.

Layanan Penyaringan Pustaka Tampilan Permukaan Ragi

Siapke plasmid lan kultur sel ragi, sintesis DNA sing ngode protein target lan klon menyang vektor ekspresi ragi sing ngemot promotor sing bisa diinduksi, peptida sinyal, lan gen target sing digabungake karo protein tampilan permukaan (kayata Aga2p). Gen sing ngode protein target bisa digabungake karo gen sing ngode protein dinding sel ragi (biasane Aga2p), lan gen sing digabungake bisa diowahi dadi sel ragi liwat elektroporasi. Sawise transformasi, sel ragi sing ngekspresikan gen antibodi ing permukaane bisa ngalami tes skrining spesifik antigen: perpustakaan ragi diinkubasi karo antigen target lan sel ragi sing khusus kaiket dipilih. Nggunakake pemilahan sel sing diaktifake fluoresensi (FACS) kanggo ngisolasi sel ragi sing nampilake protein kanthi karakteristik sing dikarepake, skrining perpustakaan tampilan ragi bisa ditindakake kanthi ukuran perpustakaan maksimal ~ 10 ^ 8-10 ^ 9 sel ragi. Klon positif banjur bisa diisolasi kanggo analisis luwih lanjut utawa aplikasi hilir. Sawise klon antibodi tartamtu diidentifikasi saka perpustakaan antibodi, bisa dikarakterisasi luwih lanjut lan diprodhuksi massal, lan dimurnèkaké nggunakake teknik kayata kromatografi afinitas protein A/G kanggo ngrampungake kabeh proses skrining tampilan ragi lan produksi antibodi.

Proses Pamriksaan Pustaka Tampilan Ragi

Gambar 2 Proses penyaringan perpustakaan tampilan ragi

Alur Kerja Layanan Penyaringan Pustaka Tampilan Ragi

Langkah-langkah	Konten Layanan	Garis wektu
Persiapan Antigen	Jinis antigen: Yen pelanggan bisa nyedhiyakake antigen, sampel sing cocog kudu dikirim miturut jinise: protein rekombinan mbutuhake 3-3,5mg kanthi syarat kemurnian luwih saka 85%, molekul cilik kudu dikonjugasi kanthi syarat kemurnian luwih saka 90%, sintesis peptida kudu dikonjugasi kanthi syarat kemurnian luwih saka 90%, jinis sampel kayata virus kudu diinaktivasi, RNA kudu dipriksa kanggo nyegah degradasi, lan jinis antigen ing ndhuwur uga bisa disesuaikan kanggo sintesis.	2-3 minggu
Kekebalan Kewan	Cacahing imunisasi kéwan yaiku 5, lan perlu ditemtokake apa perlu nambah cacahing imunisasi adhedhasar uji titer serum. Kekebalan antigen: potensi antigen protein/virus>105; potensi antigen peptida/molekul cilik>10^4	5-6 minggu
Persiapan cDNA Cithakan	Pisah PBMC plasma, ekstrak RNA total (kit ekstraksi RNA) lan balikke dadi cDNA.	1 dina
Konstruksi Perpustakaan	Nggunakake cDNA perpustakaan minangka cithakan, gen VHH diamplifikasi kanthi rong puteran PCR, lan vektor tampilan ragi splicing gen VHH digawe. Vektor kasebut diowahi dadi sel ragi kanthi elektroporasi kanggo nggawe perpustakaan antibodi. Pilih 48 klon kanthi acak lan identifikasi tingkat positif (>90%) nggunakake metode PCR; Hitung kapasitas perpustakaan (10^7-10^8), sekuensing NGS kanggo nemtokake tingkat penyisipan perpustakaan sing bener (>90%) lan keragaman perpustakaan.	2 minggu
Pamriksaan Perpustakaan	Telung babak skrining standar: Skrining FACS protein berlabel fluoresensi, diterusake karo sekuensing NGS ing babak katelu. Klon positif dipilih kanggo ekspresi induksi gram tunggal lan deteksi ELISA. Kabeh klon positif dipilih kanggo sekuensing gen, lan urutan wilayah CDR sing beda dipilih.	2-3 minggu
Verifikasi Antibodi	Nggawe vektor ekspresi sing cocog kanggo urutan antibodi bisa nggampangake ekspresi antibodi, pemurnian antibodi, validasi ELISA lan BLI saka pengikatan antigen antibodi kanggo verifikasi afinitas antibodi, lan blokade aliran sitometri kanggo validasi fungsi sel.	1 minggu

Kasus Pamriksaan Pustaka Tampilan Permukaan Ragi

Ing literatur platform tampilan permukaan ragi kanggo panemuan nanobodi selektif konformasional kanthi cepet, para penulis nggawe platform panemuan nanobodi in vitro lengkap adhedhasar tampilan permukaan ragi. Kapisan, perpustakaan nanobodi sintetik dirancang wiwit saka gen unta. Gambar D nuduhake yen nanobodi duwe tag HA ing ujung karboksil, banjur nanobodi kasebut difiksasi kanthi kovalen ing dinding sel ragi. Gambar E nuduhake proses skrining nanobodi. Ragi kanthi nanobodi afinitas antigen diisolasi, diamplifikasi, lan dipilih bola-bali kanggo antibodi dening FACS. Para penulis nemokake nanobodi selektif konformasional sing nargetake rong GPCR manungsa sing beda liwat platform iki.