აფინურობის გაზომვის პლატფორმა
Octet-ისა და Biacore-T2000 პლატფორმის საფუძველზე, Alpha Lifetech-ს შეუძლია უზრუნველყოს აფინურობის განსაზღვრის საიმედო სერვისები.
დაგვიკავშირდით01
აფინურობის გაზომვის პლატფორმა
Octet-სა და Biacore-T2000 პლატფორმაზე დაფუძნებულ Alpha Lifetech-ს შეუძლია უზრუნველყოს აფინურობის განსაზღვრის საიმედო სერვისები. ჩვენ შეგვიძლია უზრუნველვყოთ აფინურობის განსაზღვრა მრავალი ნიმუშისთვის, როგორიცაა ანტისხეულები, უჯრედები, ცილები, მცირე მოლეკულები და ა.შ. არსებობს აფინურობის განსაზღვრის სხვადასხვა მეთოდი, მათ შორის ზედაპირული პლაზმონური რეზონანსის (SPR) და ბიოშრის ინტერფერენციის (BLI) აფინურობის განსაზღვრა.
Alpha Lifetech-ს გააჩნია პროფესიონალური და ზუსტი აფინურობის განსაზღვრის პლატფორმა, რომელიც აერთიანებს ELISA-ს აფინურობის განსაზღვრასთან, რაც მსოფლიოს მასშტაბით მომხმარებლებს აფინურობის განსაზღვრის პროფესიონალურ, ეფექტურ, სწრაფ და ზუსტ შედეგებს სთავაზობს. ჩვენ შეგვიძლია მომხმარებლებს შევთავაზოთ ორი მეთოდი: აფინურობის სწრაფი განსაზღვრა და აფინურობის ზუსტი განსაზღვრა. სწრაფი აფინურობის განსაზღვრა არის ერთჯერადი კონცენტრაციის განსაზღვრა, ხოლო ზუსტი აფინურობის განსაზღვრით შესაძლებელია სხვადასხვა კონცენტრაციის აფინურობის გაზომვა. გამოიყენება სხვადასხვა მცირე მოლეკულური ნაერთების, პეპტიდების, ცილების, ოლიგონუკლეოტიდების და ოლიგომერების, ასევე ლიპიდების, ბაქტერიოფაგების, ვირუსებისა და უჯრედების ურთიერთქმედების შესასწავლად. აფინურობის გაზომვის პლატფორმას შეუძლია საფუძველი ჩაუყაროს აფინურობის წამლების ტესტირებასა და სკრინინგს, ანტისხეულების აღმოჩენას და ხელი შეუწყოს შემდგომ კვლევას.
შესავალი შეკავშირების აფინურობაში
აფინურობა მნიშვნელოვანია მოლეკულათშორისი ურთიერთქმედებების, აფინური წამლის ანალიზებისა და წამლის სკრინინგის შეფასებისას. მოლეკულათშორისი ურთიერთქმედებების აღწერა შესაძლებელია შემდეგი განტოლებებით: L + R = LR, სადაც L წარმოადგენს თავისუფალ ლიგანდებს, R წარმოადგენს შეუკავშირებელ რეცეპტორებს, ხოლო LR წარმოადგენს შეკავშირებულ ლიგანდ-რეცეპტორულ კომპლექსებს. შეკავშირების რეაქციები განსაზღვრავს მოლეკულათშორის ურთიერთქმედებებს, სადაც რეაქციის დროს ხდება დინამიური გაცვლა შეკავშირებულ და შეუკავშირებელ მდგომარეობებს შორის წონასწორობის მიღწევამდე. ეს შეიძლება აღიწეროს რეაქციის ორი სიჩქარის მუდმივით, Kon (შეკავშირების სიჩქარის მუდმივა) და Koff (დისოციაციის სიჩქარის მუდმივა). Kd მნიშვნელობა, რომელიც შეკავშირების მუდმივას (Ka) შებრუნებულია, არის Koff/Kon, რეაქციის აფინურობის მნიშვნელოვანი მუდმივა. ამიტომ, რაც უფრო მჭიდროა შეკავშირება ორ მოლეკულას შორის, მით უფრო მაღალია აფინურობა. რაც უფრო მცირეა Kd მნიშვნელობა, მით პირიქით. ეს განტოლება შეიძლება წარმოდგენილი იყოს S-ფორმის მრუდის სახით ნახევრად ლოგარითმულ გრაფიკზე, ლიგანდის კონცენტრაციით x ღერძზე (ლოგარითმული მასშტაბის ღერძზე) და წილადური საზღვრით y ღერძზე. წყვეტილი ხაზი წარმოადგენს ლიგანდის კონცენტრაციას Kd (1 ნმ)-ზე 0.5 შეკავშირების ფრაქციისთვის.
სურ. 1: უჯრედის ზედაპირის რეცეპტორთან დაკავშირებული ლიგანდის სხვადასხვა კონცენტრაციის სიგმოიდური შეკავშირების მრუდი. (საცნობარო წყარო: ჰანტერი ს.ა., კოქრანი უმცროსი. უჯრედთან შეკავშირების ანალიზები ცილა-ცილის ურთიერთქმედების აფინურობის დასადგენად: ტექნოლოგიები და გასათვალისწინებელი საკითხები.)
აფინურობის დადგენის მეთოდები
ELISA შეკავშირების აფინურობის ანალიზი
ანტისხეულების აფინურობის შესწავლის ფართოდ გავრცელებული ტექნიკა ეფუძნება ELISA მეთოდს, რომელიც ხასიათდება მოხერხებულობით, სისწრაფით, სიმარტივით, მაღალი მგრძნობელობითა და ძლიერი სპეციფიკურობით. მას შეუძლია გამოიყენოს მცირე რაოდენობით რეაგენტები (ანუ ანტისხეულები და ანტიგენები) და გაზომოს ანტისხეულების აფინურობა გამწმენდი რეაგენტების საჭიროების გარეშე. ანტიგენის მყარ ზედაპირზე იმობილიზაციისა და პირველადი ანტისხეულის გამოყენებით მისი აღმოჩენის გზით, მონიშნული მეორადი ანტისხეული რეაგირებს პირველად ანტისხეულთან, რათა წაიკითხოს და გააანალიზოს მონაცემები ფერმენტთან დაკავშირებული იმუნოსორბენტული ანალიზის (ELISA) წამკითხველში.
სურ. 2: ELISA-ს მსგავსი ანალიზები შექმნილი პეპტიდების მათ სამიზნეებთან შეკავშირების შესაფასებლად. (წყარო: ჰაჯიკარიმლოუ, მარიამი და სხვ., 2022. გამოთვლითი მიდგომა SARS-CoV-2 ზედაპირული ცილა S-ის აღმომჩენი პეპტიდების სწრაფად შესაქმნელად.)
ზედაპირული პლაზმონური რეზონანსის (SPR) შეკავშირების აფინურობის ანალიზი
SPR ტექნოლოგია ძირითადად რეფრაქციული ინდექსის ცვლილებებს აფიქსირებს. ტრადიციული ოპტიკური ფენომენებისა და სინათლის რეზონანსული ფენომენის დახმარებით, შესაძლებელია ბიომოლეკულებს შორის ურთიერთქმედების ბიოსენსორული ანალიზის ტექნოლოგიის შექმნა, რათა დადგინდეს ლიგანდებსა და ანალიზებს შორის ურთიერთქმედება ბიოსენსორულ ჩიპებზე. ბიომოლეკულებს შორის შეკავშირებისა და ურთიერთქმედების სპეციფიკური სიგნალების მიღება შესაძლებელია ბიოლოგიური რეაქციების დროს SPR კუთხეების დინამიური ცვლილებების მონიტორინგით.
სურ. 3: H10/AGR2 შეკავშირების ზედაპირული პლაზმონური რეზონანსის (SPR) ანალიზი. (საცნობარო წყარო: გარი, კაროლინა და სხვ., 2018. ახალი პეპტიდის იდენტიფიკაცია, დახასიათება და გამოყენება წინა გრადიენტის ჰომოლოგ 2-ის (AGR2) წინააღმდეგ.)
ბიოშრის ინტერფერენციის (BLI) შეკავშირების აფინურობის ანალიზი
ბიოფირის ინტერფერენციის ტექნოლოგია არის ეტიკეტის გარეშე, რეალურ დროში მონიტორინგის ოპტიკური დეტექციის ტექნიკა, რომელიც ძირითადად გამოიყენება მოლეკულათშორისი ურთიერთქმედებების ყოვლისმომცველი რაოდენობრივი ანალიზისა და ცილის კონცენტრაციის განსაზღვრისთვის. ეს ტექნოლოგია იყენებს ზონდზე დაფუძნებულ ბიოსენსორს ნიმუშზე ბიოფირის სისქის ცვლილებების პირდაპირ აღმოსაჩენად. ინტერფერენციის სპექტრის გადაადგილების ცვლილებების აღმოჩენით, დგინდება შეკავშირება და დისოციაცია სენსორის ზედაპირზე ურთიერთქმედების მქონე ბიომოლეკულებს შორის და ნაჩვენებია ინტერფერენციის სპექტრის რეალურ დროში გადაადგილება (ნმ).
სურ. 4: ბიოშრის ინტერფერომეტრიის (BLI) ანალიზი aLDRG-სა და ქიტინოლიგოსაქარიდებს შორის. (საცნობარო წყარო: ლი, ბინგ, 2023. სოკოვანი სიმბიოზის მონაწილე Armillaria sp. 541-ის რიზომორფებსა და ჰიფებს შორის შედარებითი ტრანსკრიპტომის დამახასიათებელი ნიშნები LysM დომენებზე აქცენტით.)
BLI და SPR ტექნოლოგიის შედარება
| ტექნოლოგიის დასახელება | BLI (ბიოშრის ინტერფერომეტრია) | SPR (ზედაპირული პლაზმონური რეზონანსი) |
|---|---|---|
| პრინციპი | სენსორის ზედაპირზე არეკლილი სინათლის ინტერფერენციული სურათის ცვლილებებს ზომავს და ბიოშრის ოპტიკური სისქის ცვლილებების მეშვეობით მოლეკულურ ურთიერთქმედებებს აფიქსირებს. ის რეალურ დროში შეკავშირების მრუდს იძლევა (პირდაპირი გაზომვა). | სენსორის ჩიპის ზედაპირთან ახლოს გარდატეხის ინდექსის სიგნალის ცვლილებების აღმოჩენით ზომავს მოლეკულურ ურთიერთქმედებებს (ხდება, როდესაც სინათლე ურთიერთქმედებს ოქროსა და მინის ინტერფეისთან, რაც იწვევს გარდატეხის ინდექსის ცვლილებებს). მონაცემები აისახება რეზონანსული კუთხის ცვლილებების სახით (არაპირდაპირი გაზომვა). |
| მწარმოებელი | სარტორიუსი | GE |
| ინსტრუმენტი | ForteBio ბიოსენსორები | ღია SPR ინსტრუმენტი |
| სისტემა | ForteBio Octet სისტემა (მოლეკულური ურთიერთქმედების ანალიზისთვის) | TraceDrawer (შემუშავებულია Ridgeview Instruments-ის მიერ, შვედეთი) |
| უპირატესობები | 1. ნიმუშების ფართო თავსებადობა, შესანიშნავი სტაბილურობა, განსაკუთრებით მცირე მოლეკულების აღმოსაჩენად (ნიმუშის სისუფთავისა და ბუფერული პირობების სპეციფიკური მოთხოვნები ნაკლებად მკაცრია). SSA ჩიპები შეკავშირების კვლევებისთვის ეკონომიურია. 2. SPR-თან შედარებით უფრო სწრაფი გამტარუნარიანობა და ექსპერიმენტის უფრო მოკლე დრო. | 1. უფრო ხანგრძლივი განვითარების ისტორია, რაც BLI-სთან შედარებით უფრო მაღალ მგრძნობელობას გვთავაზობს. 2. უფრო მეტი სიზუსტე და სიმტკიცე კონკრეტული აპლიკაციებისთვის, როგორიცაა იშვიათი ან ღირებული ცილების აღმოჩენა უფრო მაღალი აფინურობისა და სპეციფიკურობის მონაცემებით. |
| ნაკლოვანებები | 1. მონაცემთა სიზუსტე ოდნავ დაბალია SPR-თან შედარებით. 2. მოითხოვს ინსტრუმენტის ფრთხილად მოვლას. 3. SSA ჩიპის ღირებულება შედარებით მაღალია. | 1. ძალიან მცირე მოლეკულების აღმოსაჩენად ბუფერული პირობები შეიძლება საკმაოდ რთული იყოს, რაც ზრდის აღმოჩენის წარუმატებლობის რისკს. 2. ჩიპები, როგორც წესი, უფრო ძვირია, ვიდრე BLI-ში გამოყენებული. 3. ხანგრძლივი ექსპერიმენტების დროს ნიმუშის აორთქლება შეიძლება პრობლემას წარმოადგენდეს. |
| ჩიპის ტიპი | SSA ჩიპი | NTA ჩიპი |
აფინურობის გაზომვის ფარგლები
აფინურობის განსაზღვრა შეიძლება მოიცავდეს ანტიგენ-ანტისხეულს (ძლიერი ანტიგენ-ანტისხეული, სუსტი ანტიგენ-ანტისხეული), ცილა-ცილას, ცილა-პეპტიდს, ცილა-მცირე მოლეკულას და ცილა დნმ/რნმ-ს (აპტამერი). KD-ს გაზომვისას აუცილებელია ერთ-ერთი მოლური კონცენტრაციის ცოდნა. როდესაც მცირე მოლეკულები უკავშირდება, ერთი მოლეკულური წონა არ შეიძლება იყოს 150 დალტონზე ნაკლები.
| ტიპი | მასშტაბი | Სიფრთხილის ზომები |
|---|---|---|
| 1. ანტიგენი-ანტისხეული | 10^-6-დან 10^-12-მდე | ანტისხეულების უმეტესობის Kd მნიშვნელობები 10^-6-10^-7-დან 10^-9-მდე დიაპაზონშია. ზოგადად ითვლება, რომ მაღალი აფინურობის ანტისხეულები 10^-9-ის ფარგლებშია, ხოლო მაღალი აფინურობის ანტისხეულები 10^-12-ის ფარგლებშია. |
| 2. ცილა - მცირე მოლეკულები | 10^-4-დან 10^-5-მდე | მცირე მოლეკულებისა და ცილების KD 10^-4-დან 10^-5-მდე მერყეობს, მაშინ როცა 10^-3 და 10^-7 ნორმალურია და 10^-10-ს ვერ აღწევს. კოვალენტური მცირე მოლეკულების ზომამ შეიძლება 10^-10-ს მიაღწიოს. |
| 3. ავიდინ-ბიოტინი | 10^-14 | აფინურობას ადვილად შეუძლია არასპეციფიკური შეკავშირების გავლა და შეიძლება გამოყენებულ იქნას სტრეპტავიდინის ან დეგლიკოზილირებული აფინურობის მეთოდი. |
| 4. დნმ-ცილა | 10^-8-დან 10^-10-მდე | მაღალი ხარისხის და სრული დნმ; ფრთხილად იყავით ელექტროფორეზის ზემოქმედების თავიდან ასაცილებლად. |
აფინურობის განსაზღვრის ნიმუშის მოთხოვნები
| ნიმუში | მოთხოვნები |
|---|---|
| 1. დიდი მოლეკულის ნიმუში | ცილა > 50 მკგ, ანტისხეული > 100 მკგ, ბიოტინილირებული ცილა > 200 მკგ; ბიოტინის გარეშე ცილა > 2 მგ, სისუფთავის მოთხოვნა > 90%, ბუფერული ხსნარი: PBS, HEPBS. არ შეიძლება შეიცავდეს იმიდაზოლის ჯგუფებს; საჭიროა ხარისხის კონტროლი. |
| 2. მცირე მოლეკულის ნიმუში | 1 მგ-ზე მეტი რაოდენობის ფხვნილის ან სითხის შემთხვევაში, სითხე უნდა იყოს ხსნადი წყალში ან დიმეთილქლორიდში. ეცადეთ, არ შეიცავდეს გლიცეროლს, იმიდაზოლს, ტრეჰალოზას ან სხვა მარილებს; ეცადეთ, ბუფერში არ გამოიყენოთ ამინოჯგუფების შემცველი რეაგენტები, როგორიცაა Tris, ზოგადად PBS, HEPPS და ა.შ., ორგანული რეაგენტების გარეშე. |
მრავალი ნიმუშის ანალიზი
Alpha Lifetech-ს შეუძლია უზრუნველყოს აფინურობის ანალიზები სხვადასხვა ნიმუშისთვის, მათ შორის ანტისხეულებისთვის, უჯრედებისთვის, ცილებისთვის და სხვა ბიომოლეკულებისთვის.
მოწიფული ტექნოლოგიური პლატფორმა
ჩვენ გვაქვს ისეთი მოწინავე ტექნოლოგიები, როგორიცაა spr-ის შეკავშირების ანალიზი, bli-ის შეკავშირების ანალიზი და elisa-ს შეკავშირების ანალიზი.
მოქნილი პროექტის შერჩევა
მომხმარებლებს შეუძლიათ აირჩიონ სწრაფი აფინურობის განსაზღვრასა და ზუსტი აფინურობის განსაზღვრას შორის.
მაღალი სიზუსტის შედეგები
ჩვენი პროფესიონალი ტექნიკური გუნდი უზრუნველყოფს აფინურობის განსაზღვრის ეფექტურ, ზუსტ და სანდო შედეგებს.
შემთხვევის შესწავლასაქმე
BLI სწრაფი აფინურობის ანალიზი ანტისხეულების და აპტამერის აფინურობის ანალიზი
ბიოტინილირებული აპტამერების დაჭერა SA ზონდის სპეციფიკურობით და მათი გახსნა. ნიმუშის გახსნა და განზავება ფიქსირებულ კონცენტრაციამდე, ზონდ-სპეციფიკური დაჭერილი სამიზნე 1-5 აპტამერების გამყარება და სიგნალის გაჯერების შემდეგ ნიმუშთან შეკავშირება. შემდეგ ისინი დაამატეთ 96-ჭეჭიან ფირფიტაზე.
სურ. 5: 96-ჭეჭიანი ფირფიტის ნიმუშების დეტექციის პოზიციების განაწილება. B ეხება ბუფერს, რომელიც გამოიყენება სენსორების დაბალანსებისა და დისოციაციისთვის. L: ბიოტინის სამიზნე 1-5 აპტამერები, 221: ნიმუში.
ყურადღება მიაქციეთ ბურღვას მონაცემების სტაბილურობისა და სიზუსტის უზრუნველსაყოფად და დააყენეთ შესაბამისი პროგრამა შედეგების მისაღებად:
სურ. 6: ურთიერთქმედების დიაგრამა Target 1, 2 და 3 აპტამერებსა და ნიმუშებს შორის. (CH 1 \ 3 \ 5 წარმოადგენს გამყარებულ Target 1 \ 2 \ 3 აპტამერების ზონდსა და ნიმუშს შორის ურთიერთქმედების სიგნალს და მონაცემებს.)
სურ. 7: ურთიერთქმედების დიაგრამა Target 4 და 5 აპტამერებსა და ნიმუშებს შორის. (CH 1 \ 3 წარმოადგენს გამყარებულ Target 4 \ 5 აპტამერულ ზონდსა და ნიმუშს შორის ურთიერთქმედების სიგნალს და მონაცემებს.)
შედეგები აჩვენებს
მიღებული იქნა შემდეგი შედეგები: მორგების შემდეგ Target 1 ადაპტერის ნიმუშთან აფინურობა იყო 9.41 ^ -8; მორგების შემდეგ Target 2 ადაპტერის ნიმუშთან აფინურობა იყო 8.32 ^ -8; მორგების შემდეგ Target 3 ადაპტერის ნიმუშთან აფინურობაა 8.64 ^ -8; მორგების შემდეგ Target 4 ადაპტერის ნიმუშთან აფინურობაა 3.70 ^ -8; მორგების შემდეგ Target 5 ადაპტერის ნიმუშთან აფინურობაა 3.01 ^ -8.
თუ თქვენ გაქვთ რაიმე შეკითხვები, გთხოვთ, დაგვიკავშირდეთ ნებისმიერ დროს.
Leave Your Message
2018-07-16 
0102