ცხოველთა იმუნიზაციის პლატფორმა
Alpha Lifetech-ის ცხოველური წყაროები ნათელია, შემოწმებისა და კარანტინის ნებართვებით, მკაფიო გენეტიკური წარმომავლობით, მკაფიო იმუნიზაციის სიხშირით და იმუნიზაციის ინტერვალების დეტალური ჩანაწერებით, რაც უზრუნველყოფს ანტისხეულების წარმოებისთვის მოსახერხებელ მომსახურებას. ის ძირითადად ახდენს აქლემების ჯიშის ცხოველების (ალპაკა ლიამა და აქლემების) იმუნიზაციას, რაც საფუძველს უყრის ნანოსხეულების წარმოებას. გარდა ამისა, მას ასევე შეუძლია ჩვეულებრივი ცხოველების (მაგალითად, ახალი ზელანდიის თეთრი კურდღლების, თაგვების და სხვა ცხოველების) იმუნიზაცია მომხმარებლების მიერ საჭირო იმუნიზაციის სიხშირისა და იმუნოგენურობის მოთხოვნების შესაბამისად, მათი ექსტრაქცია და იზოლირება PBMC-ებად და მათი გამოყენება შემდგომი ექსპერიმენტებისთვის (მაგალითად, მონოკლონური ანტისხეულები, პოლიკლონური ანტისხეულების შემუშავება და ა.შ.). მომხმარებლებს შეუძლიათ მოგვაწოდონ საკუთარი იმუნოგენები და ჩვენ მათზე მკაცრ ხარისხის კონტროლს ჩავატარებთ. თუ მომხმარებლები მოგვაწვდიან ვირუსულ იმუნოგენებს, ისინი უნდა იყოს ინაქტივირებული და ჩვენ ჩავატარებთ ინაქტივაციის ტესტირებას უსაფრთხოების უზრუნველსაყოფად. ამავდროულად, ჩვენ ასევე შეგვიძლია შესაბამისი იმუნოგენების მორგება მომხმარებლის საჭიროებების შესაბამისად.
შესავალი ცხოველთა იმუნიზაციაში
ცხოველური წარმოშობის ანტისხეულების, როგორიცაა მონოკლონური ანტისხეულები, პოლიკლონური ანტისხეულები და ნანოსხეულები, წარმოებისას პირველი ნაბიჯი არის ცხოველების იმუნიზაცია და შესაბამისი B უჯრედების, ანტისხეულების ან PBMC-ების მიღება ანტისხეულების შემდგომი წარმოებისთვის მოსამზადებლად, საბაზისო სამეცნიერო კვლევის ხელშესაწყობად, კლინიკური დიაგნოსტიკური ინსტრუმენტების შემუშავებისა და ახალი პრეპარატების აღმოჩენისა და განვითარების ხელშეწყობის მიზნით. აქლემებს, ალპაკებს, ლიამას და სხვა აქლემებს, რომლებიც აქლემებს კამელიდების ჯგუფს მიეკუთვნებიან, შეუძლიათ ნანოსხეულების (ერთდომენიანი ანტისხეულების) ბიბლიოთეკების წარმოება იმუნური სისხლის შეგროვებისა და PBMC-ების ექსტრაქციის გზით. კურდღლებისა და სხვა ცხოველების იმუნიზაცია და მათი სხეულიდან ანტისხეულების ამოღება შესაძლებელია. გაწმენდის შემდეგ, მათი გამოყენება შესაძლებელია პოლიკლონური ანტისხეულების წარმოებისთვის. თაგვების, ვირთხების და ა.შ. გამოყენება შესაძლებელია მონოკლონური ანტისხეულების წარმოებისთვის იმუნური ექსტრაქციის მქონე B უჯრედების მიელომის უჯრედებთან შერწყმით. იმუნიზაციამდე ყურადღება უნდა მიექცეს 3R პრინციპებს (ჩანაცვლება, შემცირება, დახვეწა), რამაც შეიძლება მნიშვნელოვნად შეამციროს გამოყენებული ცხოველების რაოდენობა საჭირო მინიმუმამდე, გააუმჯობესოს ექსპერიმენტული პროცედურები და მინიმუმამდე დაიყვანოს ცხოველების ტანჯვა. ასევე უნდა დაიცვათ ექსპერიმენტის სწორი დიზაინი, შესაბამისი ანტისხეულების შერჩევა და მკაცრი ვალიდაციის პროცედურები.
იმუნოგენების კლასიფიკაცია - ნანოსხეულების წარმოება
| იმუნოგენების ტიპები | მაგალითი | იმუნოგენის მომზადება | შენიშვნები |
|---|---|---|---|
| ცილოვანი იმუნოგენები | ფერმენტები, ცილები, ბაქტერიული ტოქსინები და სხვა ნივთიერებები | აირჩიეთ ცილის ექსპრესიის სხვადასხვა სისტემა: E. coli, საფუარი, მწერების უჯრედები, ძუძუმწოვრების უჯრედები და უჯრედგარე სისტემა | ყურადღება მიაქციეთ ისეთ ფაქტორებს, როგორიცაა ტემპერატურა, დრო, pH და ინკლუზიური სხეულები, რომლებიც გავლენას ახდენენ ცილის ექსპრესიაზე. |
| ნუკლეინის მჟავის იმუნოგენები | დნმ, რნმ | დნმ იმუნოგენი: პლაზმური დნმ-ის კონსტრუირება, სამიზნე გენების შესაბამისი ექსპრესიის ვექტორების კლონირება, უჯრედების კულტივირება პლაზმური დნმ-ის ამპლიფიკაციისთვის და მაღალი სისუფთავის პლაზმური დნმ-ის ექსტრაქცია. რნმ იმუნოგენი: დეგრადაციის თავიდან ასაცილებლად საჭიროა ქუდის სტრუქტურისა და პოლიA კუდის დამატება | დნმ-ის იმუნოგენების მომზადებისას ყურადღება უნდა მიექცეს შესაბამის მასპინძელ უჯრედებს, ხოლო რნმ-ის იმუნოგენების მომზადებისას ყურადღება უნდა მიექცეს რნმ-ის დეგრადაციის პრევენციას. |
| ვირუსული იმუნოგენები | მთელი ვირუსის ინაქტივირებული ვაქცინა, ქვეერთეულის ვაქცინა, ვირუსული ვექტორის ვაქცინა (ადენოვირუსი, ლენტივირუსი და ა.შ.), mRAN ვაქცინა. | მთელი ვირუსით ინაქტივირებული ვაქცინის მომზადებისას, უსაფრთხოების გაზრდის მიზნით, თავდაპირველად ვირუსი ინაქტივირდება. ტოქსიკურობის ტესტირება გამოიყენება იმის დასადგენად, დასრულებულია თუ არა ინაქტივაცია. ქვეერთეულის ვაქცინებს ანტიგენებად მხოლოდ ვირუსის ზედაპირული ცილები სჭირდებათ და იმუნური ეფექტურობის გათვალისწინება სჭირდებათ. | იმუნური ეფექტების უზრუნველსაყოფად საჭიროა ადიუვანტური ნივთიერებების დამატება, ყურადღება უნდა მიექცეს ინაქტივირებულ ვირუსს, იმუნური ეფექტების უზრუნველსაყოფად საჭიროა შესაბამისი ვირუსის ტიტრები და მკაცრად უნდა გაკონტროლდეს მომზადების პროცესის უსაფრთხოება. |
ცხოველთა იმუნიზაციის პროცესი ან ვადები
ცხოველთა შერჩევა და ანტიგენის მომზადება
ცხოველების შერჩევა: ჯანსაღი ჯგუფებიდან შეარჩიეთ შესაბამისი ასაკისა და ჯანმრთელი აღნაგობის ალპაკები და ჩაატარეთ სისხლის ანალიზი და დაავადებათა სკრინინგი, რათა დარწმუნდეთ, რომ არ არსებობს ინფექციური დაავადებები ან სხვა ჯანმრთელობის პრობლემები.
იმუნოგენის მომზადება: იმუნოგენები იმუნური პასუხების გამოწვევის გასაღებია და სამიზნე ანტისხეულის მოთხოვნების საფუძველზე საჭიროებენ შესაბამისი ცილების, პეპტიდების ან სხვა შესაფერისი ნივთიერებების შერჩევას.
ალპაკას იმუნიზაცია შესაძლებელია ერთდროულად 1-3 ანტიგენით, ანტიგენის საერთო რაოდენობით 1-2 მგ ერთ იმუნიზაციაზე და მოცულობით 2 მლ-ზე ნაკლები. იმუნიზაციამდე, ანტიგენი და ადიუვანტი ემულსიფიცირდება 1:1 თანაფარდობით ერთგვაროვანი ნარევის მისაღებად, რომელიც ინახება 4 ℃ ტემპერატურაზე.
იმუნოლოგიური ალპაკა
ჩაიწერეთ ალპაკას ყურის ცარიელი ნომერი და დაიწყეთ იმუნიზაციის ექსპერიმენტი. ინექცია ჩაატარეთ ალპაკას ყელთან ახლოს მდებარე ლიმფურ კვანძებში ორივე მხარეს, თითოეულ მხარეს 2 წერტილით და თითოეულ წერტილში დაახლოებით 0.4 მლ ემულსირებული ანტიგენი შეჰყავთ. იმუნიზაციის შემდეგ, ნახევარი საათის განმავლობაში დააკვირდით, რათა დარწმუნდეთ, რომ ალპაკას არ აქვს დისკომფორტის სიმპტომები. იმუნიზაცია უნდა ჩატარდეს ყოველ 2 კვირაში, მინიმუმ 4 იმუნიზაციით.
სისხლის შეგროვება
5-7 დღის განმავლობაში 4 იმუნიზაციის შემდეგ, ალპაკას კისრის ვენიდან აიღეთ 50 მლ სისხლი.
შრატის გამოყოფა
სისხლის ნიმუშები იმუნური შეფასებისთვის ანტიგენური იმუნიზაციის წინ გროვდება, ყოველ ჯერზე 5 მლ სისხლით; იმავე დღეს, სისხლი ცენტრიფუგირებულია 400 xg სიმძლავრით 30 წუთის განმავლობაში წინასწარ გაცივებული 25 ℃ ცენტრიფუგის გამოყენებით. შრატის ზედა ფენა გამოიყოფა და ინახება შემდგომი ანტისხეულების ტიტრის ტესტირებისთვის.
ცალკეული ლიმფოციტები
თავდაპირველად, უჯრედების გამომყოფი ხსნარის 15 მლ დამატება, შემდეგ ნელა 15 მლ სისხლი 50 მლ ცენტრიფუგის მილში ჩაამატეთ. სისხლის დამატებისას ფრთხილად და ნელა მოძრაობთ, რათა თავიდან აიცილოთ სისხლისა და გამომყოფი ხსნარის შერევა. წინასწარ გაცივებული ცენტრიფუგა 25 ℃-ზე, ცენტრიფუგირება 400 xg-ზე 30 წუთის განმავლობაში და ზედა შრატი ახალ ცენტრიფუგის მილში -80 ℃-ზე შეინახეთ; პიპეტით შუა ბამბის ფორმის ზედა შრის იმუნური უჯრედების ასპირაცია ახალ 50 მლ ცენტრიფუგის მილში ჩაასხით. თითოეულ მილში ოთახის ტემპერატურის 10 მლ PBS ბუფერი ჩაამატეთ, ცენტრიფუგირება 25 ℃-ზე და 400 xg-ზე 20 წუთის განმავლობაში. ამოიღეთ ზედა ფენა, თითოეულ მილში ოთახის ტემპერატურის 5 მლ PBS ბუფერი ჩაამატეთ, ფრთხილად კარგად აურიეთ, ჰემოციტომეტრის გამოყენებით გამოთვალეთ უჯრედების რაოდენობა და შემდეგ ცენტრიფუგირება 25 ℃-ზე და 400 xg-ზე 20 წუთის განმავლობაში. ამოიღეთ ზედა ფენა და უჯრედების რაოდენობის მიხედვით გახსენით RNAiso Plus-ით მიღებული ლიმფოციტები, რათა მიიღოთ 10^7/მლ უჯრედული ლიზატი, რომელიც ინახება -80 ℃ ტემპერატურაზე.

სურ. 1: ანტისხეულების აღმოჩენის სხვადასხვა სტრატეგიისა და ექსპერიმენტული ეტაპების სქემატური წარმოდგენა. (სურათის წყარო: ლაუსტსენი, ანდრეას ჰ. და სხვ.)
მომხმარებლები უზრუნველყოფენ იმუნოგენების მკაცრ ხარისხის კონტროლს
| იმუნოგენების ტიპები | მოთხოვნა | ხარისხის კონტროლის მეთოდი |
|---|---|---|
| პეპტიდის / მცირე მოლეკულის ნიმუშები | დაშლის პირობები (ძირითადად დამოკიდებულია იმაზე, ინაქტივირებენ თუ არა ისინი ფაგებს), მოლეკულური სტრუქტურა/პეპტიდური თანმიმდევრობა, სინთეზის ანგარიში (HPLC/MS/HNMR) | HPLC/MS აღმოჩენა |
| ცილის ნიმუშები | SDS-PAGE/WB, გახსნის პირობები, ბუფერი, ეტიკეტის ინფორმაცია, საერთო რაოდენობა (20-50 მკგ), კონცენტრაცია, სისუფთავე და ა.შ. | SDS-PAGE/WB |
| უჯრედების ნიმუშები | უჯრედის ტიპი (პირველადი უჯრედები/გენის რედაქტირებული უჯრედები), უჯრედის ფორმა (ახალი/გაყინული, გალღობილი), ზრდის ტიპი (ადჰერენტული/სუსპენზირებული), კულტურული გარემოს მოთხოვნები, მოწოდებული უჯრედების რაოდენობა, მოწოდებული უჯრედების რაოდენობა, გენის რედაქტირებული უჯრედები სკრინინგის სამიზნეების სტაბილური ექსპრესიის უზრუნველსაყოფად (მომხმარებლის შესაბამისი პირველადი ანტისხეული), გაყინული, გალღობილი უჯრედები აღდგენის სიჩქარის დასადგენად. | ძირითადად გენმოდიფიცირებული უჯრედების დამიზნება, მომხმარებლის მიერ მოწოდებული პირველადი ანტისხეულების გამოყენებით სამიზნე ექსპრესიის ELISA იდენტიფიცირებისთვის (ჩვენი კომპანია უზრუნველყოფს HRP მეორად ანტისხეულებს), ნაკადური ციტომეტრიის დეტექცია (ჩვენს კომპანიას შეუძლია უზრუნველყოს ფლუორესცენტული მეორადი ანტისხეულების მიწოდება). |


-
რა გამოყენება აქვს ცხოველთა იმუნიტეტს?
+პოლიკლონური ანტისხეულების წარმოება შესაძლებელია ცხოველების იმუნიზაციით, მონოკლონური ანტისხეულების წარმოება შესაძლებელია B უჯრედების მიელომის უჯრედებთან შერწყმით, ხოლო PBMC-ების ექსტრაქცია შესაძლებელია აქლემის წყაროებიდან (ალპაკა, აქლემი, ალპაკა და ა.შ.) ანტისხეულების ფრაგმენტების სხვადასხვა ფორმის წარმოსაქმნელად, როგორიცაა ნანოსხეულები, Fab ფრაგმენტები, scFv ანტისხეულების ფრაგმენტები და ა.შ. -
რა არის ცხოველების იმუნიტეტის უზრუნველსაყოფად საჭირო ზომები?
+აქლემის ჯიშის ცხოველებისთვის ნანოანტისხეულების წარმოსაქმნელად საჭიროა 5-6 იმუნიზაცია. იმუნიზაციამდე უნდა შეგროვდეს სისხლის ნიმუშები კონტროლის სახით, თითოეულ იმუნიზაციას შორის 2 კვირის ინტერვალით. მეოთხე იმუნიზაციის შემდეგ, ტიტრის დასადგენად უნდა შეგროვდეს დადებითი და არაიმუნიზებული უარყოფითი სისხლი ELISA ტესტისთვის. თუ ტიტრი 10^6-ზე ნაკლებია, იმუნიზაციის რაოდენობა უნდა გაიზარდოს მანამ, სანამ ტიტრი შესაბამის დონეს არ მიაღწევს. სხვა ცხოველების იმუნიზაციისთვის, როგორიცაა კურდღლის იმუნიზაცია (კურდღლის იმუნიზაციისთვის ოპტიმალური ან საერთო ცილოვანი ანტიგენის დონეა 50-1000 მკგ), თაგვის იმუნიზაცია (თაგვის იმუნიზაციისთვის ოპტიმალური ან საერთო ცილოვანი ანტიგენის დონეა 5-50 მკგ, რაც მოითხოვს 10^6 უჯრედს, თუ ეს უჯრედია, და 10-50 მკგ ნუკლეინის მჟავას ან ნახშირწყლებისთვის), თხის იმუნიზაცია (თხის იმუნიზაციისთვის ოპტიმალური ან საერთო ცილოვანი ანტიგენის დონეა 250-5000 მკგ) და ა.შ., ყურადღება უნდა მიექცეს იმუნოგენების დოზას, უსაფრთხოებას და ეფექტურობას. -
როგორ ავირჩიოთ იმუნური ცხოველები?
+მომხმარებლის მიერ მოთხოვნილი ანტისხეულების ტიპის მიხედვით, თუ საჭიროა ნანოსხეულების ან სხვა ანტისხეულების ფრაგმენტების წარმოება, იმუნიზაციისთვის შეგიძლიათ აირჩიოთ აქლემიდან წარმოშობილი ცხოველები (აქლემები, ალპაკები, ალპაკები). თუ საჭიროა მონოკლონური ან პოლიკლონური ანტისხეულების წარმოება, უნდა აირჩიოთ შესაბამისი სახეობა შრატის, ანტიგენის და ანტიგენის წყაროს რაოდენობის მიხედვით. კურდღლებისთვის შრატის მაქსიმალური რაოდენობაა 500 მლ, რაც მოითხოვს ანტიგენის დაბალ რაოდენობას და წარმოადგენს პოლიკლონური ანტისხეულების წარმოებისთვის ძირითად არჩევანს. თაგვებისთვის შრატის მაქსიმალური რაოდენობაა 2 მლ, ხოლო ვირთხებისთვის შრატის მაქსიმალური რაოდენობაა 20 მლ, რაც, როგორც წესი, მონოკლონური ანტისხეულების ოპტიმალური არჩევანია. თხის მიერ წარმოებულ ანტისხეულებს აქვთ მაღალი აფინურობა და Alpha Lifetech-ს შეუძლია შექმნას ექსკლუზიური იმუნიზაციის გეგმა თქვენი მოთხოვნების შესაბამისად. -
საჭიროა თუ არა ანტიგენების გამოყენება ადიუვანტებთან ერთად? როგორ ავირჩიოთ ისინი?
+არსებობს ადიუვანტების ორი ტიპი: ზეთზე დაფუძნებული და წყალზე დაფუძნებული. ადიუვანტების გონივრული გამოყენება გადამწყვეტია ხსნად ანტიგენებზე ძლიერი ანტისხეულების პასუხის გამოსაწვევად. ადიუვანტების ხანგრძლივი გამოთავისუფლება ნიშნავს, რომ ანტიგენების ნაკლები დოზების გამოყენებაა შესაძლებელი და ანტისხეულების პასუხები უფრო ხანგრძლივია. პირველი ინექცია უნდა იქნას გამოყენებული ადიუვანტთან ერთად. ზოგადად, ფროუნდის ადიუვანტის გამოყენება რეკომენდებულია, როდესაც იმუნოგენის რაოდენობა მცირეა. -
ალპაკას იმუნიზაციის უსაფრთხოების ზომები?
+(1) ალპაკასა და იმუნიტეტის ანტიგენის შერჩევა წარმატებული იმუნიზაციის გასაღებია. კარგად პროპორციული აქლემის არჩევა რეკომენდებული არ არის. იმუნური ანტიგენების სისუფთავე და სწორი კონფორმაცია გადამწყვეტია ალპაკებით იმუნიზაციის შემდეგ შემდგომი გამოყენებისთვის შესაფერისი ანტისხეულების სკრინინგისთვის. ცილოვანი ანტიგენების სისუფთავე, როგორც წესი, არანაკლებ 90%-ია.(2) ლიმფოციტების გამოყოფა: უჯრედების დროული გამოყოფა ეფექტურად უშლის ხელს ჰემოლიზს სისხლის აღების შემდეგ, რათა მიღწეულ იქნას გამოყოფის საუკეთესო ეფექტი.(3) იმუნურ ციკლს შეუძლია გავლენა მოახდინოს იმუნურ პასუხზე: 1-2 კვირიანი იმუნური ინტერვალი ალპაკებს საშუალებას აძლევს, ჰქონდეთ კარგი იმუნური პასუხი ანტიგენების უმეტესობაზე.

დამოუკიდებლად შემუშავებული ადიუვანტი
ჩვენი უნიკალური ფორმულის ადიუვანტი ოპტიმიზირებულია ალპაკას იმუნური სისტემისთვის, რაც უზრუნველყოფს უფრო მაღალ პოტენციალს და სპეციფიკურობას, ვიდრე ტრადიციული ადიუვანტები.

იმუნიზაციის მიწოდებასტანდარტი
ჩვენ გპირდებით, რომ იმუნიზაციას დავასრულებთ მითითებულ ვადაში, მოგაწვდით მაღალი ტიტრის შრატს და თითოეულ ეტაპს აღვწერთ დეტალური ანგარიშების მეშვეობით.

პროექტის ხარისხის კონტროლი
თითოეული პროექტი გადის მკაცრი ხარისხის კონტროლის პროცესებს, რათა უზრუნველყოფილი იყოს მომხმარებლებისთვის მაღალი სტანდარტების შესაბამისი ანტისხეულების მიწოდება.

აშკარადალპაკაფონი
ჩვენ გვყავს ჯანმრთელი ალპაკას პოპულაცია, რომელიც მხარს უჭერს სხვადასხვა იმუნიზაციის პროგრამას.
თუ თქვენ გაქვთ რაიმე შეკითხვები, გთხოვთ, დაგვიკავშირდეთ ნებისმიერ დროს.
Leave Your Message
0102



2018-07-16 

