ანტისხეულების აფინურობის მომწიფების სერვისი

ალფა ლაიფტექი ინკ.შეგვიძლია შემოგთავაზოთ ანტისხეულების აფინურობის მომწიფების სერვისი მუტაციისა და შერჩევის ტექნოლოგიების გამოყენებით. აფინურობის მომწიფების სერვისის პროცესებში, როგორც წესი, ვიყენებთ scFv-ს, როგორც ანტისხეულების ფორმატს და მონოვალენტურ ჩვენების ფაგმიდურ სისტემას, რომელიც გამოიყენება ანტიგენთან შეკავშირების სკრინინგის დროს ავიდიტეტის ეფექტების შესამცირებლად. ჩვენს პროფესიონალურ გუნდს ასევე შეუძლია უზრუნველყოს ერთდომენიანი ანტისხეულების აფინურობის მომწიფების სერვისები.

ალფა ლაიფტექი ინკ.ამაყობს, რომ გლობალური კლიენტების მრავალფეროვანი საჭიროებების დასაკმაყოფილებლად ყოვლისმომცველ მომსახურებას სთავაზობს. ჩვენი მიზანია გავიგოთ და დავაკმაყოფილოთ სხვადასხვა მომხმარებლის მოთხოვნები და დავეხმაროთ კვლევით სამუშაოებში წარმოქმნილ ნებისმიერ მომავალ და ახალ პრობლემაში.

რა არის აფინურობის მომწიფება?

აფინურობის მომწიფება არის პროცესი, რომლის დროსაც ანტისხეულები განიცდიან განმეორებით მუტაციებს და სელექციას სპეციფიკური ანტიგენების მიმართ მათი აფინურობის გასაძლიერებლად. ძირითადად მეორადი ლიმფოიდური ორგანოების ჩანასახოვან ცენტრში მიმდინარე B უჯრედები განიცდიან სომატურ ჰიპერმუტაციას და სელექციას T უჯრედებისა და ფოლიკულური დენდრიტული უჯრედების გავლენით.
აფინურობის მომწიფების პროცესის დროს, დაბალი აფინურობის ზედაპირული იმუნოგლობულინის რეცეპტორების მქონე B უჯრედები აქტიურდებიან ანტიგენთან შეხებისას და განიცდიან პროლიფერაციას და დიფერენციაციას. სომატური ჰიპერმუტაციის აფინურობის მომწიფების გზით, იმუნოგლობულინის გენების ცვალებად რეგიონში ხდება შემთხვევითი ნუკლეოტიდური ჩანაცვლება, რაც იწვევს სხვადასხვა ანტისხეულების ვარიანტების წარმოქმნას. სომატური ჰიპერმუტაციის შემდეგ, მუტირებული იმუნოგლობულინის რეცეპტორების მქონე B უჯრედებზე ხორციელდება ანტიგენზე დაფუძნებული სელექცია. B უჯრედები, რომლებიც წარმოქმნიან ანტისხეულებს გაზრდილი ანტიგენური აფინურობით, უპირატესად ინარჩუნებენ და მათ პროლიფერაციის საშუალებას აძლევენ, ხოლო შემცირებული ან უცვლელი აფინურობის მქონე B უჯრედები განიცდიან აპოპტოზს. მუტაციისა და შერჩევის ეს განმეორებითი პროცესი იწვევს B უჯრედების კლონების წარმოქმნას, რომლებიც წარმოქმნიან ანტისხეულებს ანტიგენის მიმართ თანდათანობით მზარდი აფინურობით.

ანტისხეულების აფინურობის მომწიფების სერვისი

PCR-ზე დაფუძნებული მეთოდების მთავარი უპირატესობა ის არის, რომ მუტაციები ზუსტად არის მიმართული ამპლიფიცირებულ ფრაგმენტზე; შეცდომის მაჩვენებლის კონტროლი მარტივია, მეთოდი სწრაფი და მარტივი დასაყენებელია და არ იყენებს საშიშ ქიმიკატებს. კარგად არის ცნობილი, რომ Taq დნმ პოლიმერაზა დაბალი სიზუსტით აკოპირებს დნმ-ს, ძირითადად 3'-დან 5'-მდე კორექტურის აქტივობის არარსებობის გამო.ალფა ლაიფტექისანტისხეულების ინჟინერიის პლატფორმა იყენებს შეცდომებისადმი მიდრეკილ PCR მიდგომას, რათა ძირითადად CDR რეგიონები მუტაცია მოახდინოს ქვებიბლიოთეკის აგების დროს. ხშირად ჩვენ ვქმნით მუტაციებს სრულიად შემთხვევით პოზიციებზე მთელ VH და VL ფრაგმენტებში, რათა გავზარდოთ ქვებიბლიოთეკის გენეტიკური მრავალფეროვნება. შეცდომებისადმი მიდრეკილი PCR-ით მუტირებული ანტისხეულების გენის ბიბლიოთეკის აგების შემდეგ, მაღალი აფინურობის ვარიანტების შერჩევა (scFv ანტისხეულების აფინურობამ შეიძლება მიაღწიოს 10^8 - 10^10 M-ს) ხორციელდება ან ხსნარში პანირებით ან იმობილიზებული ანტიგენით, რეცხვის პირობებით, რომლებიც ოპტიმიზირებულია სიჩქარის შეცვლისთვის.
  
მეცნიერებიალფა ლაიფტექი ინკ.Escherichia coli-ს მუტატორული შტამები mutAD5TM გამოიყენება შემთხვევითი მუტაციების შესატანად რამდენიმე მუტაციის სტრატეგიიდან ერთ-ერთად და ამით რეკომბინანტული ანტისხეულების ფრაგმენტების აფინურობისა და ექსპრესიის მოდიფიცირება. შერჩევის პირობების მოდიფიცირება შესაძლებელია ანტისხეულების ფრაგმენტებისთვის, რომლებსაც აქვთ წარმოების გაზრდილი დონე. Escherichia coli-ს მუტატორულ უჯრედებში ზრდის პირობების კორექტირება შესაძლებელია დნმ-ის ყოველ კილობაზაზე ერთი შემთხვევითი წერტილოვანი მუტაციის შესატანად, რაც თითქმის ექვივალენტურია scFv ფრაგმენტზე ერთი კოდონის ცვლილებისა. მუტაციის, ჩვენებისა და შერჩევის რამდენიმე ციკლის შემდეგ, ჩვენ შეგვიძლია გავაუმჯობესოთ აფინურობის მუდმივა 10^5 - 10^6 M-დან 10^8 - 10^10 M-მდე.

აფინურობის მომწიფების სტრატეგიების გაუმჯობესება

ანტისხეულების გარკვეული პოზიციების რანდომიზაცია შესაძლებელია განსაზღვრული მრავალფეროვნებით (მაგალითად, სრული რანდომიზაცია ყველა 20 ამინომჟავით ან მიკერძოებული რანდომიზაცია შერჩეული ამინომჟავებით ფიქსირებული პროცენტებით) აფინურობის გასაუმჯობესებლად. ანტისხეულების აფინურობის გასაუმჯობესებლად ჩვენ გვაქვს ორი სტრატეგია: პირველი, მუტაციები შეჰყავთ კომპლემენტარობის განმსაზღვრელი რეგიონების (CDR) შეზღუდულ პოზიციებზე ადგილ-მიმართული მუტაგენეზის გზით; მეორე, მუტაციები შეჰყავთ მთელ V-კოდირების რეგიონებში შემთხვევითი მუტაგენეზის გზით. ამ ორი მეთოდის გამოყენებით, კონსერვირებული ამინომჟავების თანმიმდევრობები ან ანტისხეულის მთელი ჩარჩო რეგიონი ჩანაცვლდება სხვა ამინომჟავებით, რაც ჩვენს პეპტიდური ბიბლიოთეკის სკანირების ტექნოლოგიებთან ერთად, შეიძლება მნიშვნელოვნად გაზარდოს საინტერესო ანტისხეულების აფინურობა ძალიან მაღალ დონეზე.

ფაგის ჩვენება-ანტისხეულების აფინურობა

scFv მუტანტების ბიბლიოთეკის აგების შემდეგ, ხელმისაწვდომია სკრინინგის ორი სტრატეგია: ბიოპანინგი და მყარი ანტიგენის დახარისხება. პირველ შემთხვევაში, მაღალი აფინურობის მქონე ანტისხეულის იზოლირებისთვის გამოიყენება სუბსტრატის სუბტრაქციული კონცენტრაცია, რადგან დაბალი აფინურობის მქონე მუტანტები გამოირეცხება და დარჩება მაღალი სიავიდურობის მქონე ფაგის ნაწილაკები. მეორე სტრატეგია იყენებს ხსნარში მონიშნულ ანტიგენს, წონასწორობის მუდმივაზე (Kd) და შეკავშირების კინეტიკაზე დაფუძნებულ შერჩევას. შერჩევის ეს მიდგომა გამოყოფს გაუმჯობესებული Kd-ს მქონე ანტისხეულების ვარიანტებს.

თუ თქვენ გაქვთ რაიმე შეკითხვები, გთხოვთ, დაგვიკავშირდეთ ნებისმიერ დროს.