1960 წელს შემოთავაზებული იქნა ბისპეციფიკური ანტისხეულების კონცეფცია. ბისპეციფიკური ანტისხეულები, ასევე ცნობილი როგორც ბისპეციფიკური მონოკლონური ანტისხეულები, არის ხელოვნურად სინთეზირებული ანტისხეულები გენეტიკური ინჟინერიის ტექნოლოგიის გამოყენებით. როგორც ინჟინერიით შექმნილი ხელოვნური ანტისხეული, ბისპეციფიკური ანტისხეულები ჩვეულებრივ მიეკუთვნება IgG ქვეკლასს და შეიცავს ანტიგენის შემაკავშირებელ ფრაგმენტს, რომელიც მიზნად ისახავს CD3 ქვეერთეულს. ბისპეციფიკურ ანტისხეულებს აქვთ ორი სპეციფიკური ანტიგენის შემაკავშირებელი ადგილი, რომლებსაც შეუძლიათ ერთდროულად დაუკავშირდნენ და ამოიცნონ ორი განსხვავებული ანტიგენი, ან ანტიგენის ორი განსხვავებული ეპიტოპი. მონოკლონურ ანტისხეულებთან შედარებით, ბისპეციფიკურ ანტისხეულებს აქვთ დამატებითი სპეციფიკური ანტიგენის შემაკავშირებელი ადგილი, რითაც ფლობენ უფრო ძლიერ სპეციფიკურობას და დამიზნების უნარს, რაც უფრო ზუსტად შეუძლია სიმსივნური უჯრედების დამიზნება და სამიზნეზე ტოქსიკურობის შემცირება. ბისპეციფიკურ ანტისხეულებს შეუძლიათ ერთდროულად შეასრულონ მრავალი ბიოლოგიური ფუნქცია, როგორიცაა იმუნური უჯრედების მოზიდვა, სასიგნალო გზების ბლოკირება და სიმსივნური უჯრედების პირდაპირი განადგურება. ადრეული ბისპეციფიკური ანტისხეულები ძირითადად მზადდებოდა ქიმიური კონიუგაციის ან უჯრედების შერწყმის გზით, მაგრამ ეს მეთოდი შესაძლოა ნელა განვითარდა შემთხვევითი კომბინაციისა და სამიზნე კომბინაციის იზოლირების სირთულის გამო. გენეტიკური ინჟინერიის ტექნოლოგიების უწყვეტ განვითარებასთან ერთად, შემუშავდა მრავალი ახალი ტექნოლოგიური პლატფორმა, როგორიცაა კვანძები ხვრელებში (KIH), CrossMab, DVD Ig და ა.შ. ეს პლატფორმები ეფექტურად წყვეტენ ისეთ პრობლემებს, როგორიცაა მძიმე და მსუბუქი ჯაჭვების შეუსაბამობა და აუმჯობესებენ ბისპეციფიკური ანტისხეულების ერთგვაროვნებას და მოსავლიანობას.

ბისპეციფიკური ანტისხეულების წარმოების ძირითადი მეთოდებია ქიმიური შეერთება, ოთხი წყაროს ჰიბრიდომა და გენეტიკური ინჟინერიის ანტისხეულების მომზადება. მათ შორის, ქიმიური შეერთების მეთოდი აკავშირებს ორ ინტაქტურ IgG-ს ან ორ F (ab') 2 ანტისხეულების ფრაგმენტს ბისპეციფიკურ ანტისხეულებად ქიმიური შეერთების აგენტების, როგორიცაა ფტალიმიდი და დითიოაცილბენზოის მჟავა, გამოყენებით. ეს მეთოდი მარტივი და მარტივი გამოსაყენებელია, მაგრამ შეიძლება დააზიანოს ანტიგენის შეკავშირების ადგილი, შეამციროს ანტისხეულების აქტივობა და თავად შეერთების აგენტსაც აქვს გარკვეული ხარისხის კანცეროგენულობა. ოთხი წყაროს ჰიბრიდომის მეთოდი ეფუძნება ორი სხვადასხვა ჰიბრიდომის უჯრედული ხაზის სომატური უჯრედების შერწყმას შესაბამისი თაგვის IgG-ს გამოსახატავად. გენეტიკური ინჟინერიის ტექნოლოგიის საშუალებით, ანტისხეულების გენეტიკურად მოდიფიცირება შესაძლებელია ბისპეციფიკური ანტისხეულების შესაქმნელად. აგებულია ორი განსხვავებული მონოკლონური ანტისხეული და ორი ანტისხეულის Fab ფრაგმენტები ან მძიმე და მსუბუქი ჯაჭვის ცვლადი რეგიონები ცალ-ცალკე გაიყო. ჯვარედინი შეერთების რეაქციის ან ჯაჭვური რეკომბინაციის ტექნოლოგიის საშუალებით, ორი ფრაგმენტი გაერთიანდა ბისპეციფიკური ანტისხეულის შესაქმნელად. მიუხედავად იმისა, რომ გენეტიკური ინჟინერიის ტექნოლოგიის სირთულე შედარებით მაღალია, ამჟამად ის ბისპეციფიკური ანტისხეულების წარმოების ყველაზე ხშირად გამოყენებული მეთოდია ანტისხეულების სტრუქტურისა და ფუნქციის კორექტირებისთვის. ბისპეციფიკური ანტისხეულების დიზაინის ჩატარებისას შეიძლება გამოყენებულ იქნას ანტისხეულების ჯვარედინი რეაქტიულობის პრინციპი, თუმცა ანტისხეულების ჯვარედინი რეაქტიულობამ შეიძლება გამოიწვიოს არასპეციფიკური რეაქციები, ამიტომ ის ყურადღებით იქნება გათვალისწინებული ბისპეციფიკური ანტისხეულების დიზაინის პრაქტიკული გამოყენებისას, როგორიცაა ბისპეციფიკური ანტისხეულებით თერაპია.

ბისპეციფიკური ანტისხეულების გაწმენდა მაღალი სისუფთავის სამიზნე ანტისხეულების იზოლირებისა და გაწმენდის პროცესია. ზოგიერთი ხსნადი მინარევების მოსაშორებლად გამოიყენება ორი მეთოდი: ცენტრიფუგირება და ღრმა ფილტრაცია. სამიზნე ბისპეციფიკური ანტისხეული თავდაპირველად აფინური ქრომატოგრაფიით იჭერენ. IgG-ს მსგავსი ბისპეციფიკური ანტისხეულებისთვის გამოიყენება A ცილის აფინური ქრომატოგრაფი, ხოლო არა-IgG-ს მსგავსი ბისპეციფიკური ანტისხეულებისთვის შეიძლება გამოყენებულ იქნას მსუბუქი ჯაჭვის აფინური ქრომატოგრაფი. შემდეგ, ანტისხეული გარკვეული პერიოდის განმავლობაში ინკუბირდება დაბალი pH პირობებში, რაც იწვევს ვირუსის გარსის ზედაპირზე ცილოვანი სტრუქტურის დარღვევას, რითაც კარგავს უჯრედების დაინფიცირების უნარს. შუალედური ღრმა ფილტრაცია ხორციელდება მინარევების, როგორიცაა მასპინძელი უჯრედის ცილები (HCP), შემდგომი მოსაშორებლად. ანტისხეულების სისუფთავე უმჯობესდება ისეთი მეთოდებით, როგორიცაა იონური გაცვლითი ქრომატოგრაფი და ნებისმიერი ნარჩენი ვირუსი შორდება ნანოფილტრაციის ან ულტრაფილტრაციის ტექნიკით. დაბოლოს, ნიმუში კონცენტრირდება და იცვლება შესაფერისი ფორმულირების ბუფერით.