ფაგების ჩვენების ბიბლიოთეკის მშენებლობის სერვისი

Alpha Lifetech-ს გააჩნია M13/T7 ფაგების დისპლეის ყოვლისმომცველი პლატფორმა, რათა უზრუნველყოს ანტისხეულების ბიბლიოთეკების შექმნა და წარმოება. ჩვენ ასევე შეგვიძლია შემოგთავაზოთ მორგებული სერვისები, როგორიცაა ანტისხეულების scFv წარმოება, თქვენი საჭიროებების დასაკმაყოფილებლად.

დაგვიკავშირდით

ფაგების ჩვენების ბიბლიოთეკის მშენებლობის სერვისი

Alpha Lifetech-ი მრავალი წელია აქტიურად არის ჩართული ფაგების ჩვენების ტექნოლოგიაში. მან შექმნა იდეალური, სტაბილური ფაგების ჩვენების ტექნოლოგიური პლატფორმა, რომელიც ზოგავს დროს სამეცნიერო კვლევისთვის ან პროექტის კვლევისთვის და ხელს უწყობს შემდგომ წარმოებას. Alpha Lifetech-ს ასევე შეუძლია მომხმარებლებს შესთავაზოს ისეთი მომსახურება, როგორიცაა vhh ანტისხეულების წარმოება, scFv ანტისხეულების წარმოება, Fab ანტისხეულების წარმოება.

Alpha Lifetech-ს გააჩნია M13/T7 ფაგების დისპლეის ყოვლისმომცველი პლატფორმა, რათა უზრუნველყოს ანტისხეულების ბიბლიოთეკების შექმნა და წარმოება. ჩვენ ასევე შეგვიძლია შემოგთავაზოთ მორგებული სერვისები, როგორიცაა scFv ანტისხეულების წარმოება და მაღალი გამტარუნარიანობის ანტისხეულების სკრინინგი, თქვენი საჭიროებების დასაკმაყოფილებლად.

ფაგის ჩვენების შესავალი

ფაგების ჩვენების ტექნოლოგია არის ტექნიკა, რომელიც იყენებს ფაგებს (ვირუსს, რომელიც აინფიცირებს ბაქტერიებს) კონკრეტული ცილების ან პეპტიდების ფუნქციური შემაკავშირებელი მოლეკულების მოსაძებნად. ფაგების ანტისხეულების ბიბლიოთეკის აგების ტექნიკა მოიცავს Fab ანტისხეულების ბიბლიოთეკის აგებას, scFv ანტისხეულების ბიბლიოთეკის აგებას, ნანოსხეულების ბიბლიოთეკის აგებას და ა.შ. ბაქტერიოფაგების ტიპების მიხედვით, ისინი შეიძლება დაიყოს M13, T7, T4, λ და სხვა სისტემებად. ბიბლიოთეკის ტიპის მიხედვით, ისინი შეიძლება დაიყოს შემთხვევითი პეპტიდების ბიბლიოთეკად, cDNA ბიბლიოთეკად, ანტისხეულების ბიბლიოთეკად და ცილების ბიბლიოთეკად. ფაგების ჩვენების ტექნოლოგია მარტივი და იაფია გამოსაყენებლად. თუმცა, ეს ტექნიკა ზღუდავს ბიბლიოთეკაში მოლეკულური გენეტიკის მრავალფეროვნებას, რომელსაც არ შეუძლია ძალიან გრძელი თანმიმდევრობების გამოხატვა.

ამჟამად, ფაგური დისპლეის ტექნოლოგია ფართოდ გამოიყენება. მათ შორის მნიშვნელოვანი მიღწევებია ახალი ვაქცინების (იაფი და ეფექტური სინთეზური ვაქცინები) კვლევასა და შემუშავებაში, ანტისხეულების შემცველი პრეპარატების შემუშავებაში (ფერმენტის ინჰიბიტორების სკრინინგი), უჯრედული სიგნალის ტრანსდუქციაში (სიმულირებული ეპიტოპების სკრინინგი) და ანტიგენური ეპიტოპების კვლევაში (მონოკლონური ანტისხეულების მომზადება).

T7 ბაქტერიოფაგის შესავალი

T7 ბაქტერიოფაგი წარმოადგენს ორჯაჭვიან დნმ-ს, რომლის სიგრძეა 40 კბ და შეფუთულია 60 ნმ დიამეტრის კაფსიდში. თავსა და კუდს შორის შემაერთებელი არის რგოლისებრი სტრუქტურა, რომელიც შედგება gp8-ის მრავალი ასლისგან. t7 ბაქტერიოფაგის თავი და ბირთვი ქმნის ცილინდრულ სტრუქტურას, რომელიც უკავშირდება gp8-ს და შეუძლია თავისა და კუდის დაკავშირება.

სურ. 1 T7 ბაქტერიოფაგის სქემატური წარმოდგენა.(მითითება: T7 ფაგის დისპლეის სისტემის მიღწევები (მიმოხილვა))

შესავალი M13 ბაქტერიოფაგში

ბაქტერიოფაგი M13 მიეკუთვნება ძაფისებრი ფაგების ჯგუფს, რომლებსაც ერთობლივად Ff ფაგებს უწოდებენ. მისი სიგრძეა 900 ნმ და სიგანე 6.5 ნმ. იგი შეიცავს ერთჯაჭვიანი დნმ-ის (ssDNA) გენომს 6407 bp სიგრძით, რომელიც შედგება ცხრა გენისგან, რომლებიც 11 სხვადასხვა ცილას აკოდირებენ. მათ შორის, ხუთი ცილა გარსის ცილებია, ხოლო ექვსი ცილა მონაწილეობს ფაგის რეპლიკაციასა და აწყობაში. გარსის ცილების ყველაზე მაღალი კონცენტრაცია კაფსიდური ცილა G8P-შია, რომელიც დაახლოებით 2700 ცილოვანი ერთეულისგან შედგება და ქრომოსომის გარშემო გარსს ქმნის.

სურ. 2. ბაქტერიოფაგ M13-ის სქემატური წარმოდგენა.(მითითება: ანტისხეულების ფაგის ჩვენების ტექნოლოგიის საფუძვლები)

ფაგის ჩვენების ანტისხეულების ბიბლიოთეკის შესავალი

ანტისხეულების აღმოჩენა თანამედროვე მედიცინაში სულ უფრო მნიშვნელოვანი ხდება. არსებობს ანტისხეულების აღმოჩენის სხვადასხვა მიდგომა, მაგრამ ფაგური დისპლეის ანტისხეულების ბიბლიოთეკა უფრო მეტად გამოიყენება სამედიცინო მეცნიერებაში.

1990 წლიდან ფაგების ბიბლიოთეკების შესაქმნელად გამოიყენება სხვადასხვა ანტისხეულების ფორმატი, მათ შორის VHs, VHHs, scFvs, დიასხეულები და Fab ანტისხეულები. VH და VL სტრუქტურული დომენებისგან შემდგარი scFv წარმოადგენს ერთჯაჭვიან ანტისხეულებს, რომლებიც გამოიყენება ანტისხეულების scFv ბიბლიოთეკების შესაქმნელად. scFv ხასიათდება მოკლე ნახევარგამოყოფის პერიოდით და დაბალი იმუნოგენურობით. Fab ანტისხეულების ბიბლიოთეკა შედგება VH, VL, CL და CH1-ისგან, რომლებსაც შეუძლიათ სწრაფად გამოყონ იდეალური ანტისხეულები მაღალი აფინურობით. ამჟამად ნანოსხეულების ბიბლიოთეკას წარმოადგენს ყველაზე პატარა ერთეული, რომელსაც შეუძლია დაუკავშირდეს სამიზნე ანტიგენ-VHH-ს. VHH-ს აქვს მარტივი სტრუქტურის, მცირე მოცულობის, მაღალი ხსნადობის, კარგი სტაბილურობის, მარტივი მომზადებისა და ექსპრესიის უპირატესობები. სინთეზური ნანოსხეულების (Nb) ბიბლიოთეკები ყალიბდება, როგორც ცხოველების იმუნიზაციის მიმზიდველი ალტერნატივა სტაბილური, მაღალი აფინურობის სინთეზური ნანოსხეულებისთვის. ზოგადად, ეს ანტისხეულების ფრაგმენტები შერწყმულია M13 ფაგის G3P-სთან და ანტისხეულების ფრაგმენტის კოდირების გენების დიდი რაოდენობის კლონირებით, შესაძლებელია ფაგების ჩვენების ანტისხეულების დიდი ბიბლიოთეკების გენერირება, საიდანაც შესაძლებელია მრავალი მრავალფეროვანი ანტისხეულის შერჩევა.

ფაგების ბიბლიოთეკის მშენებლობის პროცესი

ფაგების ბიბლიოთეკის აგების პროცესი შემდეგია: PCR ამპლიფიკაციისთვის შექმნილია სპეციფიკური პრაიმერები, რომლებიც იღებენ პროდუქტებს, რომლებიც ფერმენტულად უკავშირდება T7/M13 ფაგის ვექტორს და რეკომბინანტული ფაგის პლაზმიდა წარმატებით აგებულია. რეკომბინანტული ფაგის პლაზმიდა ტრანსფორმირებული იქნა TG1 რეცეპტორულ უჯრედებად, შემდეგ დაფარული იყო შესაბამისი ანტიბიოტიკების შემცველი გარემოთი და ტრანსფორმატორების სკრინინგის შემდეგ ჩატარდა გაფართოებული კულტურა. კულტივირების მრავალჯერადი რაუნდის შემდეგ, ფაგი იმეორებს რეპლიკაციის დროს ბაქტერიაში და წარმატებით გამოხატავს სამიზნე ცილას ან პოლიპეპტიდს. შემდეგ ფაგების ბიბლიოთეკა იწმინდება ზოგიერთი მინარევების და შეუკავშირებელი ფაგების მოსაშორებლად.

ცვლადი რეგიონები (VH და VL) კორელირებდა ანტისხეულების მრავალფეროვნებასთან და VH და VL შეიყვანეს ფაგის ვექტორში ფაგის ცილა PIII-ის კოდირების თანმიმდევრობასთან ერთად. აწყობის შემდეგ, ფაგის ნაწილაკი გამოიყოფა და ერწყმის მცირე გარსის ცილა III-ის N-ტერმინალს ფუნქციური ანტისხეულის ფრაგმენტის წარმოსაქმნელად, რითაც მიიღება ანტისხეულების დნმ-ის თანმიმდევრობის შემცველი ბიბლიოთეკა.

იმუნიზაციის დასრულების შემდეგ, ტიტრი დადგინდა და ტიტრის კვალიფიკაციის შემდეგ ცხოველის სისხლი აღებული იქნა. ლიმფოციტები იზოლირებულია სისხლიდან, რნმ ექსტრაგირებულია, RT-PCR ამპლიფიცირდება სამიზნე ფრაგმენტით და მიიღება V რეგიონის გენის ფრაგმენტი. V გენი ამპლიფიცირდება სპეციფიკური პრაიმერის გამოყენებით.

შექმნილი ბუნებრივი ბიბლიოთეკები მოიცავს ცხოველებში არსებულ სუსტ იმუნოგენურ ანტისხეულებს, რომლებსაც შეუძლიათ ნებისმიერი სამიზნის დამიზნება. ფაგის ანტისხეულები, რომლებიც სპეციფიკურად უკავშირდება ანტიგენს, შეიძლება შეგროვდეს სკრინინგის ტექნიკის გამოყენებით, რომელიც აფიქსირებს ან ასახელებს ანტიგენს.

სამიზნე ანტიგენი ფიქსირდება მყარ მატარებელზე, როგორიცაა მიკროფირფიტის ხვრელი, ან შეერთებულია მაგნიტურ მძივთან. შემდეგ ფაგის ანტისხეულების ბიბლიოთეკა ემატება ანტიგენთან დასაკავშირებლად. მრავალჯერადი ელუირების შემდეგ, დაბალი აფინურობის ან არასპეციფიკური ფაგები ირეცხება და სპეციფიკური ანტისხეულების მქონე ფაგები რჩება.

ფაგის ჩვენების გამოყენება

*თანამედროვე მედიცინაში ანტისხეულების აღმოჩენა სულ უფრო მნიშვნელოვანი ხდება. არსებობს ანტისხეულების აღმოჩენის სხვადასხვა მიდგომა, მაგრამ ფაგური დისპლეის ტექნოლოგია უფრო მეტად გამოიყენება სამედიცინო მეცნიერებაში. 1990 წლიდან ფაგური ბიბლიოთეკების შესაქმნელად გამოიყენება ანტისხეულების სხვადასხვა ფორმატი, მათ შორის VH-ები, VHH-ები, scFv-ები, დიასხეულები და Fab ანტისხეულები.
*ფაგების პეპტიდური ბიბლიოთეკები ცილის ეპიტოპების თანმიმდევრობის სწრაფად განსაზღვრის საშუალებას იძლევა და ეპიტოპებსა და ანტიგენურ რეცეპტორებს შორის ურთიერთქმედების შესწავლის ძლიერ ინსტრუმენტად იქცა.
ანტისხეულების ფრაგმენტები შერწყმულია M13 ფაგის G3P-სთან და ანტისხეულების ფრაგმენტის კოდირების გენების დიდი რაოდენობის კლონირებით, შესაძლებელია ფაგის დისპლეის ანტისხეულების დიდი ბიბლიოთეკების გენერირება, საიდანაც შესაძლებელია მრავალი მრავალფეროვანი ანტისხეულის შერჩევა.
*T7 ფაგის დისპლეის სისტემას მრავალი უპირატესობა აქვს, მათ შორის სიმარტივე, მაღალი უსაფრთხოება, სტაბილურობა, მარტივი შენახვა და ტრანსპორტირება, ამიტომ სისტემა გამოიყენება პრევენციულ და თერაპიულ ვაქცინებში.
*T7 ფაგის დისპლეის სისტემას შეუძლია სხვადასხვა ანტიგენის აღმოჩენა, როგორიცაა პათოგენური მიკროორგანიზმების ზედაპირული ანტიგენები და კიბოს ანტიგენები.

ფაგი

რატომ უნდა აგვირჩიოთ ჩვენ

Alpha Lifetech-ს ასევე შეუძლია მომხმარებლებს შესთავაზოს ისეთი მომსახურება, როგორიცაა vhh ანტისხეულების წარმოება, scFv ანტისხეულების წარმოება, Fab ანტისხეულების წარმოება.