ფაგების ჩვენების ბიბლიოთეკის სკრინინგის სერვისი

ფაგების ჩვენების სკრინინგის ტექნოლოგია ანტიგენური ეპიტოპების შესწავლის გარდა, გამოიყენება ისეთ სფეროებში, როგორიცაა უჯრედული სიგნალის ტრანსდუქცია, ცილის ამოცნობის ადგილები და მედიკამენტების შემუშავება.

დაგვიკავშირდით

ფაგების ჩვენების ბიბლიოთეკის სკრინინგის სერვისი

Alpha Lifetech-ი მრავალი წელია აქტიურად არის ჩართული ფაგების ჩვენების ტექნოლოგიაში. მან შექმნა იდეალური, სტაბილური ფაგების ჩვენების ტექნოლოგიური პლატფორმა, რომელიც ზოგავს დროს სამეცნიერო კვლევისთვის ან პროექტის კვლევისთვის და ხელს უწყობს შემდგომ წარმოებას. Alpha Lifetech-ს ასევე შეუძლია მომხმარებლებს შესთავაზოს ისეთი მომსახურება, როგორიცაა vhh ანტისხეულების წარმოება, scFv ანტისხეულების წარმოება, Fab ანტისხეულების წარმოება.

Alpha Lifetech-ს გააჩნია M13/T7 ფაგების დისპლეის ყოვლისმომცველი პლატფორმა, რათა უზრუნველყოს ანტისხეულების ბიბლიოთეკების შექმნა და წარმოება. ჩვენ ასევე შეგვიძლია შემოგთავაზოთ მორგებული სერვისები, როგორიცაა scFv ანტისხეულების წარმოება და მაღალი გამტარუნარიანობის ანტისხეულების სკრინინგი, თქვენი საჭიროებების დასაკმაყოფილებლად.

ფაგების ჩვენების ბიბლიოთეკის აგების პროცესი

ფაგების ბიბლიოთეკის აგების პროცესი შემდეგია: PCR ამპლიფიკაციისთვის შექმნილია სპეციფიკური პრაიმერები, რომლებიც იღებენ პროდუქტებს, რომლებიც ფერმენტულად უკავშირდება T7/M13 ფაგის ვექტორს და რეკომბინანტული ფაგის პლაზმიდა წარმატებით აგებულია. რეკომბინანტული ფაგის პლაზმიდა ტრანსფორმირებული იქნა TG1 რეცეპტორულ უჯრედებად, შემდეგ დაფარული იყო შესაბამისი ანტიბიოტიკების შემცველი გარემოთი და ტრანსფორმატორების სკრინინგის შემდეგ ჩატარდა გაფართოებული კულტურა. კულტივირების მრავალჯერადი რაუნდის შემდეგ, ფაგი იმეორებს რეპლიკაციის დროს ბაქტერიაში და წარმატებით გამოხატავს სამიზნე ცილას ან პოლიპეპტიდს. შემდეგ ფაგების ბიბლიოთეკა იწმინდება ზოგიერთი მინარევების და შეუკავშირებელი ფაგების მოსაშორებლად.

ფაგების ჩვენების ბიბლიოთეკის სკრინინგის მეთოდები

ფაგური დისპლეის ანტისხეულების წარმოების წარმატება ძირითადად დამოკიდებულია ანტისხეულების ფაგური დისპლეის ბიბლიოთეკებზე, ხოლო ფაგური პანირების გავრცელებული მეთოდებია მყარი და თხევადი ფაზის სკრინინგი. მყარი ფაზის ანტიგენის სკრინინგი ამდიდრებს სპეციფიკურ ანტისხეულებს ელუაციის 3-4 რაუნდის მეშვეობით, ანტისხეულების ფაგური დისპლეის ბიბლიოთეკების მისაღებად; თხევადი ფაზის ანტიგენის სკრინინგი ხორციელდება ბიოტინ-მონიშნული სამიზნე და ანტისხეულების ფაგური დისპლეის ბიბლიოთეკების ინკუბაციით და შეკავშირებული ფაგების მაგნიტური მძივების გამოყენებით დაჭერით. მყარი ფაზის სკრინინგი მოიხმარს მეტ ანტიგენს და ზოგიერთი ანტიგენის ეპიტოპი განადგურებულია. თხევადი ფაზის სკრინინგი ხასიათდება მაღალი ეფექტურობით და გამდიდრებით, მაგრამ მიღებული ანტისხეულები ნაკლებად სპეციფიკურია. ფაგური პანირების მეთოდი დამოკიდებულია ექსპერიმენტულ საჭიროებებზე, რომელთაგან თითოეულს გარკვეული გავლენა ექნება ფაგური დისპლეის ანტისხეულების წარმოების ეფექტზე.

მაღალი გამტარუნარიანობის ანტისხეულების სკრინინგი

თანამედროვე მედიცინაში ანტისხეულების შემუშავება სწრაფი ტემპით მიმდინარეობს. არსებობს ანტისხეულების შემუშავების სხვადასხვა მეთოდი, მაგრამ სამედიცინო მეცნიერებაში უფრო მეტად გამოიყენება მაღალი გამტარუნარიანობის ანტისხეულების სკრინინგი. ამ პროცესით შესაძლებელია ანტისხეულების რეპერტუარის დიდი მრავალფეროვნების მიღწევა. ანტისხეულების ბიბლიოთეკების სკრინინგის ტრადიციულ მეთოდებთან შერწყმამ შეიძლება გააუმჯობესოს ფაგური ჩვენების ბიბლიოთეკების სკრინინგის ხარისხი. ბიოლოგიური სკრინინგის შემდეგ, ანტისხეულების დახასიათება შესაძლებელია დაბალი გამტარუნარიანობის ELISA ან მაღალი გამტარუნარიანობის ანტისხეულების სკრინინგის მეთოდით.

სურ. 1. ფაგური ანტისხეულების ბიბლიოთეკების შექმნიდან დაწყებული ანტიგენების მიმართ მაღალი აფინურობითა და დაბალი იმუნოგენურობით მონოკლონური ანტისხეულების გენერაციით დამთავრებული მოვლენების თანმიმდევრობით მიმდინარე დიაგრამა.(საცნობარო წყარო: ფაგების ჩვენების ტექნოლოგია, როგორც ანტისხეულების წამლის აღმოჩენის ძლიერი პლატფორმა - PMC (nih.gov))

ანტისხეულების ფაგის ჩვენების სკრინინგის სიფრთხილის ზომებიᲡიფრთხილის ზომები

ბუფერული მოსაზრებები

ბუფერების შერჩევისას უნდა გაითვალისწინოს სამიზნის სტაბილურობა, შეკავშირების მიკროგარემო და მინიმალური არასპეციფიკური შეკავშირება ფაქტობრივი გამოყენების სცენარში. დაუკავშირებელი ცილები, არაიონური დეტერგენტები და ფიზიოლოგიური მარილების კონცენტრაციები ხელს უწყობს ფონის შემცირებას. ასევე არსებობს სხვა პირობები, როგორიცაა ზოგიერთი სამიზნე შეიძლება მოითხოვდეს ბუფერში ორვალენტიანი კათიონების ან სხვა კოფაქტორების დამატებას, ცილის კოფაქტორები შეიძლება იყოს სამიზნესთან თანაფიქსირებული, შეიძლება დაემატოს დახარისხების ბუფერს და შეიძლება გამოყენებულ იქნას სამიზნის დაჭერის საშუალებადაც კი.

წნევის გათვალისწინებით

შერჩევის წნევის საერთო გასათვალისწინებელი ფაქტორებია სამიზნე მოლეკულების კონცენტრაცია, შეკავშირების დრო, რეცხვის ინტენსივობა და ა.შ. შერჩევის წნევის გაზრდის სხვა ტექნიკაა დენატურანტების (როგორიცაა მჟავები, შარდოვანა და გუანიდინი), ორგანული გამხსნელების გამოყენება, ტემპერატურის აწევა ან კონკურენტი ლიგანდების ან სამიზნეების კონცენტრაციის გაზრდა სარეცხ ბუფერში.
მათ შორის მნიშვნელოვანია სკრინინგის პირველი რაუნდი. სკრინინგის პირველი რაუნდი გულისხმობს აგებული ბიბლიოთეკიდან რაც შეიძლება მეტი დადებითი კლონის დაჭერას არასპეციფიკური კლონების მოცილებასთან ერთად. ბიბლიოთეკის მრავალფეროვნების შესანარჩუნებლად, შეკავშირებული ფაგების დიდი რაოდენობის დაჭერის უზრუნველსაყოფად, უნდა იქნას გამოყენებული ფოროვანი გარსით დაფარული სამიზნეები ან ხსნადი სამიზნეების დიდი რაოდენობა. სკრინინგის შემდგომ რაუნდებში, გამდიდრების ზრდასთან, მრავალჯერადი რეცხვასთან და რეცხვის დროის გაზრდასთან ერთად, შესაძლებელია მაღალი აფინურობის მქონე კლონების სკრინინგი.

უარყოფითი სკრინინგის სტრატეგია

ანტიგენური ტეგებისა და მატარებლის მასალების სკრინინგის პროცესი გულისხმობს ანტიგენის კონიუგატებზე არსებული ყველა ნივთიერების, როგორიცაა ტეგები, შერწყმული ცილები და დამხმარე სუბსტრატები, სკრინინგს. არასამიზნეების ნეგატიურმა სკრინინგმა შეიძლება შეზღუდოს სამიზნე ანტიგენის გარდა სხვა ანტისხეულების გამდიდრება.
ტრანსფექტირებული უჯრედული ხაზების სკრინინგის დროს შესაძლებელია მთლიანი უჯრედების, ლიპოსომების, ნანო-ფოსფოლიპიდური დისკების და VLP-ების უარყოფითად სკრინინგული ტესტირება სიმულირებული ტრანსფექტირებული უჯრედების ან არატრანსფექტირებული უჯრედების გამოყენებით.
რთული ანტიგენური ნარევების მოცილება. მკაცრი უარყოფითი სკრინინგი შეიძლება ჩატარდეს უცნობი ან რთული სამიზნე მოლეკულებისთვის, როგორიცაა მთელი უჯრედები ან უწმინდური ცილები.
ანტიგენების სპეციფიკური უბნების წინააღმდეგ ანტისხეულების სტრატეგიაა ლიგანდთან კონკურენციის უნარის მქონე ანტისხეულის ელუირება ლიგანდების მაღალი კონცენტრაციის დამატებით, ხოლო მეორე - ანტისხეულის ბლოკირება.

ფაგის ჩვენების გამოყენება

*თანამედროვე მედიცინაში ანტისხეულების აღმოჩენა სულ უფრო მნიშვნელოვანი ხდება. არსებობს ანტისხეულების აღმოჩენის სხვადასხვა მიდგომა, მაგრამ ფაგური დისპლეის ტექნოლოგია უფრო მეტად გამოიყენება სამედიცინო მეცნიერებაში. 1990 წლიდან ფაგური ბიბლიოთეკების შესაქმნელად გამოიყენება ანტისხეულების სხვადასხვა ფორმატი, მათ შორის VH-ები, VHH-ები, scFv-ები, დიასხეულები და Fab ანტისხეულები.
*ფაგების პეპტიდური ბიბლიოთეკები ცილის ეპიტოპების თანმიმდევრობის სწრაფად განსაზღვრის საშუალებას იძლევა და ეპიტოპებსა და ანტიგენურ რეცეპტორებს შორის ურთიერთქმედების შესწავლის ძლიერ ინსტრუმენტად იქცა.
ანტისხეულების ფრაგმენტები შერწყმულია M13 ფაგის G3P-სთან და ანტისხეულების ფრაგმენტის კოდირების გენების დიდი რაოდენობის კლონირებით, შესაძლებელია ფაგის დისპლეის ანტისხეულების დიდი ბიბლიოთეკების გენერირება, საიდანაც შესაძლებელია მრავალი მრავალფეროვანი ანტისხეულის შერჩევა.
*T7 ფაგის დისპლეის სისტემას მრავალი უპირატესობა აქვს, მათ შორის სიმარტივე, მაღალი უსაფრთხოება, სტაბილურობა, მარტივი შენახვა და ტრანსპორტირება, ამიტომ სისტემა გამოიყენება პრევენციულ და თერაპიულ ვაქცინებში.
*T7 ფაგის დისპლეის სისტემას შეუძლია სხვადასხვა ანტიგენის აღმოჩენა, როგორიცაა პათოგენური მიკროორგანიზმების ზედაპირული ანტიგენები და კიბოს ანტიგენები.

ფაგი

რატომ უნდა აგვირჩიოთ ჩვენ

Alpha Lifetech-ს ასევე შეუძლია მომხმარებლებს შესთავაზოს ისეთი მომსახურება, როგორიცაა vhh ანტისხეულების წარმოება, scFv ანტისხეულების წარმოება, Fab ანტისხეულების წარმოება.