ცილა-ცილის ურთიერთქმედების ანალიზის სერვისი

Alpha Lifetech-ს ასევე შეუძლია მომხმარებლებს შესთავაზოს ცილის ანალიზები, ცილის ურთიერთქმედების ანალიზი, ცილა-ცილის ურთიერთქმედების ანალიზი (CO-IP, Western Blot, ქრომატინის იმუნოპრეციპიტაციის ანალიზი) და ცილის ფუნქციის ანალიზი სხვადასხვა მომხმარებლის ექსპერიმენტული საჭიროებების დასაკმაყოფილებლად.

დაგვიკავშირდით

ცილა-ცილის ურთიერთქმედების ანალიზის სერვისი

„ალფა ლაიფტეკი“ მრავალი წლის განმავლობაში აქტიურად იყო ჩართული ცილების ანალიზში, შექმნა ცილების ფუნქციის ანალიზისთვის მყარი პლატფორმა და დაეუფლა სხვადასხვა ტექნიკურ საშუალებას ცილების ურთიერთქმედების დასადასტურებლად, რამაც შეიძლება დაზოგოს სამეცნიერო კვლევის ან პროექტის კვლევის დრო და ამავდროულად უზრუნველყოს სტაბილური შედეგები.

შესავალი ცილა-ცილის ურთიერთქმედების ანალიზში

ცილები სიცოცხლის ნებისმიერი ფორმის ყველაზე კრიტიკული აღმასრულებელი მოლეკულებია, რომლებიც გენეტიკურ მასალებში შენახულ ინსტრუქციებს რეაგირებენ. უფრო ხშირად, ცილები თავიანთ ფუნქციას სხვა ცილებთან ურთიერთქმედების როლის შემსრულებლების როლის შესრულებით ასრულებენ, რაც უფრო აშკარაა, როდესაც ცილის ფუნქცია უჯრედის რეალურ კონტექსტში განიხილება. ცილებს შორის ურთიერთქმედების იდენტიფიცირება ძალიან მნიშვნელოვანია ცალკეული ცილის ბიოქიმიური კვლევისთვის. ცილების ურთიერთქმედების ანალიზის ყველაზე გავრცელებული სახეობებია:

კო-იმუნოპრეციპიტაციის ანალიზი

კო-იმუნოპრეციპიტაციის მეთოდის პრინციპია სამიზნე ცილის, სპეციფიკური ანტისხეულის და ცილა A/G მაგნიტური მძივების შერევა ინკუბაციისთვის, შეუკავშირებელი ცილის ზედა ფენა გამოიყოფა მაგნიტურ თაროზე მაგნიტური მძივების ადსორბციის გზით და მაგნიტური მძივები ირეცხება ცილისა და სხვა მინარევების მოსაშორებლად, თუ ისინი სპეციფიკურად არ არის შეკავშირებული.

სურ. 1. Co-IP ანალიზების სქემატური დიაგრამა.(საცნობარო წყარო: კოიმუნოპრეციპიტაციის ანალიზი - PubMed (nih.gov))

ჩამოწევის ანალიზი

ჩამოწევის ანალიზი გულისხმობს ცნობილი ცილის მაგნიტურ მძივზე ფიქსაციას და აღმოსაჩენი ნივთიერების დამატებას. ელუენტი აღმოჩენილია ურთიერთქმედების მქონე ცილების ადსორბციისთვის.

1988 წელს სმიტმა და სხვებმა გაწმინდეს GST შერწყმული ცილა, რომელიც გამოიყენეს Pull-down ანალიზებში და ეწოდება Gst Pull-down, რაც გულისხმობს სამიზნე ცილაზე GST ტეგის დამატებას, ურთიერთქმედების მქონე ცილის GSH-ის მეშვეობით დაჭერას, შეკავშირების ელუირებას და მის WB ანალიზებით დადასტურებას.

სურ. 2. GST-ის ჩამოსაშლელი ანალიზების სქემატური დიაგრამა.(საცნობარო წყარო: GST Pull-Down ანალიზი PIF4-ის შეკავშირების შესასწავლად in vitro - PubMed (nih.gov) )

მისი გამხსნელი მიდგომაა ლითონის იონების, როგორიცაა ნიკელი ან კობალტი, გამოყენება გარემოდ, ცილის გაწმენდა აფინური ქრომატოგრაფიის საშუალებით და შეკავშირების ელუირება WB ექსპერიმენტის საშუალებით ვერიფიკაციისთვის.

გარდა ამისა, არსებობს DNA Pull-down (ცილის დნმ-ის შეკავშირების ანალიზი), RNA Pull-down (ცილის რნმ-ის ურთიერთქმედების ანალიზი) და მცირე მოლეკულების Pull-down ანალიზები.

DNA Pull-down (ცილის დნმ-ის შეკავშირების ანალიზი) არის ცილის დნმ-ის შეკავშირების დასადგენად in vitro მეთოდი. WB ანალიზებით დადგინდა, უკავშირდება თუ არა სპეციფიკური ცილები სამიზნე დნმ-ს; უცნობი დნმ-ის ფრაგმენტები უკავშირდება ცილებს, რომელი დნმ-ის ფრაგმენტებია ცნობილი MS დეტექციაში.

RNA Pull-down (ცილის რნმ-ის ურთიერთქმედების ანალიზი) არის in vitro მეთოდი რნმ-ის ცილებთან შეკავშირების დასადგენად. WB ანალიზებით დადგინდა, უკავშირდება თუ არა სპეციფიკური ცილები სამიზნე რნმ-ს; უცნობი რნმ-ის ფრაგმენტები უკავშირდება ცილებს, რომელი რნმ-ის ფრაგმენტებია ცნობილი MS დეტექციაში.

SM pull-down-ის (მცირე მოლეკულის pull-down ანალიზები) გამოყენებით შესაძლებელია სამიზნე ცილების აღმოჩენა, რომლებიც სპეციფიკურად უკავშირდებიან მცირე მოლეკულებს, ხოლო MS-თან შერწყმისას, შესაძლებელია მცირე მოლეკულური სამიზნე ცილების ზუსტად სკრინინგული გამოკვლევა, რომელიც შეიძლება დაიყოს in vitro მარკირების მეთოდად და ბიოლოგიურ ორთოგონალურ მეთოდად.

მსოფლიო ბანკის ექსპერიმენტი

WB ექსპერიმენტი (ასევე ცნობილი როგორც Western Blot ექსპერიმენტი ან Western blot), არსი ანტიგენისა და ანტისხეულის სპეციფიკური რეაქციაა, ძირითადი პრინციპია დენატურირებული ცილების გამოყოფა SDS პოლიაკრილამიდური გელის ელექტროფორეზის მეშვეობით და მათი გადატანა მყარ ფაზის მატარებელზე (როგორიცაა PVDF მემბრანა, NC მემბრანა) მემბრანული გადაცემის (სველი ან ნახევრად მშრალი როტაციის) გზით. ბლოკირების შემდეგ (BSA-ს, მაწონის და ა.შ. გამოყენებით), პირველადი ანტისხეული გამოიყენება ცილასთან სპეციფიკურად დასაკავშირებლად, ხოლო ფლუორესცეინით მონიშნული მეორადი ანტისხეული ემატება აპკის გარეცხვის შემდეგ. მეორე ანტისხეულის პირველად ანტისხეულთან შეკავშირებით, სამიზნე ცილა შეიძლება დაკვირვებული იყოს სუბსტრატის ფერის განვითარებით და ქემილუმინესცენციით. ის ზოგადად გამოიყენება იმის დასადგენად, ექსპრესირდება თუ არა კონკრეტული ცილა ნიმუშში და მისი ექსპრესიის დონის უხეშად ანალიზისთვის.

ცილა-ცილის ურთიერთქმედების მეთოდის შედარება

ცილის ამოვარდნის ანალიზები Co-IP ანალიზების მსგავსია, რომლებიც ორივე ცილის ურთიერთქმედების აღმოჩენის ექსპერიმენტებს მიეკუთვნება. ორ მეთოდს შორის განსხვავება ისაა, რომ Co-IP ანალიზები იღებენ ცნობილი ცილების ურთიერთქმედების მქონე ცილებს, რომლებსაც გარკვეული ავთენტურობა აქვთ, მაგრამ ვერ ადასტურებენ, ურთიერთქმედებენ თუ არა ურთიერთქმედების მქონე ცილები პირდაპირ თუ ირიბად. ამოვარდნის ანალიზები მიზნად ისახავს უცნობი ცილის ცნობილ ცილასთან ურთიერთქმედების დადგენას. მას შეუძლია პირდაპირ დაადასტუროს, ურთიერთქმედებს თუ არა ცნობილი ცილა აღმოჩენილ ცილასთან, მაგრამ არ იცის შეკავშირების სიტუაცია in vivo.

კო-იმუნოპრეციპიტაციის ტექნოლოგია გამოიყენება ორ ან მეტ ცილას შორის ურთიერთქმედების ანალიზისთვის, იმუნოპრეციპიტაციის ექსპერიმენტების საფუძველზე. ცილების ურთიერთქმედების ანალიზის სხვა ექსპერიმენტულ ტექნიკასთან შედარებით (GST Pull-down, Western Blot, ქრომატინის იმუნოპრეციპიტაციის ანალიზი და ა.შ.), Co-IP ტექნოლოგიას აქვს უფრო მაღალი სპეციფიკურობა, მგრძნობელობა და მაღალი განმეორებადობა, რაც თავიდან აიცილებს არასპეციფიკური შეკავშირების ჩარევას და ასახავს ცილების ურთიერთქმედებას ბუნებრივ მდგომარეობაში.

	GST ჩამოწიეთ	თანა-ინდივიდუალური ინტელექტი	მსოფლიო ბანკი
უპირატესობა	* მარტივი მართვა *გამოდგება სხვადასხვა ცილების გასაწმენდად	in vivo ურთიერთქმედების ანალიზისთვის მისი იდენტიფიცირება შესაძლებელია ქვედა დინების ცილით	ძლიერი სპეციფიკურობა თვისებრივი და რაოდენობრივი in vitro
შეზღუდვა	შესაძლოა არასპეციფიკური შეკავშირება საჭიროა ურთიერთქმედების შემდგომი დადასტურება	ანტისხეულებზე ძლიერი დამოკიდებულება შეიძლება მოხდეს არასპეციფიკური შეკავშირება	დროის მომთხოვნი რთულია ფართომასშტაბიანი ცილის ანალიზისთვის გამოყენება
განაცხადის მაგალითი	* ურთიერთქმედებების იდენტიფიცირება *გაწმენდილი ცილოვანი კომპლექსი	სიგნალის ტრანსდუქციის შესწავლა დაავადების მექანიზმი	ცილა-ცილის, ცილა-დნმ-ის და ცილა-რნმ-ის ურთიერთქმედების შემდგომი ანალიზი