საფუარის ზედაპირის ჩვენების ბიბლიოთეკის სკრინინგის სერვისი

ჩვენი საფუარის ჩვენების ბიბლიოთეკებს აქვთ დიდი ტევადობა და მაღალი მრავალფეროვნება, რაც უზრუნველყოფს მაღალ საფუძველს სპეციფიკური ანტისხეულების თანმიმდევრობების ეფექტური სკრინინგისთვის.

დაგვიკავშირდით

საფუარის ზედაპირის ჩვენების ბიბლიოთეკის სკრინინგის სერვისი

„ალფა ლაიფტეკი“ სპეციალიზირებულია საფუარის დისპლეის ბიბლიოთეკის შექმნაში და ანტისხეულების ბიბლიოთეკების სკრინინგში, რაც მსოფლიოს მასშტაბით კლიენტებისთვის საფუარის ბიბლიოთეკების სხვადასხვა ფორმის გენერირებისა და მათი მაღალი აფინურობისა და სპეციფიკური ანტისხეულების სკრინინგის შესაძლებლობას სთავაზობს. ექსპერტ მკვლევართა გუნდის, მოწინავე ტექნოლოგიებისა და აღჭურვილობის დახმარებით, ჩვენ შეგვიძლია შევქმნათ საფუარის ბიბლიოთეკები, რომლებიც დაავადებასთან დაკავშირებული ცილების ფართო სპექტრს ისახავს მიზნად. ჩვენ შეგვიძლია შემოგთავაზოთ ფაგებისა და საფუარის დისპლეის ტექნოლოგიები, მათ შორის ცილის საფუარის დისპლეი, მცირე მოლეკულური საფუარის დისპლეი, ანტისხეულების საფუარის დისპლეი და ა.შ.

ჩვენი საფუარის დისპლეის ბიბლიოთეკები გამოირჩევა დიდი ტევადობითა და მრავალფეროვნებით, რაც უზრუნველყოფს სპეციფიკური ანტისხეულების თანმიმდევრობების ეფექტური სკრინინგის მაღალ საფუძველს. თქვენი საჭიროებების შესაბამისად, ჩვენ შეგვიძლია შევქმნათ ანტისხეულების, საფუარის დისპლეის ბიბლიოთეკების სხვადასხვა ფორმა (IgG, scFv, VHH, Fab ანტისხეულების ბიბლიოთეკები), ცილების ბიბლიოთეკები, პეპტიდების ბიბლიოთეკები, cDNA ბიბლიოთეკები და ა.შ. გარდა ამისა, ჩვენ ასევე შეგვიძლია შევქმნათ სხვადასხვა თვისებების ანტისხეულების ბიბლიოთეკები, მათ შორის იმუნური ბიბლიოთეკები, ბუნებრივი ბიბლიოთეკები, სინთეზური ბიბლიოთეკები, ნახევრად სინთეზური ბიბლიოთეკები და დაავადების ანტისხეულების ბიბლიოთეკები.

შესავალი საფუარის ჩვენების სისტემაში

საფუარის ზედაპირის ჩვენების ტექნოლოგია არის რეკომბინანტული ცილების გენების შერწყმის გზით საფუარის ზედაპირზე ჩვენების მეთოდი. საფუარის ჩვენების ყველაზე გავრცელებული სისტემა იყენებს სამიზნე ცილას, რომელიც შერწყმულია ალფა ლექტინის შეჯვარების ცილის Aga2p ქვეერთეულის C-ბოლოსთან, ძირითადად შედგება სამიზნე ცილის ორივე მხარეს ეპიტოპური ნიშნულებისგან: N-ტერმინალური 9-ამინომჟავა ჰემაგლუტინინის (HA) ნიშნული და C-ტერმინალური 10 ამინომჟავა c-myc ნიშნული. 69 ამინომჟავა Aga2p ქვეერთეული უკავშირდება 725 ამინომჟავა ალფა ლექტინის Aga1p ქვეერთეულს ორი დისულფიდური ბმის საშუალებით, ხოლო Aga1p მიმაგრებულია უჯრედის კედელზე β 1,6-გლუკანის კოვალენტური ბმის საშუალებით. ამრიგად, სამიზნე ცილა ნაჩვენებია საფუარის უჯრედების ზედაპირზე და შემდგომში ამოიცნობა შესაბამისი ლიგანდის მიერ. გამოყავით ფუნქციური ცილები ბიბლიოთეკებიდან ნაკადური ციტომეტრიის სკრინინგის საშუალებით.

სურ. 1: საფუარის ზედაპირის ჩვენების პრინციპი. (სურათის წყარო: საფუარის ზედაპირული ჩვენების გამოყენება ცილის ინჟინერიისთვის.)

შესავალი საფუარის ზედაპირის ჩვენების ბიბლიოთეკაში

საფუარის დისპლეის დახარისხება ეფუძნება საფუარის ზედაპირის დისპლეის მეთოდს და ძირითადად გამოიყენება უჯრედის ზედაპირის ცილებზე ორიენტირებული ანტისხეულების ბიბლიოთეკების სკრინინგისთვის. საფუარის უჯრედებსა და სხვა უჯრედის ზედაპირებს შორის დაბალი არასპეციფიკური შეკავშირების გამო, საფუარის ბიოლოგიურ სელექციას შეუძლია დიდი შეკავშირების ბიბლიოთეკების სკრინინგი იშვიათი კლონების მოსაძებნად.

საფუარის ზედაპირის ჩვენების ბიბლიოთეკის სკრინინგის სერვისი

მოამზადეთ პლაზმიდები და კულტივირება გაუკეთეთ საფუარის უჯრედებს, სინთეზირეთ სამიზნე ცილის კოდირების დნმ და კლონირეთ იგი საფუარის ექსპრესიის ვექტორად, რომელიც შეიცავს ინდუცირებად პრომოტერებს, სიგნალის პეპტიდებს და სამიზნე გენებს, რომლებიც შერწყმულია ზედაპირული ჩვენების ცილებთან (მაგალითად, Aga2p). სამიზნე ცილის კოდირების გენი შეიძლება შერწყმული იყოს საფუარის უჯრედის კედლის ცილის კოდირების გენთან (ჩვეულებრივ, Aga2p) და შერწყმული გენი შეიძლება გარდაიქმნას საფუარის უჯრედებად ელექტროპორაციის გზით. ტრანსფორმაციის შემდეგ, საფუარის უჯრედებს, რომლებიც გამოხატავენ ანტისხეულების გენებს მათ ზედაპირზე, შეუძლიათ გაიარონ ანტიგენ-სპეციფიკური სკრინინგის ტესტები: საფუარის ბიბლიოთეკა ინკუბირებულია სამიზნე ანტიგენთან და შეირჩევა საფუარის უჯრედები, რომლებიც სპეციფიკურად უკავშირდება მას. სასურველი მახასიათებლების მქონე ცილების მქონე საფუარის უჯრედების იზოლირებისთვის ფლუორესცენციულად გააქტიურებული უჯრედების დახარისხების (FACS) გამოყენებით, საფუარის ჩვენების ბიბლიოთეკის სკრინინგი შეიძლება ჩატარდეს ბიბლიოთეკის მაქსიმალური ზომით ~10^8-10^9 საფუარის უჯრედებით. შემდეგ შესაძლებელია დადებითი კლონების იზოლირება შემდგომი ანალიზისთვის ან შემდგომი გამოყენებისთვის. მას შემდეგ, რაც ანტისხეულების ბიბლიოთეკიდან იდენტიფიცირდება სპეციფიკური ანტისხეულების კლონები, მათი შემდგომი დახასიათება და მასობრივი წარმოება შესაძლებელია, ასევე გაწმენდის მეთოდების გამოყენებით, როგორიცაა ცილის A/G აფინური ქრომატოგრაფია, რათა დასრულდეს საფუარის ჩვენების სკრინინგის და ანტისხეულების წარმოების მთელი პროცესი.

საფუარის ჩვენების ბიბლიოთეკის სკრინინგის პროცესი

სურ. 2 საფუარის ჩვენების ბიბლიოთეკის სკრინინგის პროცესი

საფუარის ჩვენების ბიბლიოთეკის სკრინინგის სერვისის სამუშაო პროცესი

ნაბიჯები	სერვისის შინაარსი	ქრონოლოგია
ანტიგენის მომზადება	ანტიგენის ტიპი: თუ მომხმარებელს შეუძლია ანტიგენების მიწოდება, შესაბამისი ნიმუშები უნდა მიეწოდოს ტიპის მიხედვით: რეკომბინანტული ცილები საჭიროებენ 3-3.5 მგ-ს 85%-ზე მეტი სისუფთავის მოთხოვნით, მცირე მოლეკულები უნდა იყოს კონიუგირებული 90%-ზე მეტი სისუფთავის მოთხოვნით, პეპტიდების სინთეზი უნდა იყოს კონიუგირებული 90%-ზე მეტი სისუფთავის მოთხოვნით, ნიმუშების ტიპები, როგორიცაა ვირუსები, უნდა იყოს ინაქტივირებული, რნმ უნდა შემოწმდეს დეგრადაციის თავიდან ასაცილებლად და ზემოთ ჩამოთვლილი ანტიგენების ტიპები ასევე შეიძლება მორგებული იყოს სინთეზისთვის.	2-3 კვირა
ცხოველთა იმუნიტეტი	ცხოველებში იმუნიზაციის რაოდენობა 5-ია და აუცილებელია შრატის ტიტრის ტესტირების საფუძველზე დადგინდეს, უნდა გაიზარდოს თუ არა იმუნიზაციის რაოდენობა. ანტიგენური იმუნიტეტი: ცილის/ვირუსის ანტიგენის პოტენცია >105; პეპტიდის/მცირე მოლეკულის ანტიგენის პოტენცია >10^4	5-6 კვირა
შაბლონის cDNA მომზადება	გამოაცალკევეთ პლაზმის PBMC-ები, ამოიღეთ საერთო რნმ (რნმ ექსტრაქციის ნაკრები) და უკუაგდეთ cDNA-მდე.	1 დღე
ბიბლიოთეკის მშენებლობა	ბიბლიოთეკის cDNA-ს, როგორც შაბლონის გამოყენებით, VHH გენი ამპლიფიცირებული იქნა PCR-ის ორი რაუნდით და აგებული იქნა VHH გენის სპლაისინგის საფუარის დისპლეის ვექტორი. ვექტორი ტრანსფორმირებული იქნა საფუარის უჯრედებად ელექტროპორაციის გზით ანტისხეულების ბიბლიოთეკის შესაქმნელად. შემთხვევითი შერჩევის პრინციპით შეირჩა 48 კლონი და დადგინდა დადებითი მაჩვენებელი (>90%) PCR მეთოდის გამოყენებით; გამოითვალა ბიბლიოთეკის ტევადობა (10^7-10^8), NGS სეკვენირება ბიბლიოთეკის ჩასმის სწორი სიჩქარის (>90%) და ბიბლიოთეკის მრავალფეროვნების დასადგენად.	2 კვირა
ბიბლიოთეკის ჩვენება	სკრინინგის სამი სტანდარტული რაუნდი: ფლუორესცენციულად მონიშნული ცილის FACS სკრინინგი, რასაც მოჰყვა NGS სეკვენირება მესამე რაუნდში. დადებითი კლონები შეირჩა ერთი გრამის ინდუქციური ექსპრესიისა და ELISA დეტექციისთვის. ყველა დადებითი კლონი შეირჩა გენის სეკვენირებისთვის და შეირჩა სხვადასხვა CDR რეგიონის თანმიმდევრობები.	2-3 კვირა
ანტისხეულების ვერიფიკაცია	ანტისხეულების თანმიმდევრობებისთვის შესაბამისი ექსპრესიის ვექტორების აგებამ შეიძლება ხელი შეუწყოს ანტისხეულების ექსპრესიას, ანტისხეულების გაწმენდას, ანტისხეულების ანტიგენთან შეკავშირების ELISA და BLI ვალიდაციას ანტისხეულების აფინურობის დასადასტურებლად და ნაკადური ციტომეტრიის ბლოკადას უჯრედის ფუნქციის დასადასტურებლად.	1 კვირა

საფუარის ზედაპირის ჩვენების ბიბლიოთეკის სკრინინგი

კონფორმაციულად სელექციური ნანოსხეულების სწრაფი აღმოჩენისთვის საფუარის ზედაპირის ჩვენების პლატფორმის შესახებ ლიტერატურაში ავტორებმა შექმნეს საფუარის ზედაპირის ჩვენების საფუძველზე შექმნილი სრული in vitro ნანოსხეულების აღმოჩენის პლატფორმა. პირველ რიგში, აქლემის გენებიდან დაწყებული შეიქმნა სინთეზური ნანოსხეულების ბიბლიოთეკა. სურათი D გვიჩვენებს, რომ ნანოსხეულს აქვს HA ტეგი კარბოქსილის ბოლოში, შემდეგ კი ნანოსხეული კოვალენტურად ფიქსირდება საფუარის უჯრედის კედელზე. სურათი E გვიჩვენებს ნანოსხეულების სკრინინგის პროცესს. ანტიგენური აფინურობის მქონე ნანოსხეულები იზოლირებული, ამპლიფიცირებული და განმეორებით შერჩეული იქნა ანტისხეულებისთვის FACS-ის მეშვეობით. ავტორებმა ამ პლატფორმის მეშვეობით აღმოაჩინეს კონფორმაციული სელექციური ნანოსხეულები, რომლებიც მიზნად ისახავენ ორ სხვადასხვა ადამიანის GPCR-ს.