Жануарларды иммундау платформасы

Жануарларды иммундау платформасы негізінен түйе тұқымдас жануарларды (альпака лиама және түйелер) иммундайды, бұл нанодене өндірісінің негізін қалайды.

Баға сұрау

Жануарларды иммундау платформасы

Alpha Lifetech компаниясының жануарлар көздері анық, тексеру және карантиндік рұқсаттары, айқын генетикалық негіздері, айқын иммундау жиілігі және иммундау аралықтарының егжей-тегжейлі жазбалары бар, бұл антиденелерді өндіруге ыңғайлы қызметтерді ұсынады. Ол негізінен түйе тұқымдас жануарларды (альпака лиама және түйелер) иммундайды, бұл наноденелерді өндірудің негізін қалайды. Сонымен қатар, ол қарапайым жануарларды (мысалы, Жаңа Зеландия ақ қояндары, тышқандар және басқа да жануарлар) тұтынушылардың қажетті иммундау жиілігі мен иммуногенділік талаптарына сәйкес иммундай алады, оларды PBMC-ге бөліп алып, оқшаулай алады және оларды кейінгі тәжірибелер үшін (мысалы, моноклоналды антидене, поликлоналды антиденелерді әзірлеу және т.б.) пайдалана алады. Тұтынушылар өздерінің иммуногендерін ұсына алады, ал біз оларға қатаң сапа бақылауын жүргіземіз. Егер тұтынушылар вирустық иммуногендерді ұсынса, оларды инактивтеу қажет, ал біз қауіпсіздікті қамтамасыз ету үшін инактивациялық тестілеу жүргіземіз. Сонымен қатар, біз тұтынушылардың қажеттіліктеріне сәйкес тиісті иммуногендерді де реттей аламыз.

Жануарларды иммундауға кіріспе

Моноклоналды антиденелер, поликлоналды антиденелер және наноденелер сияқты жануарлардан алынатын антиденелерді өндіру кезінде бірінші қадам - жануарларды иммундау және антиденелерді одан әрі өндіруге дайындалу, негізгі ғылыми зерттеулерді ілгерілету, клиникалық диагностикалық құралдарды әзірлеу және жаңа дәрілерді ашу мен әзірлеуді жеңілдету үшін тиісті В жасушаларын, антиденелерді немесе ПБМК алу. Camelidae тұқымдас түйелер, альпакалар, лиама және басқа түйелер иммундық қан жинау және ПБМК экстракциясы арқылы наноденелер (бір домендік антидене) кітапханаларын өндіре алады. Қояндар мен басқа жануарларды иммундауға және олардың денелерінен антиденелерді алуға болады. Тазартылғаннан кейін оларды поликлоналды антиденелерді өндіру үшін пайдалануға болады. Тышқандар, егеуқұйрықтар және т.б. иммундық экстракцияланған В жасушаларын миелома жасушаларымен біріктіру арқылы моноклоналды антиденелерді өндіру үшін пайдаланылуы мүмкін. Иммундау алдында 3R принциптеріне (алмастыру, азайту, жетілдіру) назар аудару керек, бұл пайдаланылатын жануарлар санын қажетті минимумға дейін айтарлықтай азайта алады, эксперименттік процедураларды жақсартады және жануарлардың азап шегуін азайтады. Тиісті эксперименттік дизайн, тиісті антиденелерді таңдау және қатаң валидация процедуралары да сақталуы керек.

Иммуногендердің жіктелуі - наноденелер өндірісі

Иммуногендердің түрлері	Мысал	Иммуногенді дайындау	Ескертпелер
Ақуыз иммуногендері	Ферменттер, ақуыздар, бактериялық токсиндер және басқа заттар	Әртүрлі ақуыз экспрессия жүйелерін таңдаңыз: E. coli, ашытқы, жәндік жасушалары, сүтқоректілер жасушалары және жасушасыз жүйе	Ақуыз экспрессиясына әсер ететін температура, уақыт, рН және инклюзивті денелер сияқты факторларға назар аударыңыз
Нуклеин қышқылының иммуногендері	ДНҚ, РНҚ	ДНҚ иммуногені: Плазмидалық ДНҚ-ны құрастырыңыз, нысана гендер үшін қолайлы экспрессия векторларын клондаңыз, плазмидалық ДНҚ-ны күшейту үшін дақыл жасушаларын жасаңыз және жоғары тазалықтағы плазмидалық ДНҚ-ны бөліп алыңыз РНҚ иммуногені: ыдыраудың алдын алу үшін қалпақ құрылымын және PolyA құйрығын қосу қажет	ДНҚ иммуногендерін дайындаған кезде тиісті иесінің жасушаларына назар аудару керек, ал РНҚ иммуногендерін дайындаған кезде РНҚ ыдырауының алдын алуға назар аудару керек.
Вирустық иммуногенез	Тұтас вирустық инактивтелген вакцина, суббірлік вакцина, вирустық векторлық вакцина (аденовирус, лентивирус және т.б.), mRAN вакцинасы.	Вирусты толық инактивтендіретін вакцинаны дайындаған кезде, қауіпсіздікті арттыру үшін алдымен вирус инактивтендіріледі. Инактивтеудің аяқталғанын анықтау үшін уыттылық сынағы қолданылады. Суббірлік вакциналар антиген ретінде тек вирус бетінің ақуыздарын қажет етеді және иммундық тиімділікті ескеруі керек.	Иммундық әсерді қамтамасыз ету үшін адъюванттарды қосу қажет, белсенділігін жою қажет вирусқа назар аудару керек, иммундық әсерді қамтамасыз ету үшін тиісті вирус титрлері қажет және дайындау процесінің қауіпсіздігі қатаң бақылануы керек.

Жануарларды иммундау процесі немесе уақыт шкаласы

Жануарларды таңдау және антигенді дайындау

Жануарларды іріктеу: Дені сау топтардан жасы мен дене бітімі дұрыс альпакаларды таңдап, жұқпалы аурулардың немесе басқа денсаулыққа қатысты мәселелердің жоқтығына көз жеткізу үшін қан анализі мен ауруларды тексеруден өткізіңіз.

Иммуногенді дайындау: Иммуногендер иммундық реакцияларды индукциялаудың кілті болып табылады және мақсатты антидененің талаптарына негізделген тиісті ақуыздарды, пептидтерді немесе басқа да қолайлы заттарды таңдауды талап етеді.

Альпаканы бір мезгілде 1-3 антигенмен иммундауға болады, жалпы антиген мөлшері бір иммундау кезінде 1-2 мг, ал көлемі 2 мл-ден аз болады. Иммундау алдында антиген мен адъювант біркелкі қоспа түзу үшін 1:1 қатынасында эмульсияланады, ол 4 ℃ температурада сақталады.

Иммунологиялық альпака

Бос альпака құлағының нөмірін жазып, иммундау экспериментін бастаңыз. Альпаканың мойнына жақын лимфа түйіндеріне екі жағынан да, әр жағына 2 нүктеден және әр нүктеге шамамен 0,4 мл эмульсияланған антиген енгізіңіз. Иммундаудан кейін альпакада ыңғайсыздық белгілері жоқ екеніне көз жеткізу үшін жарты сағат бойы бақылаңыз. Иммундау әр 2 апта сайын, кемінде 4 рет иммундау арқылы жүргізілуі керек.

Қан жинау

5-7 күн бойы 4 рет иммундағаннан кейін, альпаканың мойын венасынан 50 мл қан жинаңыз.

Сарысу бөлінуі

Әрбір антигенмен иммундау алдында иммундық бағалау үшін қан үлгілері жиналады, әр жолы 5 мл қан алынады; Сол күні қан алдын ала салқындатылған 25 ℃ центрифуганы пайдаланып 400 xg жылдамдықпен 30 минут бойы центрифугаланды. Сарысудың жоғарғы қабаты бөлініп, кейінгі антидене титрін тексеру үшін сақталды.

Бөлек лимфоциттер

Алдымен 15 мл жасуша бөлу ерітіндісін қосыңыз, содан кейін 50 мл центрифуга түтігіне 15 мл қанды баяу қосыңыз. Қан мен бөлу ерітіндісінің араласып кетуіне жол бермеу үшін қан қосқан кезде абай болыңыз және баяу болыңыз. Центрифуганы 25 ℃ температурада алдын ала суытыңыз, 400 x g температурада 30 минут центрифугалаңыз және жоғарғы сарысуды жаңа центрифуга түтігінде -80 ℃ температурада сақтаңыз; Ортаңғы мақта пішінді жоғарғы қабат иммундық жасушаларын жаңа 50 мл центрифуга түтігіне сорып алу үшін пипетка пайдаланыңыз. Әр түтікке бөлме температурасында 10 мл PBS буферін қосыңыз, 25 ℃ және 400 x g температурада 20 минут центрифугалаңыз. Супернатантты алып тастаңыз, әр түтікке бөлме температурасында 5 мл PBS буферін қосыңыз, жақсылап араластырыңыз, гемоцитометрді пайдаланып жасушалар санын есептеңіз, содан кейін 25 ℃ және 400 x g температурада 20 минут центрифугалаңыз. -80 ℃ температурада сақталатын 10 ^ 7/мл жасуша лизатын алу үшін жасушалар санына негізделген RNAiso Plus арқылы алынған үстіңгі қабатты алып тастап, лимфоциттерді ерітіңіз.

1-сурет: Әртүрлі антиденелерді анықтау стратегияларының және оған қатысатын тәжірибелік кезеңдердің схемалық көрінісі. (Сурет көзі: Лаустсен, Андреас Х. және т.б.)

Тұтынушылар иммуногендерге қатаң сапа бақылауын қамтамасыз етеді

Иммуногендердің түрлері	Талап	Сапаны бақылау әдісі
Пептид / шағын молекулалық үлгілер	Еріту шарттары (негізінен фагтарды инактивтендіретініне байланысты), молекулалық құрылым/пептидтік тізбек, синтез есебі (HPLC/MS/HNMR)	HPLC/MS анықтау
Ақуыз үлгілері	SDS-PAGE/WB, қалпына келтіру шарттары, буфер, заттаңба туралы ақпарат, жалпы мөлшері (20-50 мкг), концентрациясы, тазалығы және т.б.	SDS-PAGE/WB
Жасуша үлгілері	Жасуша түрі (бастапқы жасушалар/генді редакцияланған жасушалар), жасуша формасы (жаңа/мұздатылған еріген), өсу түрі (адгезияланған/суспензияланған), өсіру ортасына қойылатын талаптар, берілген жасушалар саны, берілген жасушалар саны, скринингтік нысаналардың тұрақты экспрессиясын қамтамасыз ету үшін генді редакцияланған жасушалар (тұтынушыға сәйкес келетін бастапқы антидене), қалпына келу жылдамдығын анықтау үшін мұздатылған еріген жасушалар	Негізінен генді редакцияланған жасушаларды нысанаға алу, мақсатты экспрессияны ELISA арқылы анықтау үшін тұтынушы ұсынған бастапқы антиденелерді пайдалану (біздің компания HRP екінші реттік антиденелерін ұсынады), ағынды цитометрияны анықтау (біздің компания флуоресцентті екінші реттік антиденелерді ұсына алады).

Жануарлардың иммунитетін қолдану қандай?

+

Поликлоналды антиденелер жануарларды иммундау арқылы өндірілуі мүмкін, моноклоналды антиденелер В жасушаларын миелома жасушаларымен біріктіру арқылы өндірілуі мүмкін, ал ПБМК-ларды түйе көздерінен (альпака, түйе, альпака және т.б.) бөліп алып, наноденелер, Fab фрагменттері, scFv антидене фрагменттері сияқты әртүрлі антидене фрагменттерінің формаларын алуға болады.
Жануарлардың иммунитетін сақтау үшін қандай сақтық шаралары бар?

+

Түйе тұқымдас жануарларға наноантиденелерді алу үшін 5-6 иммундау қажет. Иммундау алдында бақылау ретінде қан үлгілері алынуы керек, әр иммундау арасында 2 апта үзіліс болуы керек. Төртінші иммундаудан кейін титрді анықтау үшін ELISA арқылы оң қан және иммундалмаған теріс қан алынуы керек. Егер титр 10 ^ 6-дан төмен болса, иммундау саны титр тиісті деңгейге жеткенше көбейтілуі керек. Қоян иммундау (қоян иммундау үшін оңтайлы немесе жалпы ақуыз антигенінің деңгейі 50-1000 мкг), тышқан иммундау (тышқан иммундау үшін оңтайлы немесе жалпы ақуыз антигенінің деңгейі 5-50 мкг, егер ол жасуша болса, 10 ^ 6 жасуша және нуклеин қышқылы немесе көмірсулар үшін 10-50 мкг қажет), ешкі иммундау (ешкі иммундау үшін оңтайлы немесе жалпы ақуыз антигенінің деңгейі 250-5000 мкг) және т.б. сияқты басқа жануарларға иммуногендер үшін иммуногендердің мөлшеріне, қауіпсіздігіне және тиімділігіне назар аудару керек.
Иммунитеті жоғары жануарларды қалай таңдауға болады?

+

Тапсырыс берушіге қажетті антидене түріне байланысты, егер сізге наноденелер немесе басқа антидене фрагменттерін өндіру қажет болса, иммундау үшін түйеден алынған жануарларды (түйелер, альпакалар, альпакалар) таңдай аласыз. Егер сізге моноклоналды немесе поликлоналды антиденелер өндіру қажет болса, сарысу, антиген және антиген көзінің мөлшеріне негізделген тиісті түрді таңдауыңыз керек. Қояндар үшін сарысудың максималды мөлшері 500 мл құрайды, бұл антигеннің аз мөлшерін қажет етеді және поликлоналды антиденелерді өндіру үшін негізгі таңдау болып табылады. Тышқандар үшін сарысудың максималды мөлшері 2 мл, ал егеуқұйрықтар үшін сарысудың максималды мөлшері 20 мл құрайды, бұл әдетте моноклоналды антиденелер үшін оңтайлы таңдау болып табылады. Ешкіден өндірілген антиденелердің аффинділігі жоғары, және Alpha Lifetech сіздің талаптарыңызға сәйкес сіз үшін эксклюзивті иммундау жоспарын жасай алады.
Антигендерді адъюванттармен бірге қолдану қажет пе? Қалай таңдау керек?

+

Адъюванттардың екі түрі бар: май негізіндегі және су негізіндегі. Адъюванттарды орынды қолдану еритін антигендерге күшті антидене реакциясын тудыру үшін өте маңызды. Адъюванттардың ұзақ уақыт бойы босатылуы антигендердің аз дозаларын қолдануға болатынын және антидене реакцияларының ұзаққа созылатынын білдіреді. Алғашқы инъекцияны адъювантпен бірге қолдану керек. Әдетте, иммуноген мөлшері аз болған кезде Фрейнд адъюванттарын қолдану ұсынылады.
Альпаканы иммундау кезіндегі сақтық шаралары?

+

(1) Альпака мен иммунитет антигенін таңдау сәтті иммундаудың кілті болып табылады. Дұрыс пропорцияланған түйені таңдау ұсынылмайды. Иммундық антигендердің тазалығы мен дұрыс конформациясы альпакамен иммундаудан кейін келесі қолдану үшін қолайлы антиденелерді скринингтеу үшін өте маңызды. Ақуыз антигендерінің тазалығы әдетте 90%-дан кем емес.

(2) Лимфоциттерді бөлу: Жасушаларды уақтылы бөлу қан жинаудан кейін гемолиздің алдын алып, ең жақсы бөлу әсеріне қол жеткізе алады.

(3) Иммундық цикл иммундық жауапқа әсер етуі мүмкін: 1-2 апталық иммундық интервал альпакалардың көптеген антигендерге жақсы иммундық жауап беруіне мүмкіндік береді.

тәуелсіз дамыған адъювант

Біздің бірегей формуламыз альпаканың иммундық жүйесі үшін оңтайландырылған, дәстүрлі адъюванттарға қарағанда жоғары тиімділік пен ерекшелік береді.

Иммундау
стандартты

Біз иммундауды көрсетілген мерзімде аяқтауға, жоғары титрлі сарысумен қамтамасыз етуге және әрбір қадамды егжей-тегжейлі есептер арқылы жазып алуға уәде береміз.

жоба сапасын бақылау

Әрбір жоба тұтынушыларға жоғары стандарттарға сай келетін антиденелерді жеткізуді қамтамасыз ету үшін қатаң сапаны бақылау процестерінен өтеді.

анықАльпакаФон

Бізде әртүрлі иммундау бағдарламаларын қолдайтын сау альпака популяциясы бар.

Егер сізде қандай да бір сұрақтар туындаса, кез келген уақытта бізбен хабарласудан тартынбаңыз.

Leave Your Message

Таңдаулы қызмет

0102