Антиденелерді анықтау платформасы

Alpha Lifetech компаниясы келесі қызметтерді ұсына алады: VHH антиденелерін анықтау, scFv антиденелерін анықтау, Fab антиденелерін анықтау, фаг кітапханасын құру қызметі және басқа да қызметтер

БІЗБЕН ХАБАРЛАСЫҢЫ

Фаг дисплей қызметіне кіріспе

Фагтық дисплей, фаг ДНҚ-ның генетикалық модификациясына негізделген молекулалық әдіс ретінде, белгілі бір нысаналарға қарсы молекулалық зондтарды жасаудың молекулалық тұрғыдан қуатты құралына айналды, бұл фрагменттерді фаг бетінде көрсету және осылайша көптеген нұсқалардан (кітапханалардан) белгілі бір байланыстыру қасиеттері бар пептидтік/антидене фрагменттерін таңдау арқылы жүзеге асырылады.

Alpha Lifetech компаниясы фаг дисплей антиденелерін әзірлеуде он жылдық тәжірибеге ие және клиенттерімізге кәсіби антидене кітапханасын құру және скринингтік қызмет көрсете алады. Клиенттердің қажеттіліктеріне сәйкес, біз иммундық кітапханалар, табиғи кітапханалар, синтетикалық кітапханалар және жартылай синтетикалық кітапханалар сияқты антидене кітапханаларының әртүрлі түрлерін ұсына аламыз. Антидене гендерін M13 сияқты фаг қабығы ақуыздарының гендерімен біріктіретін фаг дисплей кітапханасы технологиясы ең көп таралған рекомбинантты антиденелерді дайындау технологиясы болып табылады және жоғары спецификалық антиденелерді әзірлеуде кеңінен қолданылады.

Alpha Lifetech альпаканы, ламаны, альпаканы және акулаларды және т.б. иммундайды, осылайша олардың тиімділігі 10^5-ке жетеді. Деректердің жарамдылығы мен түпнұсқалығын қамтамасыз ету үшін біз тиімділік сынағының есебін тапсырыс берушіге жібереміз. Жергілікті кітапханалардың уыттылығы төмен және иммуногенділігі төмен артықшылықтары бар. Alpha Lifetech компаниясы жануарларды иммундамай-ақ антиденелерді скринингтеу үшін тікелей пайдалануға болатын көптеген дайын жергілікті антидене кітапханаларына ие, осылайша жобаның уақытын қысқартады, тапсырыс берушінің сынағының барысын жеделдетеді және антидененің функционалдық тұтастығын кепілдейді.

1-сурет: Фаг дисплей принципі

Біздің Phage дисплей жүйеміз

M13/T4/T7 фаг дисплей жүйесінің негізгі ақпараты 1-кестеде көрсетілген.

1-кесте. Фаг дисплейлерінің әртүрлі көліктері және олардың сипаттамалары.
	M13	T4	T7
Геном өлшемі	6407 б.п.	168895 б.п.	39937 б.п.
Дисплей ақуызы	pVI, pIII және pVIII	SOC және HOC	gp10B
Дисплей өлшемі	>110 кДа - pIII
Дисплей өлшемі
Дисплей тығыздығы	pIII бетінде	SOC сайтында
Дисплей тығыздығы	VIII бетте	HOC-та
Өмірлік цикл	Лизогения	Литикалық	Литикалық

Alpha Lfetech қамтамасыз ете алады

Phage Display генотип пен фенотипті біріктіреді, селективтілік пен күшейтуді қуатты скрининг мүмкіндіктерімен біріктіреді. Alpha Lifetech фаг дисплей антиденелерін әзірлеу бойынша кең ауқымды қызметтерді ұсына алады.
Негізгі қызметтерге мыналар кіреді: VHH антидене кітапханасы платформасы, scFv антидене кітапханасы платформасы, Fab антидене кітапханасы платформасы, фаг кітапханасын құру платформасы, фаг кітапханасын скринингтеу платформасы және антиденелерді ізгілендіру қызметі және басқа да қызметтер.

2-сурет: Фаг дисплейін әзірлеу қызметі процесі

Фаг-дисплей антиденелерін дамыту процесі

Біз жануарларды зертханамызда экспрессияланған немесе клиенттеріміз жеткізетін ақуыздармен, соның ішінде әртүрлі макромолекулалық ақуыздармен, пептидтермен және мембраналық ақуыздармен иммундай аламыз. ELISA тиімділігін тексеру арқылы зерттеушілеріміз ең жақсы иммундау нәтижелерімен альпакалардың қанынан PBMC оқшаулауын және РНҚ экстракциясын жүргізді. Кері транскрипция және генді күшейту арқылы біз генді pMESC, pComb3XSS немесе pCANTAB 5E фаг векторларына құрастырдық. TG1 E. coli құзыретті жасушаларын электротрансформациялау арқылы кітапхана сыйымдылығы 10^9-дан асатын фаг антидене кітапханаларын алуға болады. Кітапхана сыйымдылығы үлкен антиденелер кітапханалары жақсы әртүрлілікке ие және аффинділігі бар антиденелерді табуға көмектеседі. Антиденелер кітапханасының сапасын қамтамасыз ету үшін біз кітапхана сыйымдылығы мен кітапхананың енгізу жылдамдығын сипаттаймыз. Ақырында, біз клиенттерімізге қажетті 30-50 тізбекті қамтамасыз ету үшін кітапханаларды тізбектейміз. Содан кейін біз фаг дисплей кітапханасын скринингтен өткіземіз. Алдымен антиген полипропилен микропластиналарында иммобилизацияланады, ал скринингтің 3-5 раунды арқылы әлсіз байланысу қабілеті бар фаг-антиденелер жойылады және антигенмен байланысатын арнайы клондар сақталады. Фаг дисплейі үшін оң клон алу үшін ELISA әдісі қолданылады, ал ашытқы дисплейі үшін FACS әдісі жасушалардың белгіленген антигендерді пайдаланып рекомбинантты антидене фрагменттерін көрсетуіне мүмкіндік береді. Скрининг арқылы біз жоғары сезімталдыққа, ерекшелікке және жоғары аффинділікке ие антиденелерді дайындаймыз.

3-сурет. Фаг дисплейіндегі антиденелерді синтездеу процесі

Қызмет көрсетудің артықшылықтары
ҚЫЗМЕТ КӨРСЕТУДІҢ артықшылықтары

Alpha Lifetech фаг дисплей технологиясына терең берілген және тұтынушыларға кеңірек және жақсырақ фаг қызметтерін ұсына алады.

Уақыт кезеңі және жоғары тиімділік

Біздің компания қысқа мерзімде қанағаттанарлық антиденелерді іздей алады; біз тұтынушылардың қажеттіліктеріне сәйкес әртүрлі антиденелерді скринингтеу эксперименттерін жүргізе аламыз.

Өнімнің жоғары сапасы

Біздің компания тұтынушыларға жоғары ерекшелік пен тұрақтылыққа ие антиденелерді дайындауға көмектеседі, бұл ғылыми зерттеулер нәтижелерінің өнімділігін арттырады.

Әртүрлі таңдауларды қамтамасыз етіңіз

Біздің компания көп түрлі (адам, тышқан, қоян, альпака және т.б.) антидене кітапханаларын және әртүрлі типтегі (scfv, Fab, VHH және т.б.) антидене кітапханаларын құра алады.

Үлкен сыйымдылық

Біздің антиденелер кітапханамыздың сыйымдылығы 10^9-дан астам антиденеден тұрады

Жиі қойылатын сұрақтар - Фаг дисплейінің жалпы мәселелері

фаг дисплейіне арналған сұрақтар ◢

С.
Фаг дисплей технологиясы дегеніміз не?

А.
Фагты дисплей технологиясы бөгде нысана генін фаг капсиді ақуызының нақты орнына енгізу және бөгде генді фагтың қалыпты қызметіне әсер етпестен фаг бетінде экспрессиялау болып табылады. Бірнеше раундтық скринингтен кейін күшті ерекшелігі мен жоғары биологиялық белсенділігі бар нысана ақуызы алынды.
С.
Фаг дисплей технологиясының артықшылықтары қандай?

А.
Бұл технологияны қолдану арқылы жоғары сыйымдылықты антидене кітапханаларын жасауға болады. Скрининг циклі қысқа, операциялық процесс қарапайым және қолдану аясы кең, бұл мақсатты пептидтер немесе ақуыздар үшін оңтайлы тізбектерді анықтауға мүмкіндік береді. Вирусқа байланысты қолданбаларда зерттеушілер үлкен антидене кітапханаларын скринингтеу арқылы маңызды вирустық эпитоптармен байланысатын антиденелерді анықтай алады. Бұл процесс вирустардың енуіне, репликациясына немесе иммундық жалтару механизмдеріне кедергі келтіруі мүмкін, осылайша ауруларды емдеуге негіз қалауы мүмкін.
С.
Гибридома технологиясы мен фаг технологиясының айырмашылығы неде?

А.
Фаг-дисплей технологиясы гибридома технологиясына қарағанда кеңінен қолданылады, ол белгілі бір иммуногендерге қарсы аз мөлшерде антиденелерді өндірумен шектеледі. Керісінше, фаг-дисплей технологиясы әртүрлі иммундық түрлерден алынған антиденелердің тұтас кітапханасын ұсына алады.
С.
Фаг дисплей технологиясының қолданылу аясы қандай?

А.
Фаг-дисплей технологиясы патогендік микроорганизмдердің рецепторларын скринингтеу, ақуыздардың өзара әрекеттесуін зерттеу, жасушалар арасындағы сигналдардың берілуін бақылау, жануарлар ауруларын диагностикалау және вакциналарды әзірлеу сияқты көптеген салаларда қолданылады.
С.
Фаг дисплей технологиясының болашағы қандай?

А.
Фаг дисплей технологиясы көптеген артықшылықтарды ұсынады және әртүрлі салаларда қолданылуы мүмкін. Дегенмен, фаг дисплей әдісін қолдана отырып, рекомбинантты антиденелерді жасаудағы негізгі қиындық - процестің күрделілігі мен құны. Бұл тәсіл қажетті антиденелерді анықтау және сипаттау үшін мутация, клондау және экспрессияны қоса алғанда, молекулалық биология әдістерін иммунологиялық, биохимиялық және биофизикалық талдаулармен бірге интеграциялауды қажет етеді.

Антигенге қатысты сұрақтар ◢

С.
Антигенді презентациялау әдістері қандай?

А.
Антиген презентациясы өте маңызды буын болып табылады. Антиген презентациясының әдістеріне негізінен тікелей қапталған антиген презентациясы, жанама қапталған антиген презентациясы, тұтас жасуша скринингі арқылы антиген презентациясы, липосомалар, нанофосфолипидті дискілер және VLP арқылы антиген презентациясы жатады.
С.
Антигеннің әртүрлі түрлерінің арасындағы айырмашылықтар қандай?

А.
Тікелей жабу әдісі салыстырмалы түрде қарапайым, бірақ антиген конформациясын өзгерту оңай, ал жанама жабу операциясы күрделі, бірақ ол антиген конформациясын сақтап, презентация тиімділігін арттыра алады. Жасуша скринингі нақты көріністі in vivo модельдей алады, бірақ спецификалық емес байланысу мәселесі бар. Нано-фосфолипидті дискінің өлшемі кіші, жеткізу тиімділігі жоғары және тұрақтылығы жақсы; VLP антигенмен біріктірілген немесе антигенмен оралған, бұл жоғары иммуногенділік пен қауіпсіздікке ие және күшті иммундық жауапты тудыруы мүмкін.
С.
Фаг дисплей технологиясының скрининг нәтижелеріне антиген концентрациясының әсері қандай?

А.
Егер концентрация тым төмен болса, фагпен байланысу ықтималдығы төмендейді, бұл скрининг тиімділігінің төмендеуіне әкеледі. Керісінше, тым жоғары концентрация спецификалық емес байланысу ықтималдығын арттыруы, фондық сигналды күшейтуі және оң клондарды анықтауға кедергі келтіруі мүмкін.
С.
Скрининг процесінде антигеннің табиғи конформациясын сақтауын қалай қамтамасыз ете аламыз?

А.
Жоғары температурадан, күшті қышқылдар мен сілтілерден аулақ болу үшін жұмсақ бекіту әдісін қолдануға болады. Антиген құрылымының зақымдануын азайту үшін жанама жабын әдісі және биотин-стрептавидин жүйесі қолданылды. Егер антиген мембраналық ақуыз болса, оны бүтін жасушалардың бетінде көрсетуге немесе табиғи мембраналық ақуыз конформациясын сақтау үшін нано-диск сияқты мембраналық ортаны модельдеу үшін пайдалануға болады.
С.
Фаг-дисплей технологиясымен тексерілген антиденелердің антигендермен байланысу ерекшелігін қалай тексеруге болады?

А.
ELISA, Western Blotting (WB) және Immunofluorescence (IF) сияқты әдеттегі эксперименттерден басқа, беттік плазмон резонансы (SPR) және биоқабат интерферометриясы (BLI) анықтау әдістерін антиденелер мен антигендердің байланысу және диссоциациялану процестерін нақты уақыт режимінде бақылау үшін қолдануға болады, бұл аффинділік пен кинетикалық параметрлерді анықтауға мүмкіндік береді.

Иммунитетке қатысты сұрақтар ◢

С.
Фаг дисплей технологиясында жануарлардың жалпы иммундық жауаптары қандай?

А.
Фаг дисплейін адамдар, тышқандар, егеуқұйрықтар, қояндар, тауықтар, түйелер, альпакалар, сиырлар, иттер, қойлар, маймылдар және акулаларды қоса алғанда, бірақ олармен шектелмей, антидене өндіретін түрлердің кең ауқымы үшін жоғары аффинді моноклоналды антиденелерді жасау үшін пайдалануға болады.
С.
Фагты дисплей технологиясында әртүрлі жануарлар түрлерінен алынған антиденелер кітапханаларының сипаттамалары мен қолданылатын сценарийлері қандай?

А.
Тышқан антиденелерінің кітапханаларын құру технологиясы жақсы дамыған, үнемді және қысқа тәжірибелік ұзақтығы бар, бұл оны алдын ала антиденелерді скринингтеу және негізгі зерттеулер үшін қолайлы етеді. Қоян антиденелері тышқан антиденелерімен салыстырғанда эпитоптарды тану диапазоны кеңірек, күшті аффинділік пен ерекшелікті көрсетеді. Адам антиденелерін адам антиденелерінің кітапханаларынан тікелей алуға болады, осылайша адам ағзасына гетерологиялық антиденелер енгізілген кезде пайда болуы мүмкін иммундық реакциялардың алдын алады. Бұл тәсіл дәрілік заттарды зерттеу мен әзірлеуде, әсіресе терапиялық антиденелерді жасауда маңызды құндылыққа ие.
С.
Фаг дисплей технологиясында қолданылатын жалпы жануарлар иммуногені дегеніміз не?

А.
Жануарлардың иммуногендері әдетте ақуыз антигені, полипептидті антиген, нуклеин қышқылының антигені және патогенге байланысты антиген болып бөлінеді, олардың ішінде патогенге байланысты антигенге вирус антигені (толық вирус бөлшегі, вирус ақуызы, вирустың құрылымдық емес ақуызы және т.б.), бактериялық антиген (толық бактерия сығындысы, жасуша қабырғасының компоненті, бөлінетін ақуыз, токсин және т.б.) және паразит антигені жатады.
С.
Иммундық жауап кезінде жануарлардағы иммундық төзімділік мәселесін қалай шешуге болады?

А.
Иммундық антигендерді рекомбинантты ақуыздармен және өрт сөндіруші вирус бөлшектерін вирустардың құрылымдық ақуыздарымен ауыстыру арқылы иммуногендерді реттеңіз. Тәжірибелік дизайнды реттеңіз және иммундық дозаны өзгертіңіз.
С.
Фаг дисплей технологиясында иммуногендердің иммуногенділігін қалай жақсартуға болады?

А.
Иммуногенділікті антигендерді ірі қара сарысу альбумині сияқты тасымалдаушы ақуыздармен байланыстыру арқылы арттыруға болады. Сонымен қатар, Фройнд адъюванттары мен алюминий адъюванттарын қоса алғанда, иммундық адъюванттарды in vivo өмір сүру уақытын ұзарту және иммундық жасушалардың белсенділігі мен көбеюін ынталандыру, осылайша иммуногенділікті жақсарту үшін қолдануға болады.

Кітапхана құрылысына қатысты сұрақтар ◢

С.
Фаг антиденелерінің кітапханасы дегеніміз не?

А.
Фаг антиденелерінің кітапханасы - антиденелерден фаг векторларына айнымалы аймақ гендерінің толық жиынтығын жинау және оларды фагтардың беттерінде экспрессиялау арқылы жасалған әртүрлі фаг антиденелерінің жиынтығы. Бұл процесс фаг антиденелерінің кітапханасының пайда болуына әкеледі.
С.
Фаг антиденелерінің кітапханасын құру процесі

А.
Фаг дисплейінің жалпы процесі бірнеше негізгі қадамдарды қамтиды: иммундалған жануарлардан перифериялық қанның мононуклеарлы жасушаларын (ПҚМЖ) алу, жалпы РНҚ-ны бөліп алу және оны комплементарлы ДНҚ-ға (кДНҚ) транскрипциялау, полимеразды тізбекті реакция (ПТР) технологиясын қолдана отырып, нысана генін күшейту, нысана генін фаг векторына клондау және векторды экспрессиялау үшін иесінің жасушасына айналдыру. Бұл процесс жоғары аффинді антиденелерді тез анықтай алатын фаг дисплей кітапханасын құруға әкеледі. Кейіннен бұл кітапхана вакциналарды, терапиялық препараттарды және диагностикалық реагенттерді әзірлеу үшін құнды ресурс бола алады.
С.
Жоғары сапалы кітапхана құрудың негізгі тұстары қандай?

А.

PBMC жалпы санының жеткілікті екеніне көз жеткізіңіз. РНҚ сапасының ыдырамай сақталуын қамтамасыз етіңіз.

Трансформациялаушылардың жалпы санын қамтамасыз ету үшін кітапхана сыйымдылығы теориялық әртүрліліктің 10-нан 100 есесіне дейін болуы керек.
С.
Фаг антиденелерінің кітапханасы қандай топтарға бөлінеді?

А.
Антидене кітапханасының көзіне сәйкес, фаг антидене кітапханаларын иммундық фаг антидене кітапханалары және табиғи фаг антидене кітапханалары деп жіктеуге болады. Бұл екі түрдің арасындағы негізгі айырмашылық жануарлардың вакцинацияланғандығында. Сонымен қатар, табиғи антидене кітапханаларын жартылай синтез немесе синтез арқылы жасауға болады.
С.
Фаг антиденелері кітапханасының сапасын қалай бағалауға болады?

А.
Антидене кітапханасының сапасын бағалаудың екі негізгі көрсеткіші бар: сақтау сыйымдылығы және әртүрлілік. Жоғары сақтау сыйымдылығы жоғары әртүрлілікпен бірге жоғары аффинділік пен ерекшелікпен антиденелерді тиімді скринингтеуді қамтамасыз етеді.

Кітапханалық скрининг сұрақтары ◢

С.
Фаг антиденелерінің кітапханасын скринингтеу процесі қандай?

А.
Биологиялық элютриация процесінде дисплей кітапханасы бекітілген нысаналармен инкубацияланады, содан кейін реактивті емес фагтарды жою үшін мұқият жуылады. Конъюгаттар әдетте қышқыл немесе тұзы жоғары ерітіндіні пайдаланып элюцияланады және кейіннен байыту үшін қолайлы хост жасушаларында күшейтіледі. 3-5 раундтан кейін жоғары аффинділігі бар антиденелер алынады.
С.
Фаг антиденелерінің кітапханаларын скринингтеу үшін қандай әдістер қолданылады?

А.
Фагты скринингтеу әдістеріне негізінен қатты фазалы панорамалау, сұйық фазалы скрининг және жасушалық скрининг жатады. Тиісті скрининг әдісін таңдауда нысана молекулаларының сипаттамаларын, скрининг процесінің мақсаттарын және зертханалық ортаны ескеру қажет.
С.
Фагтардың оң және теріс скринингтері қандай?

А.
Оң скрининг - нысана ақуыздарымен байланысатын фаг антиденелерін скринингтеудің ең негізгі әдісі. Теріс скрининг спецификалық емес антиденелерді жоюға қызмет етеді. Фаг антиденелерін скринингтеу процесі кезінде нысана антигенінің белгісінен, материалдарынан немесе нысана антигеніне құрылымдық ұқсастығы бар басқа антигендерден болатын кедергілерге байланысты спецификалық емес антиденелер анықталуы мүмкін. Мұндай жағдайларда теріс скрининг скрининг процесінің тиімділігін арттыра алады.
С.
Спецификалық емес антиденелерді скринингтен қалай аулақ болуға болады?

А.

Әртүрлі маркерлермен белгіленген антигендерге бастапқы скрининг үшін басымдық беруге болады немесе спецификалық емес антиденелердің үлесін азайту үшін теріс скринингті қолдануға болады.

Бұл жағдайдың алдын алу үшін тиісті тығыздағыш сұйықтықты ауыстыруды немесе кезекпен басқа тығыздағыш сұйықтықтарды пайдалануды таңдауға болады. Егер фондық жасуша желісін (CHO немесе HEK293) танитын антидене тексерілсе, скрининг немесе теріс скрининг мақсаттары үшін басқа фондық жасуша желілерін ауыстыруға болады.
С.
Алынған антиденелерді қалай тексеруге және талдауға болады?

А.
Антиденелерді тексеру әдістеріне әдетте ELISA, вестерн-блоттинг (WB), ағынды цитометрия, иммунопреципитация (IP), иммунофлуоресценция (IF), иммуногистохимия және басқа да әртүрлі эксперименттік әдістер жатады. Alpha Lifetech антиденелерді анықтауда кең тәжірибеге ие және кейінгі эксперименттерде антиденелердің тиімділігін қамтамасыз ететін кәсіби эксперименттік топқа ие.

Егер сізде қандай да бір сұрақтар туындаса, кез келген уақытта бізбен хабарласудан тартынбаңыз.

Leave Your Message

Таңдаулы қызмет