Антиденелер инженериясы дегеніміз не?

Антиденелер инженериясының көмегімен антиденелердің молекулалық өлшемін, фармакокинетикасын, иммуногенділігін, байланысуға жақындығын, спецификасын және эффекторлық қызметін өзгерту мүмкін болды. Антиденелерді синтездегеннен кейін антиденелердің арнайы байланысуы оларды клиникалық диагностикада және емдеуде өте құнды етеді. Антиденелер инженериясы арқылы олар дәрілік және диагностикалық ерте даму қажеттіліктерін қанағаттандыра алады.

Антиденелер инженериясының мақсаты – табиғи антиденелер қол жеткізе алмайтын жоғары спецификалық, тұрақты функцияларды жобалау және өндіру, терапевтік антиденелерді өндіру үшін негіз қалау.

Alpha Lifetech антиденелер инженериясындағы үлкен жобалық тәжірибесі бар көптеген түрлер үшін теңшелген моноклоналды және поликлоналды антиденелер қызметтерін, сондай-ақ фаг дисплейі антиденелер кітапханасын құру және скринингтік қызметтерді ұсына алады. Alpha Lifetech тұтынушыларға тиімді, жоғары спецификалық және тұрақты антиденелерді шығару үшін сапалы биосимилярлық антиденелер мен рекомбинантты ақуыз өнімдерін, сондай-ақ сәйкес қызметтерді ұсына алады. Жан-жақты антиденелерді, ақуыз платформаларын және фагтарды көрсету жүйелерін пайдалану арқылы біз антиденелерді гуманизациялау, антиденелерді тазарту, антиденелерді секвенирлеу және антиденелерді валидациялау сияқты техникалық қызметтерді қоса, антидене өндірісінің жоғары және төменгі ағынын қамтитын қызметтерді ұсынамыз.

Антиденелер инженериясының пионер кезеңі екі технологиямен байланысты:

--Рекомбинантты ДНҚ технологиясы

--Гибридома технологиясы

Антиденелер инженериясының қарқынды дамуы үш маңызды технологиямен байланысты:

--Генді клондау технологиясы және полимеразды тізбекті реакция

--Белок экспрессиясы: рекомбинантты ақуыздар ашытқы, таяқша тәрізді вирустар және өсімдіктер сияқты экспрессиялық жүйелер арқылы өндіріледі.

--Компьютер көмегімен құрылымдық жобалау

Антиденелердің бірінші ұрпағы химерлі антиденелерді өндіру үшін гуманизацияланды, мұнда тышқанның моноклоналды антиденелерінің айнымалы аймағы адамның IgG молекулаларының тұрақты аймағымен байланысты болды. Екінші ұрпақ тінтуірінің моноклональды антиденесінің антигенді байланыстыру аймағы (CDR) адам IgG-ге трансплантацияланды. CDR аймағын қоспағанда, барлық басқа антиденелер дерлік адам антиденелері болып табылады және адамды емдеу үшін тінтуір клонының антиденелерін пайдалану кезінде адамның тышқанға қарсы антиденелерінің (HAMA) жауаптарын индукциялауды болдырмауға күш салынды.

 

Фаг дисплей кітапханасын құру үшін бірінші қадам иммундалған жануарлардың В жасушаларынан (иммундық кітапхана құрылысы) оқшауланатын, иммундалмаған жануарлардан (табиғи кітапхана құрылысы) тікелей экстракцияланатын немесе тіпті антидене генінің фрагменттерімен in vitro жиналатын (синтетикалық кітапхана құрылысы) болатын антиденелерді кодтайтын гендерді алу болып табылады. Содан кейін гендер ПТР арқылы күшейтіліп, плазмидаларға енгізіледі және қолайлы хост жүйелерінде экспрессияланады (ашытқы экспрессиясы (әдетте Pichia pastoris), прокариоттық экспрессия (әдетте E. coli), сүтқоректілердің жасушаларының экспрессиясы, өсімдік жасушаларының экспрессиясы және таяқша тәрізді вирустармен жұқтырылған жәндіктер жасушаларының экспрессиясы). Ең көп таралғаны - E. coli экспрессия жүйесі, ол фагқа арнайы кодтаушы антидене тізбегін біріктіреді және фаг қабықшасының ақуыздарының бірін кодтайды (pIII немесе pVIII). Геннің синтезі, Және бактериофагтардың бетінде көрсетіледі. Бұл технологияның негізі фаг дисплей кітапханасын құру болып табылады, оның табиғи кітапханалардан артықшылығы бар, оның нақты байланысы болуы мүмкін. Кейіннен антиген спецификасы бар антиденелер биологиялық іріктеу процесі арқылы скринингтен өтеді, мақсатты антигендер бекітіледі, байланыспаған фагтар қайта-қайта жуылады, ал байланысқан фагтар одан әрі байыту үшін жуылады. Қайталаудың үш немесе одан да көп раундтарынан кейін жоғары спецификалық және жоғары жақындықты антиденелер оқшауланады.

3-сурет: Антиденелер кітапханасының құрылысы және скринингі

Рекомбинантты ДНҚ технологиясы антидене фрагменттерін генерациялау үшін пайдаланылуы мүмкін. Fab антиденелері бастапқыда тек асқазан протеазасымен гидролизденуі мүмкін (Fab ') 2 фрагменттері, содан кейін олар жеке Fab фрагменттерін жасау үшін папаинмен қорытылады. Fv фрагменті дисульфидті байланыстардың болмауына байланысты тұрақтылығы нашар VH және VL-ден тұрады. Демек, VH және VL шамамен 25KDa молекулалық салмағы бар бір тізбекті айнымалы фрагмент (scFv) антидене құру үшін 15-20 аминқышқылдарынан тұратын қысқа пептид арқылы бір-бірімен байланысады.

Camelidae (Camel, LIama және Alpaca) антиденелерінің құрылымын зерттеу антиденелердің тек ауыр тізбектері бар және жеңіл тізбектері жоқ екенін анықтады, сондықтан оларды ауыр тізбекті антиденелер (hcAb) деп атайды. Ауыр тізбекті антиденелердің айнымалы домені бір доменді антиденелер немесе нанободы немесе VHH деп аталады, өлшемі 12-15 кДа. Мономерлер ретінде олардың дисульфидтік байланыстары жоқ және өте тұрақты, антигендерге жақындығы өте жоғары.

5-сурет: Ауыр тізбекті антидене және VHH/ Nanobody

Жасушаның бос экспрессиясы әдетте E. coli экспрессия жүйесін пайдалана отырып, in vitro ақуыз синтезіне қол жеткізу үшін табиғи немесе синтетикалық ДНҚ экспрессиясын пайдаланады. Ол ақуыздарды тез өндіреді және in vivo рекомбинантты ақуыздардың көп мөлшерін өндіру кезінде жасушаларға метаболикалық және цитотоксикалық жүктемені болдырмайды. Ол сондай-ақ синтезделуі қиын белоктарды шығара алады, мысалы трансляциядан кейін өзгерту немесе мембраналық ақуыздарды синтездеу қиын.