Аптамер сипаттамасын талдау қызметі

Alpha Lifetech компаниясы көптеген жылдар бойы адаптерлерге қатысты қызметтерді ұсынып келеді, кешенді адаптерлерді әзірлеу және талдау қызметтерін ұсынады

БІЗБЕН ХАБАРЛАСЫҢЫ

Аптамер сипаттамасын талдау қызметі

Alpha Lifetech компаниясы көптеген жылдар бойы аптамерге қатысты қызметтерді көрсетіп келеді және қазіргі уақытта аптамер синтезі, SELEX скринингі, жоғары өнімділік секвенирлеу және аптамерді оңтайландыру және сипаттау сияқты кешенді аптамер әзірлеу схемаларын ұсына алады. Аптамерлерді скринингтеуге арналған SELEX әдісінің артықшылықтарына сүйене отырып, Alpha Lifetech аптамерлерді скринингтеуге арналған көбірек әдістерді кеңейтті.

Аптамер сипаттамасын талдауға кіріспе

Сәйкестікті тексеру

Аптамердің оңтайландырылған аффинділігі аптамерді байланыстыру әдісінің тиісті әдістерімен тексерілді. Мысалдарға изотермиялық титрлеу калориметриясы (ITC), ағын цитометриясы (FCM) және беттік плазмон резонансы (SPR), микрофлюидикалар және т.б. жатады. Аптамердің аффинділігі әдетте диссоциациялану константасымен (KD), қайтымды реакциядағы молекулалық диссоциациялану дәрежесін сандық бағалау үшін қолданылатын физикалық шамамен көрінеді. KD мәні неғұрлым аз болса, кешен соғұрлым тұрақты болады, яғни аффинділік соғұрлым күшті болады; керісінше, KD мәні неғұрлым үлкен болса, кешен соғұрлым тұрақсыз болады және аффинділік әлсіз болады. Бұл қадам аптамердің өнімділігін анықтаудың кілті болып табылады, аптамер аффинділігінің жетілуін қамтамасыз етеді және практикалық қолдануда жоғары аффинділік пен селективтілікпен мақсатты молекулаға байланыса алады.

1-сурет. Аптамер аффинділігінің жетілу процесі. Анықтамалық дереккөз:Кингхорн AB, Фрейзер, LA, 2017.

Функцияны тексеру

Аффинділікті тексеруден басқа, аптамердің функциясын тексеру қажет. Бұған аптамердің тұрақтылығын, ерекшелігін және белгілі бір ортадағы басқа молекулалармен өзара әрекеттесуін тексеру кіреді. Функционалды тексеру нәтижелері аптамерлердің ғылыми зерттеулердегі және өнеркәсіптік қолданбалардағы құндылығына тікелей әсер етеді.

Нақты тексеру

Бәсекелестік эксперимент: Аптамердің белгілі бір нысанаға байланысу қабілеті басқа ұқсас нысандардың қатысуымен бағаланады. Егер аптамер басқа молекулалардың кедергісінсіз нысана молекуласына арнайы байланыса алса, бұл оның жоғары ерекшелігі бар екенін көрсетеді.

Айқас реакция эксперименті: Аптамер тек белгілі бір нысанаға ғана байланысатынын білу үшін, оның ерекшелігін тексеру үшін бірқатар байланысты немесе байланыссыз нысандармен байланысады.

Тұрақтылықты тексеру

Нуклеазаның ыдырау эксперименті: Аптамерлерге нуклеазаның әртүрлі концентрациялары әсер етті және олардың ыдырауы байқалды. Әртүрлі уақыт нүктелеріндегі ыдырау дәрежесін салыстыру арқылы аптамердің нуклеазаға қарсы ыдырау қабілетін бағалауға болады.

Температура және уақыт тұрақтылығы бойынша эксперимент: Аптамердің құрылымдық және функционалдық тұрақтылығын бақылау үшін ол әртүрлі температура және уақыт жағдайларына орналастырылды. Бұл аптамерлерді сақтау және пайдаланудың оңтайлы жағдайларын анықтауға көмектеседі.

Биологиялық белсенділікті анықтау

Тиісті әдіс әдетте нуклеин қышқылы аптамерінің нақты қолдану мақсатына сәйкес таңдалады.

(1) Молекулалық деңгейдегі тестілеу: Аптамер нысана молекуласымен біріккеннен кейін түзілген кешендерді анықтау немесе аптамер тудырған нысана молекуласының экспрессия деңгейінің өзгерістерін анықтау үшін гель электрофорезі, вестерн-блот және т.б. сияқты молекулалық биология әдістерін қолдану.

(2) Жасуша деңгейіндегі тестілеу: Жасуша өсіру технологиясын қолдану арқылы аптамерлерді нысана жасушалармен инкубациялау жасуша морфологиясы, көбеюі және апоптоз сияқты биологиялық өзгерістерді бақылау және аптамерлердің биологиялық белсенділігін бағалау үшін жүзеге асырылады.

(3) Жануарлар моделін сынау: Тиісті жануарлар модельдерінде нуклеин қышқылының аптамерлері инъекция немесе дәрілік препарат енгізу арқылы беріледі, ал жануарлардың физиологиялық көрсеткіштері мен патологиялық өзгерістері аптамерлердің in vivo биологиялық белсенділігі мен қауіпсіздігін бағалау үшін бақыланады.