Aptamer әзірлеу платформасы

Аптамерлер - жоғары аффинділік және жоғары ерекшелік қасиеті бар, антиденелер сияқты нысана молекулаларымен арнайы байланысатын бір тізбекті олигонуклеотидтер (ДНҚ, РНҚ немесе XNA) және олар биосенсорларды әзірлеу, диагностикалау және терапия үшін кеңінен қолданылады.

Alpha Lifetech ұсынатын аптамер платформасы екі санатты қамтиды: негізінен SELEX аптамер кітапханасын синтездеу қызметін және аптамерді (ДНҚ, РНҚ немесе XNA) әзірлеу қызметін қамтитын аптамер синтездеу платформасы және ақуыздар, пептидтер, жасушалар, ұсақ молекулалар, металл иондары және басқа да нысаналы молекулалар үшін SELEX технологиясына негізделген скринингтік қызметтерді, сондай-ақ аптамерді оңтайландыру және сәйкестендіруді талдау қызметтерін қамтитын аптамер скринингтік платформасы.

Аптамер синтез платформасы

SELEX аптамер кітапханасының синтез қызметі

SELEX аптамер кітапханасын синтездеу қызметі негізінен мақсатты молекулаларға сәйкес in vitro химиялық синтез арқылы көптеген кездейсоқ бір тізбекті олигонуклеотидтік тізбектерді қамтитын кітапхананы құруды қамтиды. Кітапхананы құру SELEX технологиясының бастапқы нүктесі болып табылады, ол үлкен кездейсоқ кітапханаларды құру арқылы кейінгі скрининг процесі үшін көптеген кандидаттық тізбектерді қамтамасыз етеді және жоғары аффинді аптамерлерді скринингтеу мүмкіндігін арттырады.

Кітапхана синтезі негізінен келесі кезеңдерге бөлінеді:

Қадамдар	Технологияның егжей-тегжейлері
Мақсатты молекулаларды анықтау	Аптамерлерге тексерілуі қажет нысана молекулаларды анықтаңыз, олар ақуыздар, нуклеин қышқылдары, ұсақ молекулалық, металл иондары және т.б. болуы мүмкін.
Кездейсоқ тізбек дизайны	Кездейсоқ тізбек ұзындығы, негіз құрамы және басқа параметрлер нысана молекулаларының сипаттамаларына және скрининг талаптарына сәйкес жасалған. Әдетте, кездейсоқ тізбектердің ұзындығы ондаған және жүздеген негіз аралығында болады.
Тұрақты тізбектердің синтезі	Екі ұшында да бекітілген тізбектері бар (мысалы, ПТР праймер тізбектері) олигонуклеотид фрагменттері жасалып, синтезделеді, олар кейінгі күшейту және скрининг процесінде қолданылады.

Синтезделген кітапхананы сапаны бақылау үшін әлі де өңдеу қажет. Кітапхананың концентрациясы кейінгі скрининг процесінде қолданылуын қамтамасыз ету үшін анықталды. Кітапханадағы кездейсоқ тізбектердің әртүрлілігі мен дәлдігі секвенирлеу және кітапхана сапасының скрининг талаптарына сәйкес келетініне көз жеткізу үшін басқа әдістермен тексерілді.

Жоғарыда аталған қадамдар арқылы жоғары сапалы және өте алуан түрлі SELEX аптамер кітапханасын синтездеуге болады, бұл кейінгі скрининг процесі үшін мол кандидаттық тізбектерді қамтамасыз ете алады.

Аптамерлерді дамыту қызметтері (ДНҚ, РНҚ немесе XNA)

Аптамерлерге әдетте нуклеин қышқылының аптамерлері жатады. Нуклеин қышқылының аптамерлеріне ДНҚ аптамерлері, РНҚ аптамерлері және химиялық түрлендірілген нуклеин қышқылының аптамерлері болып табылатын XNA аптамерлері кіреді. SELEX әдісі аптамерлерді әзірлеу үшін кеңінен қолданылады. Аптамерлерді әзірлеу қызметтерінің негізгі жұмыс процесіне кітапхана құру, нысананы байланыстыру, оқшаулау және тазарту, күшейту, скринингтің бірнеше раунды және тізбекті анықтау кіреді. Көптеген жылдар бойы біз кітапхана құруға және аптамерлерді әзірлеудегі бай тәжірибеге назар аудардық. Біз тұтынушыларға жақсырақ қызмет көрсетуге міндеттенеміз.

SELEX технологиялық процесі

SELEX процесі бірнеше кезеңнен тұрады, олардың әрқайсысы келесі негізгі қадамдардан тұрады:

Кітапхана және мақсатты байланыстыру

Құрылған нуклеин қышқылдарының кітапханасы белгілі бір нысана молекулаларымен (мысалы, ақуыздармен, ұсақ молекулалы қосылыстармен және т.б.) араласады, сондықтан кітапханадағы нуклеин қышқылдарының тізбегі нысана молекулаларымен байланысу мүмкіндігіне ие болады.

Байланбаған молекулаларды бөліп алу

Нысана молекуласымен байланыспаған нуклеин қышқылдарының тізбегі қоспадан аффиндік хроматография, магниттік моншақтарды бөлу және т.б. сияқты арнайы әдістермен бөлінеді.

Байланысатын молекулалардың амплитудасы

Нысана молекуласымен байланысқан нуклеин қышқылының тізбегі әдетте полимеразды тізбекті реакция (ПТР) технологиясын қолдану арқылы күшейтіледі. Келесі скринингтік фазада күшейтілген тізбектер бастапқы кітапхана ретінде пайдаланылады.

1-сурет: SELEX скрининг процесі

Aptamer скринингтік платформасы

Аптамер скринингтік қызметі

Alpha Lifetech әртүрлі молекулалар түрлері үшін әртүрлі SELEX әдіснамаларын қолдана отырып, мамандандырылған аптамер скринингі қызметтерінің алуан түрін ұсынады:

Нысан түрлері	Техникалық мәліметтер
SELEX компаниясының ақуызды аппамер скринингі	Ақуыз аптамерлерін скринингтеудің негізгі мақсаты - нысана ақуыз молекулаларымен арнайы байланыса алатын аптамерлерді скринингтеу. Бұл аптамерлерді синтездеу оңайырақ, тұрақтырақ және қоршаған орта факторларына аз сезімтал.
SELEX компаниясының пептидті аптамер скринингі	Пептидті аптамерлер - жоғары ерекшелігі мен аффинділігі бар қысқа пептидті тізбектер класы, олар нысана заттарымен арнайы байланыса алады және биомедициналық салада кең ауқымды қолдану әлеуетін көрсетеді. Белгілі бір скрининг процесі арқылы нысана молекулаларымен арнайы байланыса алатын пептидті аптамерлер көптеген кездейсоқ пептидті тізбек кітапханаларынан скринингтен өтеді.
Жасуша-спецификалық Аптамер скринингі (Cell-SELEX)	Нысана жасушалары немесе жасуша бетіндегі белгілі бір молекулалар нысана ретінде дайындалады. Нысана тұтас жасушалар, жасуша мембранасындағы рецепторлар, ақуыздар немесе басқа да ұсақ молекулалар болуы мүмкін.
Capture SELEX арқылы шағын молекулалық аптамер скринингі	SELEX-ті ұстап алу - SELEX нұсқасы болып табылатын шағын молекулалық аптамерлерді скринингтеуге арналған in vitro скрининг әдісі. SELEX-ті ұстап алу, әдетте, функционалды топтары аз және қатты фазалық тіректерде тікелей иммобилизациялау қиын шағын молекулалық нысаналарды аптамерлік скринингтеу үшін өте қолайлы.
Тірі жануарларға негізделген SELEX қызметтері	Тірі жануарларға негізделген скрининг қызметі - биология, медицина және биотехнология салаларында кеңінен қолданылатын эксперименттік әдіс, ол тірі жануарларды нақты молекулаларды, медицина қызметкерлерін, терапевтік препараттарды немесе биологиялық процестерді скринингтеу және бағалау үшін эксперименттік модельдер ретінде пайдаланады. Қызметтер адам ағзасындағы физиологиялық ортаны модельдеуге, адам ағзасындағы эксперименттік нәтижелердің тиімділігі мен қауіпсіздігін дәлірек болжауға және бағалауға арналған.

Aptamer оңтайландыру қызметі

Аптамерлердің гидрофильділігі, өндіріс кезінде жоғары аффинділік жоғалуы және тез шығарылуы оларды қолдануды шектейді. Қазіргі уақытта аптамерлердің өнімділігін арттыру үшін әртүрлі оңтайландыру әдістері зерттелді.

Сондай-ақ, аптамерді оңтайландырудың әртүрлі әдістері бар, оған қысқарту, модификациялау, тиісті топқа (тиол, карбокси, амин, флуорофор және т.б.) конъюгациялау кіреді.

Аптамер сипаттамасын талдау қызметі

Аптамер сипаттамасын талдау қызметі дегеніміз - алынған аптамердің өнімділігін бағалау құрылымын шешу және функционалдық тексерудің кәсіби қызметін білдіреді, бұл аптамердің нақты байланыстыру қабілетіне, тұрақтылығына және ерекшелігіне қойылатын талаптарға сәйкес келетініне көз жеткізуге мүмкіндік береді. Ол негізінен аффинділік пен ерекшелікті талдауды, тұрақтылықты бағалауды және биологиялық функцияны тексеруді қамтиды.