Aptamer әзірлеу платформасы

Аптамерлер – антиденелер сияқты мақсатты молекулалармен арнайы байланысатын жоғары жақындық және жоғары спецификалық қасиеті бар бір тізбекті олигонуклеотид (ДНҚ, РНҚ немесе ХНҚ) және олар биосенсорларды әзірлеу, диагностика және терапия үшін кеңінен қолданылады.

Alpha Lifetech ұсынған аптамер платформасы екі санатты қамтиды: негізінен SELEX аптамер кітапханасын синтездеу қызметі мен аптамерді (ДНҚ, РНҚ немесе XNA) әзірлеу қызметін қамтитын аптамер синтезі платформасы және ақуыздарға, пептидтерге, жасушаларға, шағын молекулаларға, металл иондарына және басқа да молекулаларға арналған скринингтік қызметтерді қоса алғанда, aptamer скринингтік платформасы сәйкестендіруді талдау қызметтері.

Аптамер синтезінің платформасы

SELEX aptamer кітапханасының синтез қызметі

SELEX aptamer кітапханасын синтездеу қызметі негізінен мақсатты молекулаларға сәйкес in vitro химиялық синтез арқылы кездейсоқ бір тізбекті олигонуклеотидтер тізбегінің үлкен санын қамтитын кітапхананы құруды қамтиды. Кітапхана құрылысы үлкен кездейсоқ кітапханаларды құру арқылы кейінгі скрининг процесі үшін көп кандидаттық реттіліктерді қамтамасыз ететін және жоғары жақындығы бар аптамерлерді скрининг мүмкіндігін арттыратын SELEX технологиясының бастапқы нүктесі болып табылады.

Кітапхана синтезі негізінен келесі кезеңдерге бөлінеді:

Қадамдар	Технология мәліметтері
Мақсатты молекулаларды анықтау	Ақуыздар, нуклеин қышқылдары, кіші молекулалы, металл иондары және т.б. болуы мүмкін аптамерлерге скринингтен өтуі қажет мақсатты молекулаларды анықтаңыз.
Кездейсоқ тізбекті жобалау	Кездейсоқ тізбектің ұзындығы, негізгі құрамы және басқа параметрлері мақсатты молекулалардың сипаттамаларына және скрининг талаптарына сәйкес жасалған. Әдетте, кездейсоқ тізбектердің ұзындығы ондаған және жүздеген негіздердің арасында болады.
Тұрақты тізбектердің синтезі	Екі ұшында бекітілген реттіліктері бар (ПТР праймер тізбегі сияқты) олигонуклеотид фрагменттері жобаланады және синтезделеді, олар кейінгі күшейту және скрининг процесінде пайдаланылады.

Синтезделген кітапхана сапаны бақылау үшін әлі де өңделуі керек. Кітапхананың шоғырлануы оның кейінгі скрининг процесінде қолданылуын қамтамасыз ету үшін анықталды. Кітапханадағы кездейсоқ реттіліктердің әртүрлілігі мен дәлдігі кітапхана сапасының скрининг талаптарына сәйкес келуін қамтамасыз ету үшін секвенирлеу және басқа әдістер арқылы тексерілді.

Жоғарыда көрсетілген қадамдар арқылы жоғары сапалы және әр түрлі SELEX аптамер кітапханасын синтездеуге болады, ол келесі скрининг процесі үшін көптеген кандидаттар тізбегін қамтамасыз ете алады.

Аптамерді әзірлеу қызметтері (ДНҚ, РНҚ немесе XNA)

Аптамерлер әдетте нуклеин қышқылының аптамерлеріне жатады. Нуклеин қышқылының аптамерлеріне ДНҚ аптамерлері, РНҚ аптамерлері және химиялық модификацияланған нуклеин қышқылының аптамерлері болып табылатын XNA аптамерлері кіреді. SELEX әдісі аптамерлерді жасау үшін кеңінен қолданылады. Аптамерді әзірлеу қызметтерінің негізгі жұмыс процесі кітапхана құрылысын, мақсатты байланыстыруды, оқшаулауды және тазартуды, күшейтуді, скринингтің бірнеше айналымын және дәйектілікті анықтауды қамтиды. Көптеген жылдар бойы біз кітапхана құрылысына және aptamer әзірлеудегі бай тәжірибеге назар аудардық. Біз тұтынушыға жақсырақ қызмет көрсетуге дайынбыз.

SELEX технологиялық процесі

SELEX процесі бірнеше айналымнан тұрады, олардың әрқайсысы келесі негізгі қадамдардан тұрады:

Кітапхана және мақсатты байланыстыру

Құрылған нуклеин қышқылы кітапханасы арнайы мақсатты молекулалармен (мысалы, белоктар, кіші молекулалы қосылыстар және т.б.) араласады, осылайша кітапханадағы нуклеин қышқылының реттілігі мақсатты молекулалармен байланысу мүмкіндігіне ие болады.

Байланыссыз молекулалардың оқшаулануы

Нысаналы молекуламен байланыспаған нуклеин қышқылы тізбегі қоспадан ұқсастық хроматографиясы, магниттік түйіршіктерді бөлу және т.б. сияқты арнайы әдістермен бөлінеді.

Байланыстырушы молекулалардың күшеюі

Нысаналы молекуламен байланысқан нуклеин қышқылының тізбегі әдетте полимеразды тізбекті реакция (ПТР) технологиясын қолдана отырып күшейтіледі. Келесі скрининг кезеңі үшін күшейтілген тізбектер бастапқы кітапхана ретінде пайдаланылады.

1-сурет: SELEX скрининг процесі

Aptamer скринингтік платформасы

Aptamer скрининг қызметі

Alpha Lifetech сіздің молекулаларыңыздың әртүрлі түрлері үшін әртүрлі SELEX әдістемелерін қолданатын мамандандырылған аптамерді скрининг қызметтерінің алуан түрін ұсынады:

Мақсат түрлері	Техникалық мәліметтер
SELEX протеиндік аптамер скринингі	Протеин аптамер скринингінің негізгі мақсаты - мақсатты ақуыз молекулаларымен арнайы байланыса алатын аптамерлерді скринингтен өткізу. Бұл аптамерлерді синтездеу оңай, тұрақты және қоршаған орта факторларына азырақ сезімтал.
SELEX арқылы пептидті аптамер скринингі	Пептидтік аптамерлер – мақсатты заттармен арнайы байланыса алатын және биомедициналық салада қолдану әлеуетінің кең ауқымын көрсете алатын жоғары спецификалық және жақындығы бар қысқа пептидтік тізбектер класы. Белгілі бір скрининг процесі арқылы мақсатты молекулалармен арнайы байланыса алатын пептидтік аптамерлер кездейсоқ пептидтер тізбегі кітапханаларының көп санынан скринингтен өтеді.
Жасушаға тән аптамер скринингі (Cell-SELEX)	Мақсатты жасушалар немесе жасуша бетіндегі арнайы молекулалар нысана ретінде дайындалады. Мақсаттар тұтас жасушалар, жасуша мембранасындағы рецепторлар, ақуыздар немесе басқа да шағын молекулалар болуы мүмкін.
Capture SELEX арқылы шағын молекулалық аптамер скринингі	Capture SELEX – SELEX нұсқасы болып табылатын шағын молекулалы аптамерлерді скринингке арналған in vitro скрининг әдісі. Capture SELEX әсіресе функционалды топтары аз және қатты фазалық тіректерде тікелей иммобилизациялануы қиын шағын молекулалық нысандарды аптамер скринингі үшін өте қолайлы.
Жануарларға негізделген SELEX қызметтері	Жануарларға негізделген тірі скрининг қызметі – биоғылым, медицина және биотехнология салаларында кеңінен қолданылатын тәжірибелік әдіс, ол тірі жануарларды нақты молекулаларды, дәрігерді, терапевтикалық немесе биологиялық процестерді скрининг және бағалау үшін тәжірибелік үлгілер ретінде пайдаланады. Қызметтер адам ағзасындағы эксперимент нәтижелерінің тиімділігі мен қауіпсіздігін дәлірек болжау және бағалау үшін адам ағзасындағы физиологиялық ортаны имитациялауға арналған.

Aptamer оңтайландыру қызметі

Аптамерлердің гидрофильділігі, өндіру кезінде жоғары жақындықтың жоғалуы және тез экскрециялануы олардың қолданылуын шектейді. Қазіргі уақытта аптамерлердің өнімділігін арттыру үшін әртүрлі оңтайландыру әдістері зерттелді.

Сондай-ақ бізде қиюдан, модификациядан, сәйкес топқа конъюгациядан (тиол, карбокси, амин, фторфор және т.б.) тұратын аптамерді оңтайландырудың алуан түрлі әдістері бар.

Аптамер сипаттамасын талдау қызметі

Аптамер сипаттамасын талдау қызметі аптамердің арнайы байланыстыру қабілетіне, тұрақтылығына және ерекшелігіне сәйкестігіне көз жеткізу үшін алынған аптамердің өнімділігін бағалау құрылымының шешімі мен функционалдық тексеруінің кәсіби қызметіне жатады. Ол негізінен жақындық пен ерекшелікті талдауды, тұрақтылықты бағалауды және биологиялық функцияны тексеруді қамтиды.