동물 예방 접종 플랫폼
알파 라이프텍은 검사 및 검역 허가, 명확한 유전적 배경, 명확한 면역 빈도, 그리고 상세한 면역 간격 기록을 통해 동물 자원이 명확하여 항체 생산에 편리한 서비스를 제공합니다. 알파 라이프텍은 낙타과 동물(알파카 리아마, 낙타)을 주로 면역화하여 나노바디 생산의 기반을 마련하고 있습니다. 또한, 고객의 면역 빈도 및 면역원성 요건에 따라 일반 동물(뉴질랜드 흰 토끼, 생쥐 등)에도 면역을 부여하고, 이를 추출 및 분리하여 PBMC로 제조한 후 후속 실험(단일클론 항체, 다클론 항체 개발 등)에 활용할 수 있습니다. 고객이 직접 면역원을 제공할 수 있으며, 당사는 엄격한 품질 관리를 시행합니다. 고객이 바이러스성 면역원을 제공하는 경우, 불활성화 검사를 통해 안전성을 확보합니다. 또한, 고객의 요구에 맞춰 맞춤형 면역원 제공도 가능합니다.
동물 예방 접종 소개
단일클론 항체, 다클론 항체, 나노바디와 같은 동물 유래 항체를 생산할 때, 첫 번째 단계는 동물을 면역시키고 그에 상응하는 B 세포, 항체 또는 말초혈액단핵세포(PBMC)를 확보하여 추가 항체 생산을 준비하고, 기초 과학 연구를 촉진하며, 임상 진단 도구를 개발하고, 신약 개발 및 발굴을 촉진하는 것입니다. 낙타과에 속하는 낙타, 알파카, 리아마 및 기타 낙타류는 면역 혈액 채취 및 말초혈액단핵세포(PBMC) 추출을 통해 나노바디(단일 도메인 항체) 라이브러리를 생산할 수 있습니다. 토끼 및 기타 동물도 면역을 통해 항체를 추출할 수 있습니다. 정제 후, 이를 사용하여 다클론 항체를 생산할 수 있습니다. 생쥐, 랫드 등은 면역 추출된 B 세포와 골수종 세포를 융합하여 단일클론 항체를 생산할 수 있습니다. 면역화 전에 3R 원칙(대체(Replacement), 감소(Reduction), 정제(Refinement))을 준수해야 합니다. 이를 통해 사용되는 동물의 수를 필요한 최소 수준으로 크게 줄이고, 실험 절차를 개선하며, 동물의 고통을 최소화할 수 있습니다. 적절한 실험 설계, 적절한 항체 선택, 엄격한 검증 절차도 따라야 합니다.
면역원의 분류 - 나노바디 생산
| 면역원의 종류 | 예 | 면역원 준비 | 노트 |
|---|---|---|---|
| 단백질 면역원 | 효소, 단백질, 박테리아 독소 및 기타 물질 | 다양한 단백질 발현 시스템을 선택하세요: 대장균, 효모, 곤충 세포, 포유류 세포 및 무세포 시스템 | 단백질 발현에 영향을 미치는 온도, 시간, pH, 포함체 등의 요소에 주의하세요. |
| 핵산 면역원 | DNA, RNA | DNA 면역원: 플라스미드 DNA를 구성하고, 표적 유전자에 적합한 발현 벡터를 복제하고, 세포를 배양하여 플라스미드 DNA를 증폭하고, 고순도 플라스미드 DNA를 추출합니다. RNA 면역원: 분해 방지를 위해 모자 구조와 PolyA 꼬리 추가 필요 | DNA 면역원을 제조할 때는 적절한 숙주 세포에 주의를 기울여야 하며, RNA 면역원을 제조할 때는 RNA 분해를 방지하는 데 주의해야 합니다. |
| 바이러스 면역원 | 전체 바이러스 불활성화 백신, 아단위 백신, 바이러스 벡터 백신(아데노바이러스, 렌티바이러스 등), mRAN 백신. | 전바이러스 불활성화 백신을 제조할 때는 안전성을 높이기 위해 바이러스를 먼저 불활성화합니다. 불활성화가 완전히 이루어졌는지 확인하기 위해 독성 검사를 실시합니다. 아단위 백신은 바이러스 표면 단백질만을 항원으로 사용하며, 면역 효능을 고려해야 합니다. | 면역 효과를 제공하기 위해 보조제를 첨가해야 하며, 불활성화해야 할 바이러스에 주의를 기울여야 하며, 면역 효과를 보장하기 위해 적절한 바이러스 역가가 필요하며, 제조 과정의 안전성을 엄격히 통제해야 합니다. |
동물 예방 접종 절차 또는 타임라인
동물 선택 및 항원 준비
동물 선발: 건강한 그룹에서 적절한 연령과 건강한 체격을 갖춘 알파카를 선택하고, 혈액 검사와 질병 검사를 실시하여 전염병이나 기타 건강 문제가 없는지 확인합니다.
면역원 준비: 면역원은 면역 반응을 유도하는 데 중요한 요소이며, 표적 항체의 요구 사항에 따라 적절한 단백질, 펩타이드 또는 기타 적합한 물질을 선택해야 합니다.
알파카는 1~3개의 항원을 동시에 접종할 수 있으며, 접종당 총 항원량은 1~2mg, 접종량은 2mL 미만입니다. 접종 전 항원과 면역증강제를 1:1 비율로 유화시켜 균일한 혼합물을 만들고 4℃에 보관합니다.
면역학적 알파카
알파카 귀의 빈 번호를 기록하고 면역 실험을 시작합니다. 알파카 목 근처 양쪽 림프절에 각각 2개씩 주사하고, 각 부위에 약 0.4mL의 유화된 항원을 주사합니다. 면역 후 30분 동안 알파카에게 불편함이 없는지 관찰합니다. 면역은 2주마다 최소 4회 접종해야 합니다.
혈액 채취
5~7일 동안 4회 예방접종을 한 후, 알파카의 목정맥에서 50ml의 혈액을 채취합니다.
혈청 분리
매 항원 면역 전에 면역 평가를 위해 혈액 샘플을 채취하며, 매회 5mL씩 채혈합니다. 같은 날, 혈액을 25℃로 예냉된 원심분리기를 사용하여 400 xg에서 30분간 원심분리합니다. 상층 혈청을 분리하여 이후 항체가 검사를 위해 보관합니다.
분리된 림프구
먼저 세포 분리 용액 15mL를 첨가한 후, 50mL 원심분리 튜브에 혈액 15mL를 천천히 첨가합니다. 혈액과 분리 용액이 섞이지 않도록 혈액을 첨가할 때는 조심하고 천천히 첨가합니다. 25℃에서 미리 냉각한 후, 400 xg에서 30분간 원심분리하고, 상층 혈청은 새 원심분리 튜브에 넣어 -80℃에서 보관합니다. 피펫을 사용하여 중간 면 모양의 상층 면역 세포를 새 50mL 원심분리 튜브에 흡인합니다. 각 튜브에 실온에서 10mL의 PBS 완충액을 첨가하고, 25℃에서 400 xg로 20분간 원심분리합니다. 상층액을 제거하고, 각 튜브에 실온에서 5mL의 PBS 완충액을 첨가하고, 잘 섞은 후, 혈구계수를 사용하여 세포 수를 계산한 후, 25℃에서 400 xg로 20분간 원심분리합니다. 상층액을 제거하고 RNAiso Plus로 얻은 림프구를 세포 수에 따라 용해하여 10 ^ 7/mL의 세포 용해물을 얻은 후 -80℃에 보관한다.

그림 1: 다양한 항체 발견 전략과 관련된 실험 단계를 개략적으로 나타낸 그림입니다. (그림 출처: 라우스트센, 안드레아스 H. 등)
고객사 면역원 제공 - 엄격한 품질관리
| 면역원의 종류 | 요구 사항 | 품질 관리 방법 |
|---|---|---|
| 펩타이드/소분자 샘플 | 용해 조건(주로 파지를 불활성화할지 여부에 따라 다름), 분자 구조/펩타이드 서열, 합성 보고서(HPLC/MS/HNMR) | HPLC/MS 검출 |
| 단백질 샘플 | SDS-PAGE/WB, 재구성 조건, 완충액, 라벨 정보, 총량(20-50ug), 농도, 순도 등 | SDS-PAGE/WB |
| 세포 샘플 | 세포 유형(1차 세포/유전자 편집 세포), 세포 형태(신선/냉동 해동), 성장 유형(부착/현탁), 배양 배지 요구 사항, 제공된 세포 수, 제공된 세포 수, 스크리닝 대상의 안정적인 발현을 보장하기 위한 유전자 편집 세포(고객 대응 1차 항체), 회수율 결정을 위한 냉동 해동 세포 | 주로 유전자 편집 세포를 표적으로 삼고, 고객이 제공한 1차 항체를 사용하여 표적 발현을 ELISA로 식별하고(당사는 HRP 2차 항체를 제공함), 유세포 분석법을 사용하여 검출합니다(당사는 형광 2차 항체를 제공할 수 있음). |


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동물 면역의 응용 분야는 무엇입니까?
+다클론 항체는 동물 면역화를 통해 생산할 수 있고, 단일클론 항체는 B세포와 골수종 세포를 융합시켜 생산할 수 있으며, PBMC는 낙타(알파카, 낙타, 알파카 등)에서 추출하여 나노바디, Fab 단편, scFv 항체 단편 등 다양한 항체 단편 형태를 생산할 수 있습니다. -
동물 면역을 위한 예방 조치는 무엇입니까?
+낙타 유래 동물을 위한 나노항체를 생산하려면 5~6회의 면역이 필요합니다. 대조군으로 면역 전에 혈액 샘플을 채취해야 하며, 각 면역 사이에는 2주 간격을 두어야 합니다. 네 번째 면역 후에는 양성 혈액과 면역되지 않은 음성 혈액을 채취하여 ELISA를 통해 역가를 측정합니다. 역가가 10^6 미만이면 적정 역가에 도달할 때까지 면역 횟수를 늘려야 합니다. 토끼 면역(토끼 면역의 최적 또는 일반적인 단백질 항원 수준은 50-1000ug), 마우스 면역(마우스 면역의 최적 또는 일반적인 단백질 항원 수준은 5-50ug이며, 세포인 경우 10^6개의 세포가 필요하고 핵산 또는 탄수화물의 경우 10-50ug이 필요), 염소 면역(염소 면역의 최적 또는 일반적인 단백질 항원 수준은 250-5000ug) 등과 같은 다른 동물 면역의 경우 면역원의 복용량, 안전성 및 효능에 주의해야 합니다. -
면역이 있는 동물을 어떻게 선택해야 하나요?
+고객이 요구하는 항체의 종류에 따라 나노바디 또는 기타 항체 단편을 생산해야 하는 경우, 낙타 유래 동물(낙타, 알파카)을 선택하여 면역 접종할 수 있습니다. 단일클론 항체 또는 다클론 항체를 생산해야 하는 경우, 혈청, 항원, 항원 공급원의 양에 따라 해당 종을 선택해야 합니다. 토끼의 경우 최대 혈청량은 500ml로, 적은 양의 항원이 필요하며 다클론 항체 생산에 가장 적합한 선택입니다. 마우스의 경우 최대 혈청량은 2ml, 랫드의 경우 최대 혈청량은 20ml로, 일반적으로 단일클론 항체 생산에 가장 적합한 선택입니다. 염소에서 생산된 항체는 높은 친화도를 가지고 있으며, 알파 라이프텍은 고객의 요구 사항에 따라 맞춤형 면역 접종 계획을 제공할 수 있습니다. -
항원은 보조제와 함께 사용해야 하나요? 어떻게 선택해야 하나요?
+보조제에는 유성 및 수성, 두 가지 종류가 있습니다. 가용성 항원에 대한 강력한 항체 반응을 유도하기 위해서는 보조제를 적절히 사용하는 것이 중요합니다. 보조제의 지속 방출 특성은 항원의 용량을 줄여 항체 반응 지속 시간을 연장합니다. 첫 번째 주사는 보조제와 함께 사용해야 합니다. 일반적으로 면역원의 양이 적을 때는 프로인트 보조제를 사용하는 것이 좋습니다. -
알파카 예방접종을 위한 주의사항은?
+(1) 알파카의 선택과 면역 항원은 성공적인 면역 접종의 핵심입니다. 균형 잡힌 체형의 낙타를 선택하는 것은 바람직하지 않습니다. 알파카 면역 접종 후 후속 접종에 적합한 항체를 선별하기 위해서는 면역 항원의 순도와 정확한 형태가 매우 중요합니다. 단백질 항원의 순도는 일반적으로 90% 이상입니다.(2) 림프구 분리 : 적절한 시기에 세포를 분리하면 혈액 채취 후 용혈을 효과적으로 방지하여 최상의 분리 효과를 얻을 수 있습니다.(3) 면역주기는 면역반응에 영향을 미칠 수 있습니다. 1~2주간의 면역 간격을 두면 알파카는 대부분 항원에 대해 좋은 면역반응을 보일 수 있습니다.

독립적으로 개발된 보조제
우리의 독특한 공식 보조제는 알파카의 면역 체계에 최적화되어 기존 보조제보다 더 높은 효능과 특이성을 제공합니다.

예방접종 전달기준
우리는 지정된 시간 내에 예방접종을 완료하고, 고역가 혈청을 제공하며, 각 단계를 자세한 보고서로 기록할 것을 약속드립니다.

프로젝트 품질 관리
각 프로젝트는 엄격한 품질 관리 과정을 거쳐 고객에게 높은 기준을 충족하는 항체를 제공합니다.

분명히알파카배경
우리는 다양한 예방접종 프로그램에 지원을 제공하는 건강한 알파카 개체군을 보유하고 있습니다.
궁금한 사항이 있으시면 언제든지 문의해 주시기 바랍니다.
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2018년 7월 16일 

