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동물 면역 플랫폼

본 동물 면역 플랫폼은 주로 낙타과 동물(알파카, 리아마, 낙타)에 면역을 유도하여 나노항체 생산의 기반을 마련합니다.

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동물 면역 플랫폼

알파 라이프텍은 검역 및 검사 허가를 보유하고, 유전적 배경, 면역 빈도, 면역 간격 기록 등이 명확하게 관리되는 투명한 동물 공급망을 통해 항체 생산에 필요한 서비스를 제공합니다. 주로 낙타과 동물(알파카, 리아마, 낙타)을 대상으로 면역을 실시하여 나노 항체 생산의 기반을 마련합니다. 또한, 고객의 면역 빈도 및 면역원성 요구사항에 따라 뉴질랜드 흰토끼, 쥐 등 일반 동물을 대상으로 면역을 실시하고, 말초혈액 단핵세포(PBMC)를 추출 및 분리하여 후속 실험(단클론 항체, 다클론 항체 개발 등)에 활용할 수 있습니다. 고객이 자체 면역원을 제공하는 경우, 당사는 엄격한 품질 관리를 거쳐 처리합니다. 바이러스 면역원을 제공하는 경우, 안전성 확보를 위해 불활성화 처리를 거쳐야 하며, 당사는 불활성화 테스트를 실시합니다. 또한, 고객의 요구에 따라 맞춤형 면역원 개발도 가능합니다.

동물 면역학 개론

단일클론 항체, 다중클론 항체, 나노항체 등 동물 유래 항체를 생산할 때, 첫 번째 단계는 동물을 면역화하여 해당 B세포, 항체 또는 말초혈액 단핵세포(PBMC)를 확보하는 것입니다. 이는 항체 생산, 기초 과학 연구 촉진, 임상 진단 도구 개발, 신약 개발 등에 기여합니다. 낙타과에 속하는 낙타, 알파카, 리아마 등의 동물은 면역 혈액 채취 및 PBMC 추출을 통해 나노항체(단일 도메인 항체) 라이브러리를 생산할 수 있습니다. 토끼 등의 동물을 면역화하고 항체를 추출한 후 정제하여 다중클론 항체 생산에 사용할 수 있습니다. 쥐 등의 동물은 면역 추출한 B세포와 골수종 세포를 융합하여 단일클론 항체를 생산할 수 있습니다. 면역화 전에는 3R 원칙(대체, 감소, 개선)을 준수하여 사용되는 동물의 수를 최소한으로 줄이고, 실험 절차를 개선하며, 동물의 고통을 최소화해야 합니다. 또한 적절한 실험 설계, 적합한 항체 선택, 엄격한 검증 절차를 따라야 합니다.

면역원 분류 - 나노바디 생산

면역원 종류 면역원 제제 메모
단백질 면역원 효소, 단백질, 세균 독소 및 기타 물질 다양한 단백질 발현 시스템을 선택하십시오: 대장균, 효모, 곤충 세포, 포유류 세포 및 무세포 시스템 단백질 발현에 영향을 미치는 온도, 시간, pH 및 봉입체와 같은 요소에 주의를 기울이십시오.
핵산 면역원 DNA, RNA
DNA 면역원: 플라스미드 DNA를 구축하고, 표적 유전자에 적합한 발현 벡터를 클로닝하고, 플라스미드 DNA 증폭을 위해 세포를 배양하고, 고순도 플라스미드 DNA를 추출합니다.
RNA 면역원: 분해 방지를 위해 HAT 구조와 폴리A 꼬리를 추가해야 함
DNA 면역원 준비 시에는 적절한 숙주 세포에 주의를 기울여야 하며, RNA 면역원 준비 시에는 RNA 분해 방지에 주의를 기울여야 합니다.
바이러스 면역원 전 바이러스 불활화 백신, 서브유닛 백신, 바이러스 벡터 백신(아데노바이러스, 렌티바이러스 등), mRAN 백신. 전 바이러스 불활화 백신을 제조할 때는 안전성을 높이기 위해 먼저 바이러스를 불활화합니다. 독성 시험을 통해 불활화가 완전히 이루어졌는지 확인합니다. 반면, 서브유닛 백신은 항원으로 바이러스 표면 단백질만 필요하며 면역 효능을 고려해야 합니다. 면역 효과를 제공하기 위해서는 보조제를 첨가해야 하며, 불활성화해야 할 바이러스에 주의를 기울여야 하고, 면역 효과를 보장하기 위해서는 적절한 바이러스 역가가 필요하며, 제조 과정의 안전성을 엄격하게 관리해야 합니다.

동물 예방접종 과정 또는 일정

동물 선별 및 항원 준비

동물 선별: 건강한 무리에서 적절한 나이와 건강한 체격을 가진 알파카를 선별하고, 혈액 검사 및 질병 검사를 실시하여 전염병이나 기타 건강 문제가 없는지 확인합니다.
면역원 준비: 면역원은 면역 반응을 유도하는 핵심 요소이며, 목표 항체의 요구 사항에 따라 적절한 단백질, 펩타이드 또는 기타 적합한 물질을 선택해야 합니다.
알파카는 1~3가지 항원을 동시에 접종할 수 있으며, 1회 접종 시 총 항원량은 1~2mg, 접종량은 2mL 미만이어야 합니다. 접종 전 항원과 보조제를 1:1 비율로 유화시켜 균일한 혼합물을 만든 후 4℃에서 보관합니다.

면역학 알파카

알파카 귀의 빈칸 번호를 기록하고 면역 실험을 시작합니다. 알파카 목 부근의 림프절에 양쪽 각각 2곳씩, 각 지점에 약 0.4mL의 유화된 항원을 주사합니다. 면역 후 30분 동안 관찰하여 알파카에게 불편 증상이 없는지 확인합니다. 면역은 2주 간격으로 최소 4회 실시해야 합니다.

혈액 채취

5~7일 간격으로 4회 예방접종을 완료한 후, 알파카의 목 정맥에서 50ml의 혈액을 채취합니다.

혈청 분리

각 항원 접종 전에 면역 평가를 위해 혈액 샘플을 채취하며, 매번 5mL씩 채취합니다. 채취한 혈액은 같은 날 25℃로 예열된 원심분리기를 사용하여 400xg에서 30분간 원심분리합니다. 상층의 혈청을 분리하여 추후 항체 역가 검사를 위해 보관합니다.

림프구를 분리합니다

먼저 세포 분리 용액 15mL를 50mL 원심분리 튜브에 넣은 후, 혈액 15mL를 천천히 첨가합니다. 혈액과 분리 용액이 섞이지 않도록 주의하고 천천히 첨가해야 합니다. 25℃로 예열된 원심분리 튜브에서 400xg로 30분간 원심분리하고, 상층액(혈청)을 새로운 원심분리 튜브에 옮겨 -80℃에서 보관합니다. 피펫을 이용하여 중간층의 솜털 모양 상층 면역세포를 새로운 50mL 원심분리 튜브에 옮겨 담습니다. 각 튜브에 실온의 PBS 완충액 10mL를 첨가하고, 25℃에서 400xg로 20분간 원심분리합니다. 상층액을 제거하고, 각 튜브에 실온의 PBS 완충액 5mL를 첨가하여 잘 섞은 후, 혈구계산기를 이용하여 세포 수를 측정하고, 다시 25℃에서 400xg로 20분간 원심분리합니다. 상층액을 제거하고 RNAiso Plus로 얻은 림프구를 세포 수에 따라 용해시켜 10^7/mL 농도의 세포 용해액을 얻은 후 -80℃에서 보관한다.
항체 발견
그림 1: 다양한 항체 발굴 전략 및 관련 실험 단계에 대한 개략도. (그림 출처: 라우스트센, 안드레아스 H. 외)

고객은 면역원 제공 - 엄격한 품질 관리

면역원 종류 요구 사항 품질 관리 방법
펩타이드/소분자 샘플 용해 조건(주로 파지 불활성화 여부에 따라 다름), 분자 구조/펩타이드 서열, 합성 보고서(HPLC/MS/HNMR) HPLC/MS 검출
단백질 샘플 SDS-PAGE/WB, 재구성 조건, 완충액, 라벨 정보, 총량(20-50ug), 농도, 순도 등 SDS-PAGE/WB
세포 샘플 세포 종류(일차 세포/유전자 편집 세포), 세포 형태(신선/냉동 해동), 성장 유형(부착/부유), 배양 배지 요구 사항, 제공 세포 수, 스크리닝 대상의 안정적인 발현을 보장하기 위한 유전자 편집 세포(고객이 지정한 일차 항체), 회수율 확인을 위한 냉동 해동 세포 주로 유전자 편집 세포를 대상으로 하며, 고객이 제공하는 1차 항체를 사용하여 ELISA로 표적 발현을 확인하고(당사는 HRP 2차 항체를 제공함), 유세포 분석법으로 검출합니다(당사는 형광 2차 항체를 제공할 수 있음).

페이지1자주 묻는 질문 2자주 묻는 질문 3
  • 동물 면역학의 응용 분야는 무엇인가요?

    +
    다클론 항체는 동물 면역을 통해 생산할 수 있고, 단클론 항체는 B 세포와 골수종 세포를 융합하여 생산할 수 있으며, 말초혈액 단핵세포(PBMC)는 낙타(알파카, 낙타 등)에서 추출하여 나노 항체, Fab 단편, scFv 항체 단편 등 다양한 형태의 항체 단편을 생산할 수 있다.
  • 동물의 면역을 위한 예방 조치는 무엇인가요?

    +
    낙타 유래 동물에 대한 나노항체 생산을 위해서는 5~6회 면역 접종이 필요합니다. 면역 접종 전에는 대조군으로 혈액 샘플을 채취하고, 각 면역 접종 사이에는 2주 간격을 두어야 합니다. 4회 면역 접종 후에는 양성 반응을 보인 동물의 혈액과 면역 접종을 받지 않은 음성 반응을 보인 동물의 혈액을 채취하여 ELISA 검사를 통해 항체 역가를 측정합니다. 항체 역가가 10^6 미만인 경우에는 적정 수준에 도달할 때까지 면역 접종 횟수를 늘려야 합니다. 토끼 면역(토끼 면역에 적합한 단백질 항원의 최적 또는 일반적인 농도는 50-1000μg), 마우스 면역(마우스 면역에 적합한 단백질 항원의 최적 또는 일반적인 농도는 5-50μg이며, 세포인 경우 10^6개의 세포가 필요하고, 핵산이나 탄수화물인 경우 10-50μg이 필요함), 염소 면역(염소 면역에 적합한 단백질 항원의 최적 또는 일반적인 농도는 250-5000μg) 등 다른 동물 면역의 경우, 면역원의 용량, 안전성 및 효능에 주의를 기울여야 합니다.
  • 면역력이 강한 동물을 어떻게 선택해야 할까요?

    +
    고객이 필요로 하는 항체의 종류에 따라, 나노 항체 또는 기타 항체 단편을 생산해야 하는 경우 낙타 유래 동물(낙타, 알파카)을 면역 접종에 사용할 수 있습니다. 단클론 항체 또는 다클론 항체를 생산해야 하는 경우에는 혈청량, 항원, 항원 공급원을 고려하여 적절한 동물 종을 선택해야 합니다. 토끼의 경우 최대 혈청량은 500ml이며, 적은 양의 항원만 필요하므로 다클론 항체 생산에 적합합니다. 생쥐의 경우 최대 혈청량은 2ml, 쥐의 경우 최대 혈청량은 20ml이며, 일반적으로 단클론 항체 생산에 가장 적합합니다. 염소 유래 항체는 높은 친화도를 가지며, 알파 라이프텍은 고객의 요구 사항에 맞춰 맞춤형 면역 접종 계획을 제공해 드립니다.
  • 항원은 반드시 보조제와 함께 사용해야 하나요? 어떤 보조제를 선택해야 할까요?

    +
    면역증강제에는 유성형과 수성형 두 가지 유형이 있습니다. 면역증강제를 적절히 사용하는 것은 수용성 항원에 대한 강력한 항체 반응을 유도하는 데 매우 중요합니다. 면역증강제의 지속적인 방출은 항원 투여량을 줄이고 항체 반응의 지속 시간을 연장하는 데 도움이 됩니다. 첫 번째 주사는 반드시 면역증강제와 함께 사용해야 합니다. 일반적으로 면역원량이 적을 때는 프룬드 면역증강제(Freund's adjuvant)를 사용하는 것이 권장됩니다.
  • 알파카 예방접종 시 주의사항은 무엇인가요?

    +
    (1) 알파카와 면역 항원의 선택은 성공적인 면역의 핵심이다. 균형이 잘 잡힌 낙타를 선택하는 것은 바람직하지 않다. 알파카를 이용한 면역 후 후속 적용을 위한 적합한 항체 선별을 위해서는 면역 항원의 순도와 정확한 형태가 중요하다. 단백질 항원의 순도는 일반적으로 90% 이상이다.
    (2) 림프구 분리: 적시에 세포를 분리하면 혈액 채취 후 용혈을 효과적으로 방지하여 최상의 분리 효과를 얻을 수 있습니다.
    (3) 면역주기는 면역반응에 영향을 줄 수 있습니다. 1-2주간의 면역 간격은 알파카가 대부분의 항원에 대해 좋은 면역반응을 갖도록 합니다.
장점1

독자적으로 개발된 보조제

저희만의 독자적인 면역증강제는 알파카의 면역체계에 최적화되어 기존 면역증강제보다 효능과 특이성이 뛰어납니다.
장점2

예방접종 제공
기준

저희는 지정된 시간 내에 예방접종을 완료하고, 고역가 혈청을 제공하며, 모든 단계를 상세한 보고서로 기록할 것을 약속드립니다.
장점3

프로젝트 품질 관리

각 프로젝트는 엄격한 품질 관리 과정을 거쳐 고객에게 높은 기준을 충족하는 항체를 제공합니다.
이점4

분명히알파카배경

저희는 다양한 예방접종 프로그램을 지원하는 건강한 알파카 개체군을 보유하고 있습니다.
궁금한 점이 있으시면 언제든지 편하게 문의해 주세요.

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