항체 친화성 성숙 서비스

알파 라이프텍 주식회사돌연변이 및 선별 기술을 활용하여 항체 친화성 성숙 서비스를 제공합니다. 친화성 성숙 서비스 과정에서는 일반적으로 scFv 항체를 사용하며, 항원 결합 스크리닝 시 결합 활성 효과를 줄이기 위해 단가 디스플레이 파지미드 시스템을 사용합니다. 저희 전문가 팀은 단일 도메인 항체에 대한 친화성 성숙 서비스도 제공합니다.

알파 라이프텍 주식회사저희는 전 세계 고객의 다양한 요구를 충족하는 종합적인 서비스를 제공하게 되어 자랑스럽게 생각합니다. 저희의 목표는 다양한 고객의 요구를 이해하고 충족하며, 연구 과정에서 발생할 수 있는 모든 문제 해결을 지원하는 것입니다.

친화성 성숙이란 무엇인가?

친화성 성숙은 항체가 특정 항원에 대한 친화력을 높이기 위해 반복적인 돌연변이와 선택을 겪는 과정입니다. 주로 이차 림프 ​​기관의 배중심에서 발생하는 B 세포는 T 세포와 여포 수지상 세포의 영향을 받아 체세포성 과돌연변이와 선택을 겪습니다.
친화도 성숙 과정 동안, 표면 면역글로불린 수용체의 친화도가 낮은 B 세포는 항원과의 접촉으로 활성화되어 증식 및 분화를 겪습니다. 체세포 과돌연변이 친화도 성숙을 통해 면역글로불린 유전자의 가변 영역에서 무작위 뉴클레오타이드 치환이 발생하여 다양한 항체 변이체가 생성됩니다. 체세포 과돌연변이 후, 돌연변이된 면역글로불린 수용체를 가진 B 세포에 항원 주도 선택이 수행됩니다. 항원 친화도가 증가한 항체를 생성하는 B 세포는 우선적으로 유지되어 증식하는 반면, 친화도가 감소하거나 변화가 없는 B 세포는 세포자멸사를 겪습니다. 이러한 돌연변이와 선택의 반복적인 과정을 통해 B 세포 클론이 생성되고, 항원에 대한 친화도가 점차 높아지는 항체를 생성합니다.

항체 친화성 성숙 서비스

PCR 기반 방법의 주요 장점은 증폭된 단편에 돌연변이가 정확하게 표적화된다는 점, 오류율 제어가 용이하다는 점, 빠르고 간편한 설정, 유해 화학물질을 사용하지 않는다는 점입니다. Taq DNA 중합효소는 3'-5' 교정 활성이 없기 때문에 DNA를 낮은 정확도로 복제하는 것으로 잘 알려져 있습니다.알파 라이프텍의항체 엔지니어링 플랫폼은 서브 라이브러리 구축 과정에서 주로 CDR 영역을 돌연변이시키는 오류 유발 PCR 접근법을 적용합니다. 또한, 서브 라이브러리의 유전적 다양성을 높이기 위해 전체 VH 및 VL 단편에 걸쳐 완전히 무작위적인 위치에 돌연변이를 생성하는 경우가 많습니다. 오류 유발 PCR을 통해 돌연변이된 항체 유전자 라이브러리를 구축한 후, 고친화도 변이체(scFv 항체의 친화도는 10^8 - 10^10 M에 도달할 수 있음)를 선별하기 위해 용액 내에서 패닝하거나, 고정화된 항원에서 오프레이트 의존적 선별에 최적화된 세척 조건을 사용하여 선별합니다.
  
과학자들은알파 라이프텍 주식회사대장균 돌연변이 유발 균주 mutAD5TM을 여러 돌연변이 전략 중 하나로 사용하여 무작위 돌연변이를 유도하고, 이를 통해 재조합 항체 단편의 친화도와 발현을 변화시킵니다. 생산 수준이 증가한 항체 단편의 경우, 선발 조건을 조정할 수 있습니다. 대장균 돌연변이 유발 세포의 성장 조건을 조정하여 DNA 1킬로베이스당 단일 무작위 점 돌연변이를 유도할 수 있으며, 이는 scFv 단편당 코돈 변화 1회에 해당합니다. 돌연변이, 전시, 선발 과정을 여러 번 반복한 후, 친화도 상수를 10^5 - 10^6 M에서 10^8 - 10^10 M으로 향상시킬 수 있습니다.

친화성 성숙 전략 개선

항체의 특정 위치를 정해진 다양성(예: 20개 아미노산 전체를 포함하는 완전 무작위화 또는 특정 아미노산을 고정된 비율로 포함하는 편향 무작위화)으로 무작위화하여 친화도를 향상시킬 수 있습니다. 항체 친화도를 향상시키기 위한 두 가지 전략이 있습니다. 첫째, 부위 특이적 돌연변이 유발법을 통해 상보성 결정 영역(CDR)의 특정 위치에 돌연변이를 도입합니다. 둘째, 무작위 돌연변이 유발법을 통해 V 코딩 영역 전체에 돌연변이를 도입합니다. 이 두 가지 방법을 통해 항체의 보존된 아미노산 서열 또는 전체 프레임워크 영역이 다른 아미노산으로 치환되는데, 이를 당사의 펩타이드 라이브러리 스캐닝 기술과 결합하면 관심 항체의 친화도를 매우 높은 수준으로 높일 수 있습니다.

파지 디스플레이-항체 친화도

scFv 돌연변이 라이브러리가 구축되면 바이오패닝과 고체 항원 분류라는 두 가지 스크리닝 전략을 사용할 수 있습니다. 바이오패닝에서는 낮은 친화도를 가진 돌연변이체가 씻겨 나가고 높은 결합력을 가진 파지 입자만 남게 되므로, 기질의 농도를 줄여 고친화도 항체를 분리합니다. 두 번째 전략은 용액에 표지된 항원을 넣고 평형 상수(Kd)를 기반으로 선별하는 방법과 결합 동역학을 기반으로 선별하는 방법을 사용하는데, 이 선별 방법은 Kd가 향상된 항체 변이체를 선별합니다.

궁금한 사항이 있으시면 언제든지 문의해 주시기 바랍니다.