항체 친화도 성숙 서비스

알파 라이프테크 주식회사당사는 돌연변이 및 선별 기술을 활용하여 항체 친화도 성숙 서비스를 제공합니다. 친화도 성숙 서비스 과정에서 일반적으로 scFv 항체를 사용하며, 항원 결합 스크리닝 시 친화도 효과를 줄이기 위해 단일가 디스플레이 파지미드 시스템을 적용합니다. 당사의 전문 팀은 단일 도메인 항체에 대한 친화도 성숙 서비스도 제공할 수 있습니다.

알파 라이프테크 주식회사당사는 전 세계 고객의 다양한 요구를 충족하는 종합적인 서비스를 제공하게 된 것을 자랑스럽게 생각합니다. 당사의 목표는 다양한 고객의 요구를 이해하고 충족하며, 연구 활동에서 발생할 수 있는 모든 문제에 대해 지원하는 것입니다.

친화도 성숙이란 무엇인가?

친화도 성숙은 항체가 특정 항원에 대한 친화도를 높이기 위해 반복적인 돌연변이와 선택 과정을 거치는 것을 말합니다. 주로 이차 림프 ​​기관의 배중심에서 일어나는 이 과정에서 B 세포는 T 세포와 여포성 수지상 세포의 영향을 받아 체세포 과돌연변이와 선택 과정을 거칩니다.
친화도 성숙 과정 동안, 낮은 친화도의 표면 면역글로불린 수용체를 가진 B 세포는 항원과의 접촉에 의해 활성화되어 증식 및 분화를 거칩니다. 체세포 과변이 친화도 성숙을 통해 면역글로불린 유전자의 가변 영역에서 무작위적인 뉴클레오티드 치환이 발생하여 다양한 항체 변이체가 생성됩니다. 체세포 과변이 후, 변이된 면역글로불린 수용체를 가진 B 세포에 대해 항원 유도 선택이 수행됩니다. 항원 친화도가 증가된 항체를 생성하는 B 세포는 우선적으로 남아 증식하는 반면, 친화도가 감소하거나 변화가 없는 B 세포는 세포사멸을 겪습니다. 이러한 변이와 선택의 반복적인 과정은 항원에 대한 친화도가 점진적으로 높아지는 항체를 생성하는 B 세포 클론을 만들어냅니다.

항체 친화도 성숙 서비스

PCR 기반 방법의 주요 장점은 돌연변이가 증폭된 단편에 정확하게 표적화된다는 점, 오류율을 쉽게 제어할 수 있다는 점, 방법이 신속하고 간편하게 설정 가능하며 유해한 화학 물질을 사용하지 않는다는 점입니다. Taq DNA 중합효소는 3'에서 5' 방향으로의 교정 활성이 없기 때문에 DNA 복제 정확도가 낮다는 것은 잘 알려져 있습니다.알파 라이프텍의항체 엔지니어링 플랫폼은 서브라이브러리 구축 과정에서 주로 CDR 영역을 변이시키기 위해 오류 유발 PCR 방식을 적용합니다. 또한, 서브라이브러리의 유전적 다양성을 높이기 위해 VH 및 VL 단편 전체에 걸쳐 완전히 무작위적인 위치에 변이를 도입하기도 합니다. 오류 유발 PCR을 통해 변이 항체 유전자 라이브러리를 구축한 후, 고친화성 변이체(scFv 항체의 친화도는 10^8 ~ 10^10 M에 도달할 수 있음)의 선별은 용액 패닝 또는 고정화된 항원을 이용한 패닝을 통해 수행되며, 세척 조건은 해리 속도 의존적 ​​선별에 최적화되어 있습니다.
  
과학자들알파 라이프테크 주식회사대장균 돌연변이 균주 mutAD5TM을 여러 돌연변이 전략 중 하나로 사용하여 무작위 돌연변이를 도입하고, 이를 통해 재조합 항체 단편의 친화도와 발현을 조절할 수 있습니다. 선택 조건을 조정하여 생산량이 증가된 항체 단편을 얻을 수 있습니다. 대장균 돌연변이 균주의 배양 조건을 조절하여 DNA 1킬로베이스당 하나의 무작위 점 돌연변이를 도입할 수 있으며, 이는 scFv 단편당 하나의 코돈 변화에 거의 해당합니다. 여러 차례의 돌연변이, 발현 및 선택 과정을 거치면 친화도 상수를 10^5 - 10^6 M에서 10^8 - 10^10 M으로 향상시킬 수 있습니다.

친화도 성숙 전략 개선

항체의 특정 위치를 정의된 다양성(예: 20개 아미노산 전체를 무작위화하거나 특정 아미노산을 고정된 비율로 무작위화하는 방식)으로 무작위화하여 친화도를 향상시킬 수 있습니다. 항체 친화도 향상을 위한 두 가지 전략이 있습니다. 첫째, 부위 특이적 돌연변이 유발법을 통해 상보성 결정 영역(CDR)의 특정 위치에 돌연변이를 도입하는 것입니다. 둘째, 무작위 돌연변이 유발법을 통해 전체 V-코딩 영역에 돌연변이를 도입하는 것입니다. 이 두 가지 방법을 사용하면 항체의 보존된 아미노산 서열 또는 전체 골격 영역이 다른 아미노산으로 치환될 수 있으며, 이는 당사의 펩타이드 라이브러리 스캐닝 기술과 결합하여 관심 있는 항체의 친화도를 매우 높은 수준으로 극대화할 수 있습니다.

파지 디스플레이-항체 친화도

scFv 돌연변이 라이브러리가 구축되면 바이오패닝과 고체 항원 분류라는 두 가지 스크리닝 전략을 사용할 수 있습니다. 바이오패닝에서는 기질의 농도를 낮춰 고친화성 항체를 분리하는데, 이는 저친화성 돌연변이체가 씻겨 나가고 고친화성 파지 입자만 남게 되기 때문입니다. 고체 항원 분류는 용액 상태의 표지된 항원을 사용하고, 평형 상수(Kd)에 기반한 선택과 결합 동역학에 기반한 선택을 통해 Kd 값이 향상된 항체 변이체를 선별합니다.

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