1960년에 이중특이성 항체라는 개념이 제안되었습니다. 이중특이성 항체는 이중특이성 단일클론 항체라고도 하며, 유전공학 기술을 이용하여 인공적으로 합성된 항체입니다. 인공적으로 제작된 항체인 이중특이성 항체는 일반적으로 IgG 서브클래스에 속하며, CD3 서브유닛을 표적으로 하는 항원 결합 단편을 포함합니다. 이중특이성 항체는 두 개의 특정 항원 결합 부위를 가지고 있어 두 개의 서로 다른 항원, 즉 항원의 두 개의 서로 다른 에피토프에 동시에 결합하고 인식할 수 있습니다. 단일클론 항체와 비교하여 이중특이성 항체는 추가적인 특정 항원 결합 부위를 가지고 있어 더 강력한 특이성과 표적 능력을 가지고 있어 종양 세포를 더욱 정확하게 표적화하고 표적 외 독성을 줄일 수 있습니다. 이중특이성 항체는 면역 세포 모집, 신호 전달 경로 차단, 종양 세포 직접 사멸 등 여러 생물학적 기능을 동시에 수행할 수 있습니다. 초기 이중특이성 항체는 주로 화학적 접합이나 세포 융합을 통해 제조되었지만, 이러한 방법은 무작위적인 결합과 표적 조합 분리의 어려움으로 인해 발전 속도가 느렸을 가능성이 있습니다. 유전공학 기술의 지속적인 발전에 따라 KIH(Knots in Holes), CrossMab, DVD Ig 등과 같은 많은 새로운 기술 플랫폼이 개발되었습니다. 이러한 플랫폼은 중쇄와 경쇄 불일치와 같은 문제를 효과적으로 해결하고 이중특이성 항체의 균일성과 수율을 향상시킵니다.

이중특이성 항체 생산의 주요 방법으로는 화학적 결합법, 사원 하이브리도마법, 그리고 유전자 조작 항체 제조법이 있습니다. 이 중 화학적 결합법은 프탈이미드나 디티오아실벤조산과 같은 화학적 결합제를 사용하여 두 개의 온전한 IgG 또는 두 개의 F(ab')2 항체 단편을 이중특이성 항체로 결합시킵니다. 이 방법은 간단하고 조작이 간편하지만, 항원 결합 부위를 손상시키고 항체 활성을 감소시킬 수 있으며, 결합제 자체에도 어느 정도 발암성이 있습니다. 사원 하이브리도마법은 두 개의 서로 다른 하이브리도마 세포주에서 유래한 체세포를 융합하여 해당 마우스 IgG를 발현하는 방법을 기반으로 합니다. 유전자 조작 기술을 통해 항체를 유전자 변형하여 이중특이성 항체를 형성할 수 있습니다. 두 개의 서로 다른 단일클론 항체를 제작하고, 두 항체의 Fab 단편 또는 중쇄와 경쇄 가변 영역을 각각 절단합니다. 가교 반응이나 사슬 재조합 기술을 통해 두 단편을 결합하여 이중특이성 항체를 형성합니다. 유전공학 기술은 비교적 복잡하지만, 현재 항체의 구조와 기능을 조절하기 위한 이중특이성 항체 생산에 가장 널리 사용되는 방법입니다. 이중특이성 항체 설계 시 항체 교차 반응성의 원리를 활용할 수 있지만, 항체 교차 반응성은 비특이적 반응을 유발할 수 있으므로, 이중특이성 항체 치료와 같은 이중특이성 항체 설계의 실제 적용 시 신중하게 고려되어야 합니다.

이중특이성 항체 정제는 고순도 표적 항체를 분리하고 정제하는 과정입니다. 원심분리와 심층 여과, 두 가지 방법을 사용하여 일부 가용성 불순물을 제거합니다. 표적 이중특이성 항체는 먼저 친화성 크로마토그래피로 포집합니다. IgG 유사 이중특이성 항체의 경우 단백질 A 친화성 크로마토그래피를 사용하고, IgG 유사하지 않은 이중특이성 항체의 경우 경쇄 기반 친화성 크로마토그래피를 사용할 수 있습니다. 이후, 항체를 낮은 pH 조건에서 일정 시간 동안 배양하면 바이러스 외피 표면의 단백질 구조가 파괴되어 세포 감염 능력을 잃게 됩니다. 숙주 세포 단백질(HCP)과 같은 불순물을 추가로 제거하기 위해 중간 심층 여과를 수행합니다. 이온 교환 크로마토그래피와 같은 방법을 통해 항체의 순도를 높이고, 나노여과 또는 한외여과 기술을 통해 잔류 바이러스를 제거합니다. 마지막으로, 샘플을 농축하고 적절한 제형 완충액으로 교체합니다.