1960년, 이중특이성 항체라는 개념이 제안되었습니다. 이중특이성 항체는 이중특이성 단클론 항체라고도 하며, 유전 공학 기술을 이용하여 인공적으로 합성된 항체입니다. 유전자 조작으로 만들어진 인공 항체인 이중특이성 항체는 일반적으로 IgG 아형에 속하며, CD3 소단위를 표적으로 하는 항원 결합 부위를 포함합니다. 이중특이성 항체는 두 개의 특이적 항원 결합 부위를 가지고 있어, 두 개의 서로 다른 항원 또는 하나의 항원의 두 가지 서로 다른 에피토프에 동시에 결합하고 인식할 수 있습니다. 단클론 항체와 비교했을 때, 이중특이성 항체는 추가적인 특이적 항원 결합 부위를 가지고 있어 더 강력한 특이성과 표적화 능력을 지니며, 종양 세포를 더욱 정확하게 표적화하고 부작용을 줄일 수 있습니다. 이중특이성 항체는 면역 세포 모집, 신호 전달 경로 차단, 종양 세포 직접 사멸 등 다양한 생물학적 기능을 동시에 수행할 수 있습니다. 초기 이중특이성 항체는 주로 화학적 접합이나 세포 융합을 통해 제조되었지만, 이러한 방법은 무작위적인 결합과 표적 결합 부위 분리의 어려움으로 인해 발전이 더뎠습니다. 유전공학 기술의 지속적인 발전과 함께 KIH(knots in holes), CrossMab, DVD Ig 등과 같은 다양한 신기술 플랫폼이 개발되었습니다. 이러한 플랫폼들은 중쇄와 경쇄의 불일치와 같은 문제를 효과적으로 해결하고 이중특이성 항체의 균일성과 수율을 향상시킵니다.

이중특이성 항체 생산의 주요 방법에는 화학적 결합법, 4원 하이브리도마법, 유전자 공학적 항체 제조법이 있습니다. 이 중 화학적 결합법은 프탈이미드나 디티오아실벤조산과 같은 화학적 결합제를 사용하여 두 개의 완전한 IgG 또는 두 개의 F(ab')2 항체 단편을 결합하여 이중특이성 항체를 제조하는 방법입니다. 이 방법은 간단하고 조작이 용이하지만, 항원 결합 부위를 손상시키거나 항체 활성을 저하시킬 수 있으며, 결합제 자체에 일정 수준의 발암성이 있습니다. 4원 하이브리도마법은 서로 다른 두 하이브리도마 세포주에서 유래한 체세포를 융합하여 상응하는 마우스 IgG를 발현시키는 방법입니다. 유전자 공학 기술을 통해 항체를 유전적으로 변형하여 이중특이성 항체를 만들 수 있습니다. 두 개의 서로 다른 단클론 항체를 제작하고, 각 항체의 Fab 단편 또는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 각각 절단합니다. 그런 다음 가교 반응이나 사슬 재조합 기술을 통해 두 단편을 결합하여 이중특이성 항체를 형성합니다. 유전공학 기술은 복잡성이 비교적 높지만, 현재 항체의 구조와 기능을 조절하는 이중특이성 항체 생산에 가장 널리 사용되는 방법이다. 이중특이성 항체 설계 시 항체 교차반응 원리를 활용할 수 있지만, 항체 교차반응은 비특이적 반응을 유발할 수 있으므로 이중특이성 항체 치료와 같은 실제 적용 시 신중하게 고려해야 한다.

이중특이항체 정제는 고순도 표적 항체를 분리 및 정제하는 과정입니다. 원심분리와 심층여과 두 가지 방법을 사용하여 용해성 불순물을 제거합니다. 표적 이중특이항체는 먼저 친화 크로마토그래피를 통해 포획됩니다. IgG 유사 이중특이항체의 경우 단백질 A 친화 크로마토그래피를 사용하고, 비 IgG 유사 이중특이항체의 경우 경쇄 기반 친화 크로마토그래피를 사용할 수 있습니다. 그 후, 항체를 저pH 조건에서 일정 시간 동안 배양하여 바이러스 외피 표면의 단백질 구조를 파괴함으로써 세포 감염 능력을 상실하게 합니다. 중간 단계로 심층여과를 수행하여 숙주 세포 단백질(HCP)과 같은 불순물을 추가로 제거합니다. 이온 교환 크로마토그래피와 같은 방법을 통해 항체의 순도를 향상시키고, 나노여과 또는 한외여과 기술을 통해 잔류 바이러스를 제거합니다. 마지막으로, 시료를 농축하고 적절한 제형 완충액으로 치환합니다.