단일클론항체 개발 서비스

알파 라이프텍 주식회사세포 배양, 복수액 또는 전혈청으로부터 항체 정제뿐만 아니라 에피토프 예측, 펩타이드 합성, 단백질 발현, 다클론 또는 단일클론 항체 생산을 제공할 수 있습니다.

알파 라이프텍 주식회사하이브리도마 세포, 유전체 편집 세포주, 녹다운 세포주, 과발현 세포주를 포함한 다양하고 안정적인 세포주 서비스를 고객에게 제공해 온 풍부한 경험을 보유하고 있습니다. 모든 고객에게 고급 맞춤형 세포주 서비스를 제공하기 위해 노력하고 있으며, 저희 서비스는 검증되고 신뢰할 수 있습니다.

항체 개발 전략

1. 항원 설계 및 제조
이러한 항원은 단백질, 펩타이드 또는 기타 분자일 수 있습니다. 면역원을 설계하려면 항원 구조, 면역학 및 전달 시스템에 대한 지식을 통합하는 포괄적인 접근 방식이 필요합니다. 알파 라이프텍은 필요한 고객에게 적합한 면역원을 설계할 수 있는 항원 설계 기술을 보유하고 있습니다.
알파 라이프텍은 고객이 원하는 재조합 단백질 제품을 제공합니다. 대장균 발현 시스템, 효모 발현 시스템, 바큘로바이러스-곤충 발현 시스템, 포유류 발현 시스템 등 다양한 단백질 발현 시스템을 보유하고 있어 연구에 필요한 재조합 단백질을 생산할 수 있습니다.

2. 동물 예방 접종
알파 라이프텍은 고객에게 면역원을 제공할 수 있으며, 쥐, 토끼, 양, 알파카, 기니피그, 햄스터 등 면역이 있는 동물을 선택하실 수 있습니다.

3. 단일클론항체 생산 방법

●하이브리도마 기술을 이용한 MAbs 생산
하이브리도마는 마우스 골수종 세포주와 형질세포(림프구 B)라는 두 종류의 세포를 융합하여 생성된 하이브리드 세포로, 이종접합 세포는 시험관 내에서 관심 항원에 대한 항체를 지속적으로 생성할 수 있습니다. 하이브리도마 세포주 생산은 항원 설계(합텐, 소분자, 펩타이드), 동물 면역, 세포 융합, 그리고 양성 클론 스크리닝의 세 단계로 구성됩니다. 저희는 독창적인 면역 방법을 활용하여 매우 높은 세포 융합 효율(B 세포 1,000개당 1~10개의 하이브리도마)과 높은 항체 역가를 달성하여 생화학 스크리닝, 시험관 내 세포 기반 분석, 동물 연구를 포함한 후속 분석 시험에서 성공률을 극대화합니다.

●파지 디스플레이 기술을 이용한 MAbs 생산
파지 디스플레이는 단일클론 항체를 생성하는 또 다른 방법을 제공합니다. 동물 혈액에서 B 림프구를 분리하고 mRNA를 추출합니다. PCR을 통해 이 mRNA를 cDNA로 변환하여 모든 VH 및 VL 분절을 증폭시킵니다. 이 분절들은 박테리오파지의 PIII 단백질과 함께 단일 사슬 가변 단편(scFv) 형태로 벡터에 클로닝됩니다. 이후, 이 구조물을 이용하여 대장균을 감염시키고, 헬퍼 파지를 접종하여 약 10^10개의 세포를 포함하는 라이브러리를 생성합니다. 대장균은 VH 및 VL 분절을 외피의 일부로 포함하는 박테리오파지를 분비할 수 있습니다. 이후, 관심 항원을 표적으로 하는 특정 VH 및 VL 분절을 선택하여 대장균에 박테리오파지를 재접종합니다. 이후 플라스미드를 포함하는 세포를 분리하고 시퀀싱합니다.

4. 융합 검사

●세포 융합 및 선택
수확된 B 세포는 배양 시 무한히 증식할 수 있는 암세포인 골수종 세포와 융합됩니다. 이러한 융합은 일반적으로 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 융합과 같은 기술을 사용하여 이루어집니다.
융합 후, 하이브리도마 세포는 하이브리도마만 생존할 수 있는 선택 배지에서 배양됩니다. 이 배지에는 일반적으로 융합되지 않은 골수종 세포의 성장을 억제하는 아미노프테린이 함유되어 있습니다.

●스크리닝 및 클로징
생성된 하이브리도마 세포는 표적 항원에 특이적인 항체 생성 여부를 검사합니다. 이는 일반적으로 효소면역측정법(ELISA), 웨스턴 블롯, 면역침전법, 유세포분석법 등의 기법을 사용하여 수행됩니다.

항체를 생성하는 하이브리도마 세포가 확인되면, 이 세포들을 복제하여 동일한 세포 집단을 생성합니다. 이를 통해 각 하이브리도마 세포에서 생성되는 항체가 동일함을 보장합니다.

5. 항체 기능 검증
알파 라이프텍은 단일클론 항체를 특성화하고 항체의 특이성, 친화성, 기능을 확인하기 위해 웨스턴 블로팅, 면역조직화학 또는 기능 분석과 같은 항체 기능 검증을 제공합니다.

6. 항체 최적화
단백질 A 또는 단백질 G 친화성 크로마토그래피와 같은 기술을 사용하여 배양 상층액에서 항체를 정제하고, Alpha Lifetech는 항체 친화성을 개선하기 위한 항체 변형 방법도 제공할 수 있습니다.

7. 항체 생산
알파 라이프텍은 고처리량 스크리닝 애플리케이션과 대량 생산을 위해 후보 항체를 평가할 수 있습니다.

자주 묻는 질문자주 묻는 질문

단일클론 항체 개발에 대한 FAQ

1

올바른 융합 하이브리도마를 선택하는 방법은?

융합 과정 동안, 10~15개의 96웰 마이크로타이터 플레이트에 융합 하이브리드 혼합물을 접종합니다. 각 플레이트에 HAT-IMDM 선택 배지를 공급하고 37°C의 이산화탄소 배양기에서 배양합니다. 융합 후 9~14일 후에 하이브리드 상층액을 이용하여 특정 항체의 존재 여부를 검사합니다.
2

선택 효율성을 개선하려면 어떻게 해야 하나요?

형질세포와 골수종 세포의 융합은 100% 효과적이지 않습니다. 최적의 조건과 가장 효과적인 자극 하에서도 세포 융합은 여전히 융합되지 않은 세포와 융합된 세포가 혼합된 형태를 생성하며, 이들을 분리해야 합니다. 선별 과정의 효율성을 높이기 위해, 융합에 사용된 골수종 세포에는 뉴클레오타이드 회수 경로의 핵심 효소인 HGPRT가 결핍되어 있습니다. 이 혼합물을 HAT 배지에서 배양했는데, HGPRT 효소를 가진 세포, 즉 형질세포로부터 HGPRT를 물려받은 하이브리도마 세포만 생존했습니다.
3

하이브리도마 세포주의 항체 활성을 검사하는 방법은 무엇입니까?

잡종 품종 평가는 매우 중요한 단계입니다. 일반적으로 하이브리도마, 클론, 서브클론 상층액 스크리닝은 효소면역측정법(ELISA), 웨스턴 블롯 분석법, 형광활성세포분열법(FACS)을 통해 이루어집니다. 저희는 모든 상층액 스크리닝을 자체 실험실에서 수행하기로 결정했습니다.
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항체 활동 검사를 실시하는 방법에 대한 자세한 지침을 제공하세요?

검사할 하이브리도마 상층액은 500~1,440개 샘플 범위에 속하며 9~14일 이내에 검사할 준비가 됩니다. 3~5일 기간에 걸쳐 준비될 수도 있고 같은 날 모두 준비될 수도 있으므로, 고객 연구실에서는 선택한 특정 2차 스크리닝 검사법을 몇 주 전에 준비하는 것이 중요합니다.
5

양성 하이브리도마를 서브클로닝해야 하는 이유는 무엇입니까?

초기 ELISA 스크리닝 과정에서 양성 웰이 확인된 후, 하이브리도마를 더 큰 용량, 즉 24웰 플레이트로 옮겨 서브클로닝을 준비했습니다. 하이브리도마 서브클로닝은 일반적으로 안정적인 단일클론의 분리를 위해 제한 희석법으로 수행됩니다. 이 기법은 하이브리도마 배양액을 희석하여 96웰 플레이트에 분산시켜 단일클론성(웰당 세포 한 개)을 얻는 것입니다. 혼합 하이브리도마 집단 발생 위험을 줄이기 위해 최소 두 번의 제한 희석을 수행해야 합니다.
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항체 발견을 위해 하이브리도마 기술을 사용하면 어떤 이점이 있습니까?

하이브리드 세포주는 가장 비용 효율적인 방식으로 높은 친화성, 안정성, 특이성을 갖춘 항체를 생산하는 능력으로 칭찬을 받아왔습니다.