단클론 항체 개발 서비스

알파 라이프테크 주식회사세포 배양액, 복수액 또는 전혈청으로부터 항체를 정제하는 것뿐만 아니라 에피토프 예측, 펩타이드 합성, 단백질 발현, 다클론 또는 단클론 항체 생산을 제공할 수 있습니다.

알파 라이프테크 주식회사당사는 하이브리도마 세포, 유전자 편집 세포주, 유전자 억제 세포주, 과발현 세포주 등 다양한 안정적인 세포주 서비스를 고객에게 제공하는 데 풍부한 경험을 보유하고 있습니다. 모든 고객에게 최첨단 맞춤형 세포주 서비스를 제공하기 위해 노력하며, 당사의 서비스는 검증되고 신뢰할 수 있습니다.

항체 개발 전략

1. 항원 설계 및 준비
이러한 항원은 단백질, 펩타이드 또는 기타 분자일 수 있습니다. 면역원 설계에는 항원 구조, 면역학 및 전달 시스템에 대한 지식을 통합하는 포괄적인 접근 방식이 필요합니다. 알파 라이프텍은 고객의 요구에 맞춰 면역원을 설계할 수 있는 항원 설계 기술을 보유하고 있습니다.
알파 라이프텍은 고객이 선택할 수 있는 다양한 재조합 단백질 제품을 제공합니다. 당사는 대장균 발현 시스템, 효모 발현 시스템, 바큘로바이러스-곤충 발현 시스템, 포유류 발현 시스템 등 다양한 단백질 발현 시스템을 보유하고 있어 연구에 필요한 재조합 단백질을 생산할 수 있습니다.

2. 동물 예방접종
알파 라이프텍은 고객에게 면역원(immunogen)을 제공하며, 쥐, 토끼, 양, 알파카, 기니피그, 햄스터 등과 같은 면역 동물을 선택하실 수 있습니다.

3. 단클론 항체 생산 방법

●하이브리도마 기술을 이용한 Mabs 생산
하이브리도마는 마우스 골수종 세포주와 형질세포(B림프구) 두 종류의 세포를 융합하여 생성된 잡종 세포로, 이형접합 세포는 시험관 내에서 관심 항원에 대한 항체를 지속적으로 생성할 수 있습니다. 하이브리도마 세포주 생산은 항원 설계(합텐, 소분자 및 펩타이드), 동물 면역, 세포 융합 및 양성 클론 선별의 세 단계로 구성됩니다. 독자적인 면역 방법을 활용하여 매우 높은 세포 융합 효율(B세포 1,000개당 1~10개의 하이브리도마)과 높은 항체 역가를 얻어, 생화학적 스크리닝, 시험관 내 세포 기반 분석 및 동물 연구를 포함한 후속 분석 테스트의 성공률을 극대화합니다.

●파지 디스플레이 기술을 이용한 단클론항체 생산
파지 디스플레이는 단일클론 항체를 생성하는 또 다른 방법을 제공합니다. 동물의 혈액에서 B림프구를 분리하고 mRNA를 추출합니다. PCR을 통해 이 mRNA를 cDNA로 변환하고, 이를 통해 모든 VH 및 VL 단편을 증폭합니다. 그런 다음 이 단편들을 일반적으로 단일 사슬 가변 단편(scFv) 형태로 박테리오파지의 PIII 단백질과 함께 벡터에 클로닝합니다. 이후, 이 벡터를 이용하여 대장균(E. coli)을 감염시켜 헬퍼 파지를 접종함으로써 약 10¹⁰개의 세포를 포함하는 라이브러리를 생성합니다. 대장균은 외피의 일부로 VH 및 VL 단편을 포함하는 박테리오파지를 분비할 수 있습니다. 그 후, 관심 있는 항원을 표적으로 하는 특정 VH 및 VL 단편을 선택하여 박테리오파지를 대장균에 다시 접종하는 데 사용할 수 있습니다. 플라스미드를 포함하는 세포를 분리하여 염기서열을 분석합니다.

4. 융합 스크리닝

●세포 융합 및 선택
채취한 B 세포는 배양액에서 무한히 증식할 수 있는 암세포인 골수종 세포와 융합됩니다. 이러한 융합은 일반적으로 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 융합과 같은 기술을 사용하여 이루어집니다.
융합 후, 하이브리도마 세포는 하이브리도마 세포만 생존할 수 있는 선택적 배지에서 배양됩니다. 이 배지에는 일반적으로 융합되지 않은 골수종 세포의 성장을 억제하는 아미노프테린이 포함되어 있습니다.

●스크리닝 및 클롱깅
이렇게 얻은 하이브리도마 세포는 표적 항원에 특이적인 항체 생성 여부를 확인하기 위해 검사됩니다. 일반적으로 효소결합면역흡착법(ELISA), 웨스턴 블롯, 면역침전법, 유세포 분석법 등의 기술을 사용하여 검사합니다.

항체를 생산하는 하이브리도마 세포가 확인되면, 동일한 세포 집단을 만들기 위해 해당 세포를 복제합니다. 이렇게 하면 각 하이브리도마 세포에서 생산되는 항체가 동일해집니다.

5. 항체 기능 검증
알파 라이프텍은 웨스턴 블롯팅, 면역조직화학 또는 기능 분석과 같은 항체 기능 검증을 제공하여 단클론 항체의 특성을 규명하고 항체의 특이성, 친화도 및 기능성을 확인합니다.

6. 항체 최적화
알파 라이프텍은 단백질 A 또는 단백질 G 친화성 크로마토그래피와 같은 기술을 사용하여 배양 상등액에서 항체를 정제할 수 있으며, 항체 친화도를 향상시키기 위한 항체 변형 방법도 제공합니다.

7. 항체 생성
알파 라이프텍은 고처리량 스크리닝 및 대규모 생산에 적합한 후보 항체를 평가할 수 있습니다.

자주 묻는 질문자주 묻는 질문

단클론 항체 개발 관련 FAQ

1

적합한 융합 하이브리도마를 선택하는 방법은 무엇일까요?

융합 과정 동안 10~15개의 96웰 마이크로플레이트에 융합 하이브리드 혼합물을 접종합니다. 각 플레이트에는 HAT-IMDM 선택 배지를 공급하고 37℃의 이산화탄소 배양기에서 유지합니다. 융합 후 9~14일이 지나면 하이브리드 상층액에서 특정 항체의 존재 여부를 검사합니다.
2

선발 효율을 높이는 방법은 무엇일까요?

형질세포와 다발성 골수종세포의 융합은 100% 효율적이지 않습니다. 최적의 조건과 가장 효과적인 자극을 사용하더라도 세포 융합 후에는 여전히 밀집되지 않은 세포와 밀집된 세포가 혼합되어 생성되므로 분리 과정이 필요합니다. 선별 과정의 효율을 높이기 위해 융합에 사용되는 다발성 골수종세포에는 뉴클레오티드 회수 경로의 핵심 효소인 HGPRT가 결핍되어 있습니다. 이렇게 혼합된 세포를 HAT 배지에서 배양하면 형질세포로부터 HGPRT를 물려받은, 즉 HGPRT 효소를 가진 세포만 생존할 수 있습니다.
3

항체 활성을 확인하기 위해 하이브리도마 세포주를 선별하는 방법은 무엇인가요?

잡종 품종 평가는 매우 중요한 단계입니다. 일반적으로 하이브리도마, 클론, 서브클론 배양 상층액 스크리닝은 효소면역측정법(ELISA), 웨스턴 블롯 분석, 유세포 분석(FACS) 등을 통해 수행됩니다. 본 연구에서는 모든 배양 상층액 스크리닝을 자체 실험실에서 진행할 예정입니다.
4

항체 활성 스크리닝을 수행하는 방법에 대한 자세한 지침을 제공하십시오.

검사 대상 하이브리도마 상층액은 500~1,440개의 샘플로 구성될 수 있으며, 검사 준비는 9~14일 정도 소요됩니다. 모든 샘플이 3~5일에 걸쳐 준비될 수도 있고, 하루 만에 모두 준비될 수도 있으므로, 고객 연구소에서는 몇 주 전에 미리 특정 2차 스크리닝 분석법을 준비하여 대비하는 것이 중요합니다.
5

양성 하이브리도마를 서브클로닝해야 하는 이유는 무엇입니까?

초기 ELISA 스크리닝 절차에서 양성 반응을 보인 웰이 확인되면, 하이브리도마를 서브클로닝 절차를 위해 더 큰 용량의 24웰 플레이트로 옮겼습니다. 하이브리도마의 서브클로닝은 일반적으로 안정적인 단일 클론을 분리하기 위해 제한 희석법을 사용하여 수행합니다. 이 방법은 하이브리도마 배양액을 희석하여 96웰 플레이트에 분주함으로써 단일 클론(웰당 세포 하나)을 얻는 것입니다. 혼합 하이브리도마 집단이 생성될 위험을 줄이기 위해 최소 두 번의 제한 희석을 수행해야 합니다.
6

항체 발굴에 하이브리도마 기술을 사용하는 것의 이점은 무엇인가요?

하이브리드 세포주는 가장 비용 효율적인 방식으로 높은 친화도, 안정성 및 특이성을 지닌 항체를 생산하는 능력으로 호평을 받고 있습니다.