박테리오파지 M13은 Ff 파지라고 통칭되는 필라멘트형 파지 그룹에 속합니다. 길이는 900nm, 너비는 6.5nm입니다. 6,407bp 길이의 단일 가닥 DNA(ssDNA) 유전체를 포함하고 있으며, 11개의 서로 다른 단백질을 암호화하는 9개의 유전자로 구성되어 있습니다. 이 중 5개의 단백질은 외피 단백질이며, 6개의 단백질은 파지의 복제 및 조립에 관여합니다. 외피 단백질이 가장 많이 존재하는 것은 캡시드 단백질인 G8P로, 약 2,700개의 단백질 단위로 구성되어 염색체를 둘러싸는 외피를 형성합니다.

그림 2 박테리오파지 M13의 개략적 표현.(참조: 항체 파지 디스플레이 기술의 기초)

1990년 이후, VH, VHH, scFv, 디아바디, Fab 항체를 포함한 다양한 항체 형태가 파지 라이브러리 구축에 사용되어 왔습니다. VH와 VL 구조 도메인으로 구성된 scFv는 항체 scFv 라이브러리 구축에 사용되는 단일 사슬 항체입니다. scFv는 짧은 반감기와 낮은 면역원성을 특징으로 합니다. Fab 항체 라이브러리는 VH, VL, CL, CH1로 구성되어 있어 높은 친화도를 가진 이상적인 항체를 빠르게 선별할 수 있습니다. 현재 나노바디 라이브러리는 표적 항원인 VHH에 결합할 수 있는 가장 작은 단위인 VHH로 구성됩니다. VHH는 구조가 간단하고 부피가 작으며, 용해도가 높고 안정성이 우수하며, 제조 및 발현이 용이하다는 장점이 있습니다. 합성 나노바디(Nb) 라이브러리는 안정적이고 친화도가 높은 합성 나노바디를 위한 동물 면역화의 매력적인 대안으로 떠오르고 있습니다. 일반적으로 이러한 항체 단편은 M13 파지의 G3P에 융합되고, 항체 단편을 인코딩하는 많은 수의 유전자를 클로닝함으로써 다양한 항체를 선택할 수 있는 대규모 파지 디스플레이 항체 라이브러리를 생성할 수 있습니다.

면역 종료 후 역가를 검출하고, 역가가 확인된 후 동물 혈액을 채취했습니다. 혈액에서 림프구를 분리하고, RNA를 추출한 후, RT-PCR로 표적 단편을 증폭하여 V 영역 유전자 단편을 얻었습니다. V 유전자는 특정 프라이머를 사용하여 증폭했습니다.

생성된 자연 라이브러리에는 동물에서 어떤 표적이든 표적으로 삼을 수 있는 면역원성이 낮은 항체가 포함됩니다. 항원에 특이적으로 결합하는 파지 항체는 항원을 고정하거나 표지하는 스크리닝 기술을 사용하여 수집할 수 있습니다.

표적 항원은 마이크로플레이트 구멍과 같은 고체 담체에 고정되거나 자성 비드에 결합됩니다. 그런 다음 파지 항체 라이브러리를 첨가하여 항원에 결합합니다. 여러 번 용출한 후, 친화도가 낮거나 비특이적인 파지는 세척되고, 특이 항체를 나타내는 파지는 남게 됩니다.