그림 1. Co-IP 분석법의 개략도.(참고 자료:) 공면역침전 분석법 - PubMed (nih.gov))

풀다운 분석법은 알려진 단백질을 자성 비드에 고정시키고 검출하고자 하는 물질을 첨가하는 방법입니다. 용출액에서 상호작용하는 단백질의 흡착 여부를 검출합니다.

1988년 Smith 등은 GST 융합 단백질을 정제했는데, 이는 풀다운 분석에 적용되었으며 GST 풀다운이라고 불립니다. 이 분석법은 표적 단백질에 GST 태그를 추가하고, GSH를 통해 상호작용하는 단백질을 포획하고, 결합을 평가하고, 웨스턴 블롯 분석을 통해 확인하는 방식입니다.

그림 2. GST 풀다운 분석법의 개략도.(참고 자료:) GST 풀다운 분석을 이용한 시험관 내 PIF4 결합 연구 - PubMed (nih.gov) )

웨스턴 블롯(WB) 실험은 항원과 항체의 특이적 반응을 이용하는 것으로, 기본 원리는 변성된 단백질을 SDS 폴리아크릴아미드 겔 전기영동으로 분리한 후, 습식 또는 반건식 전이법을 이용하여 고체상 담체(예: PVDF 막, NC 막)로 옮기는 것입니다. 블로킹(BSA, 버터밀크 등 사용) 후, 1차 항체를 적용하여 단백질에 특이적으로 결합시키고, 막을 세척한 후 형광 표지된 2차 항체를 첨가합니다. 2차 항체가 1차 항체와 결합하면 기질의 발색 및 화학발광을 통해 표적 단백질을 관찰할 수 있습니다. 일반적으로 특정 단백질이 시료에 발현되는지 여부를 확인하고 발현 수준을 대략적으로 분석하는 데 사용됩니다.

공동면역침전법(Co-IP)은 면역침전 실험을 기반으로 두 개 이상의 단백질 간의 상호작용 여부를 분석하는 기술입니다. GST 풀다운, 웨스턴 블롯, 크로마틴 면역침전 분석법 등 다른 단백질 상호작용 분석 기법과 비교했을 때, Co-IP 기술은 특이성, 민감도, 재현성이 뛰어나며, 비특이적 결합의 간섭을 피하고 단백질 상호작용을 자연 상태 그대로 반영합니다.