그림 1 Co-IP 분석의 개략도.(참고 출처:공면역침전 분석 - PubMed(nih.gov))

풀다운 분석법은 알려진 단백질을 자성 비드에 고정하고 검출할 물질을 첨가하는 방법입니다. 용리액은 상호작용하는 단백질의 흡착을 검출하는 데 사용됩니다.

1988년, 스미스 등은 풀다운 분석법에 적용된 GST 융합 단백질을 정제했는데, 이를 GST 풀다운이라고 합니다. 즉, 표적 단백질에 GST 태그를 추가하고, GSH를 통해 상호작용하는 단백질을 포획하고, 결합을 용출시킨 후, WB 분석을 통해 검증하는 것입니다.

그림 2. GST 풀다운 분석의 개략도.(참고 출처:PIF4 결합을 시험관 내에서 연구하기 위한 GST 풀다운 분석법 - PubMed(nih.gov))

WB 실험(Western Blot 실험 또는 Western Blot이라고도 함)은 항원과 항체의 특이적 반응으로, 기본 원리는 SDS 폴리아크릴아미드 겔 전기영동을 통해 변성된 단백질을 분리하고, 멤브레인 트랜스퍼(습식 또는 반건식 회전)를 통해 고체상 담체(예: PVDF 멤브레인, NC 멤브레인)로 옮깁니다. BSA, 버터밀크 등을 사용하여 블로킹한 후, 단백질에 특이적으로 결합하는 1차 항체를 적용하고, 필름을 세척한 후 플루오레세인으로 표지된 2차 항체를 첨가합니다. 2차 항체를 1차 항체와 결합시키면 기질 발색 및 화학 발광을 통해 표적 단백질을 관찰할 수 있습니다. WB 실험은 일반적으로 특정 단백질이 시료에서 발현되는지 확인하고 그 발현량을 대략적으로 분석하는 데 사용됩니다.

공동 면역침전 기술은 면역침전 실험을 기반으로 두 개 이상의 단백질 사이에 상호작용이 있는지 분석하는 데 사용됩니다. 다른 실험 기술(GST Pull-down, Western Blot, Chromatin 면역침전 분석법 등)을 통한 단백질 상호작용 분석과 비교할 때, Co-IP 기술은 특이성, 민감도, 반복성이 더 높아 비특이적 결합의 간섭을 피하고 자연 상태에서 단백질의 상호작용을 반영할 수 있습니다.