안정 세포주 구축 서비스

알파 라이프텍은 수년간 안정 세포주 구축 공정 개발 분야에 깊이 관여해 왔습니다. 300종 이상의 종양 세포와 일차 세포를 활용하여 완벽한 안정 세포주 구축 공정 플랫폼을 구축하여 과학 연구 또는 프로젝트 연구 시간을 단축하고 후속 생산을 용이하게 하는 동시에 안정 세포주를 제공할 수 있습니다. 알파 라이프텍은 또한 고객에게 균주 공정 개발, 균주 스크리닝, 균주 구축, 재조합 단백질 및 항체 생산과 같은 서비스를 제공하여 신약 개발의 연구 기반을 제공합니다.

알파 라이프텍은 렌티바이러스 감염 세포 플랫폼을 보유하고 있으며, 이를 통해 다양한 유형의 세포 안정 형질전환 균주에 맞춰 실험 과정을 맞춤 설정할 수 있습니다. 유전자 녹아웃 기술을 사용하여 CRISPR/Cas9 녹아웃 세포주를 구축했습니다. 유전자 과발현 및 유전자 침묵 기술을 사용하여 형질전환 균주를 안정화했습니다. 유전자 부위 특이적 통합을 통해 정점 통합 세포주 구축 서비스를 완료합니다.

안정된 세포주 구축 소개

안정 세포주란 외래 유전자를 숙주 세포 유전체에 통합시켜 외래 유전자가 숙주 세포 내에서 장기간 안정적으로 발현될 수 있도록 하는 세포주를 말합니다. 원리는 외래 유전자를 특정 내성을 가진 벡터로 환원시키고, 숙주 세포에 형질전환시킨 후, 외래 유전자를 숙주 염색체에 통합하고, 벡터에 포함된 내성 유전자를 스크리닝하여 실험 조건을 충족하는 표적 단백질의 고발현 또는 표적 유전자의 안정적인 발현 억제를 보이는 안정 세포주를 얻는 것입니다.

알파 라이프텍은 독립적인 보관 작업장과 완벽한 세포 동결 및 보관 관리 시스템을 갖추고 있으며, 300종 이상의 종양 세포와 일차 세포를 제공하여 귀하의 과학 연구에 전념하고 있습니다.

안정 세포주 구축 과정

안정한 세포주 구축 방법

안정적인 세포주 구축 방법에는 렌티바이러스 매개, 트랜스포존 매개, CRISPR/Cas9 매개 및 플라스미드 스크리닝이 포함됩니다.

렌티바이러스 매개 세포주는 안정적인 세포주를 구축하는 데 가장 일반적으로 사용되는 방법 중 하나입니다. 이 접근법은 거의 모든 유형의 세포를 감염시키고 유전 물질을 숙주 세포 유전체에 통합하여 장기간 안정적인 발현을 보장한다는 장점이 있습니다. 그러나 이 시스템에는 몇 가지 한계가 있으며, 렌티바이러스는 제한된 패키징 용량을 가지고 있어 긴 전사 영역을 가진 유전자의 전사에는 적합하지 않습니다.

렌티바이러스 매개 방식과 비교했을 때, 트랜스포존 매개 방식은 유전자 크기에 제한이 없으며, 기술의 지속적인 최적화를 통해 트랜스포존 삽입 효율이 몇 배나 향상되었습니다. 단점은 일차 세포에 대한 특정 제한과 세포 형질전환의 어려움입니다.

CRISPR/Cas9 매개 유전자는 크리스퍼 유전자 녹아웃과 크리스퍼 유전자 녹인으로 구성됩니다. 크리스퍼 유전자 녹아웃은 DNA 이중 가닥 절단을 유도하여 표적 유전자의 기능을 상실시키는 것을 의미합니다. 크리스퍼 유전자 녹인이란 외부 DNA 단편을 특정 유전자에 도입하여 결함 있는 유전자를 복구하거나 새로운 기능 유전자를 도입하는 것을 의미합니다.

플라스미드 스크리닝은 가장 기본적인 세포주 구축 방법으로, 표적 플라스미드를 세포 내로 성공적으로 형질전환하고 해당 내성을 장기 스크리닝에 활용하기만 하면 됩니다. 이를 통해 특정 확률로 안정적인 세포주를 확보할 수 있습니다.

다양한 안정 세포주를 구성하는 방법

중재 방법	렌티바이러스 시스템	트랜스포존 시스템	CRISP/Cas9 매개	플라스미드 스크리닝
캐리어 용량	5킬로바이트	10킬로바이트	5킬로바이트	10킬로바이트
중재된 효율성	높은	정상	정상	낮은
타임라인	1-2주	3-4주	3-4주	4-6주
이점	빠르고 효율적	보안 및 안정성	고정 소수점 통합	낮은 비용
결점	생물안전 위험	표현의 풍부함 정상	CAS9 전달은 어렵고 비용이 많이 듭니다.	낮은 효율성과 불안정성

안정적인 세포주 구축의 기술적 어려움

공정 규모 확장 전에 소형 생물반응기를 사용하여 가스, 배양액 시스템, 세포에 가해지는 최소 유체역학적 응력 등의 매개변수를 결정하여 규모 간 배양을 보장합니다. 그러나 해당 공정 매개변수가 결정되더라도 생산업체의 대형 생물반응기 환경은 불균일하며, 실패하기 쉽습니다. 알파 라이프텍은 공정 규모 확장 배양 분야에서 다년간 축적된 경험을 바탕으로 실수를 어느 정도 방지하고 위험을 줄이며 성공률을 크게 향상시킵니다. 동시에 알파 라이프텍은 사용되는 원료와 배지 배치의 일관성을 유지하여 세포 배양 공정 규모 확장의 실패율을 줄입니다.

알파 라이프텍은 생산 과정에서 세포주의 안정성을 보장하기 위한 포괄적인 안정형 세포주 공정 개발 플랫폼을 보유하고 있습니다. 또한, 고객의 니즈에 맞는 맞춤형 서비스를 제공해 드립니다.

안정 세포주 구축 서비스 내용

콘텐츠	타임라인
고객이 제공한 HEK293 세포주 배양.	3-5 개월
sgRNA-Cas9 플라스미드(스크리닝 유전자 G418 포함) 제작.
sgRNA-Cas9와 복구 DNA 템플릿은 HEK293 세포주에 공동 전달되었습니다.
단일클론 세포주 스크리닝(GFP 유전자 (긍정적인 클론을 발견했습니다).
배송: 벡터, GFP 유전자 녹인 균주, 시퀀싱 결과, 모든 원시 데이터, 실험 보고서