플라스미드를 제조하고 효모 세포를 배양하여 표적 단백질을 암호화하는 DNA를 합성하고, 유도성 프로모터, 신호 펩타이드, 그리고 표면 디스플레이 단백질(예: Aga2p)에 융합된 표적 유전자를 포함하는 효모 발현 벡터에 클로닝합니다. 표적 단백질을 암호화하는 유전자는 효모 세포벽 단백질(일반적으로 Aga2p)을 암호화하는 유전자와 융합될 수 있으며, 융합된 유전자는 전기천공법을 통해 효모 세포에 형질전환될 수 있습니다. 형질전환 후, 표면에 항체 유전자를 발현하는 효모 세포는 항원 특이적 스크리닝 시험을 받을 수 있습니다. 효모 라이브러리를 표적 항원과 함께 배양하고, 이에 특이적으로 결합하는 효모 세포를 선별합니다. 형광 활성화 세포 분류(FACS)를 사용하여 원하는 특성을 가진 단백질을 발현하는 효모 세포를 분리하면, 최대 라이브러리 크기가 약 10^8-10^9 효모 세포인 효모 디스플레이 라이브러리 스크리닝을 수행할 수 있습니다. 이후, 양성 클론을 분리하여 추가 분석이나 후속 연구에 활용할 수 있습니다. 항체 라이브러리에서 특정 항체 클론을 식별한 후에는 단백질 A/G 친화 크로마토그래피와 같은 기술을 사용하여 추가로 특성화하고 대량 생산하고 정제하여 효모 디스플레이 스크리닝 및 항체 생산의 전체 프로세스를 완료할 수 있습니다.

그림 2 효모 디스플레이 라이브러리 스크리닝 프로세스

형태적으로 선택적 나노바디의 신속한 발견을 위한 효모 표면 디스플레이 플랫폼 관련 문헌에서, 저자들은 효모 표면 디스플레이를 기반으로 하는 완전한 시험관 내 나노바디 발견 플랫폼을 구축했습니다. 먼저, 낙타 유전자를 기반으로 합성 나노바디 라이브러리를 설계했습니다. 그림 D는 나노바디의 카르복실 말단에 HA 태그를 부착하여 효모 세포벽에 공유 결합으로 고정한 것을 보여줍니다. 그림 E는 나노바디 스크리닝 과정을 보여줍니다. 항원 친화도를 가진 효모 나노바디를 분리, 증폭하고, FACS를 통해 항체를 반복적으로 선별했습니다. 저자들은 이 플랫폼을 통해 두 가지 다른 인간 GPCR을 표적으로 하는 형태적으로 선택적 나노바디를 발견했습니다.