플라스미드를 준비하고 효모 세포를 배양한 후, 표적 단백질을 코딩하는 DNA를 합성하여 유도성 프로모터, 신호 펩타이드, 그리고 표면 발현 단백질(예: Aga2p)에 융합된 표적 유전자를 포함하는 효모 발현 벡터에 클로닝합니다. 표적 단백질을 코딩하는 유전자는 효모 세포벽 단백질(일반적으로 Aga2p)을 코딩하는 유전자와 융합될 수 있으며, 융합된 유전자는 전기천공법을 통해 효모 세포에 형질전환될 수 있습니다. 형질전환 후, 표면에 항체 유전자를 발현하는 효모 세포는 항원 특이적 스크리닝 테스트를 거칠 수 있습니다. 효모 라이브러리를 표적 항원과 함께 배양하고, 항원에 특이적으로 결합하는 효모 세포를 선별합니다. 원하는 특성을 가진 단백질을 발현하는 효모 세포를 분리하기 위해 유세포 분석(FACS)을 사용하면, 최대 약 10⁸~10⁹개의 효모 세포로 구성된 라이브러리를 이용하여 효모 발현 라이브러리 스크리닝을 수행할 수 있습니다. 양성 클론은 추가 분석 또는 후속 응용을 위해 분리할 수 있습니다. 항체 라이브러리에서 특정 항체 클론이 확인되면, 단백질 A/G 친화성 크로마토그래피와 같은 기술을 사용하여 특성을 분석하고 대량 생산 및 정제함으로써 효모 디스플레이 스크리닝 및 항체 생산의 전체 과정을 완료할 수 있습니다.

그림 2. 효모 디스플레이 라이브러리 스크리닝 과정

구조적 선택성을 갖는 나노항체의 신속한 발굴을 위한 효모 표면 발현 플랫폼에 관한 문헌에서, 저자들은 효모 표면 발현 기반의 완전한 시험관 내 나노항체 발굴 플랫폼을 구축했습니다. 먼저, 낙타 유전자를 출발 물질로 하여 합성 나노항체 라이브러리를 설계했습니다. 그림 D는 나노항체의 카르복실 말단에 HA 태그가 부착되어 있음을 보여주고, 나노항체는 효모 세포벽에 공유 결합으로 고정됩니다. 그림 E는 나노항체 스크리닝 과정을 보여줍니다. 항원 친화성 나노항체를 가진 효모를 분리, 증폭하고 FACS를 이용하여 항체를 반복적으로 선별했습니다. 저자들은 이 플랫폼을 통해 서로 다른 두 가지 인간 GPCR을 표적으로 하는 구조적 선택성 나노항체를 발견했습니다.