Xizmeta Pêşxistina Antîkorên Monoklonal

Alpha Lifetech Inc.dikare pêşbîniya epîtopê, senteza peptîdê, îfadeya proteînê, hilberîna antîkorên polîklonal, an monoklonal û her weha paqijkirina antîkoran ji çanda hucreyê, şilava asîtê an tevahiya serumê peyda bike.

Alpha Lifetech Inc.di pêşkêşkirina karûbarên cûrbecûr ên xetên şaneyên stabîl ên wekî şaneyên hîbrîdoma, xetên şaneyên sererastkirina genomê, xetên şaneyên knockdown, û xetên şaneyên zêde-derbirînê de xwedî ezmûn e. Em hewl didin ku karûbarên xetên şaneyên pêşkeftî yên xwerû ji her xerîdar re pêşkêş bikin û karûbarên me îsbatkirî û pêbawer in.

Stratejiya Pêşxistina Antîbodî

1. Sêwirandin û amadekirina antîjenê
Ev antîjen dikarin proteîn, peptîd, an molekulên din bin. Sêwirandina îmûnojenan rêbazek berfireh hewce dike ku zanîna avahiya antîjenê, îmûnolojî û pergalên radestkirinê di nav xwe de digire. Alpha Lifetech xwedî teknolojiya sêwirana antîjenê ye ku dikare îmûnojenan ji bo xerîdarên hewcedar sêwirîne.
Alpha Lifetech berhemên proteîna rekombinant ji bo xerîdaran peyda dike ku hûn dikarin ji wan hilbijêrin. Em xwedî cûrbecûr pergalên îfadeya proteînê ne, wekî pergala îfadeya E. coli, pergala îfadeya hevîrtirşkê, pergala îfadeya baculovîrus-kêzikan, pergala îfadeya memikan, û hwd., da ku proteînên rekombinant ên ku hûn ji bo lêkolînê hewce ne hilberînin.

2. Vakslêdana heywanan
Alpha Lifetech dikare îmûnojenan ji xerîdaran re peyda bike, û heywanên îmûnî yên wekî mişk, kêvroşk, pez, alpaka, berazên gînê, hamster û hwd. hene ku hûn dikarin ji wan hilbijêrin.

3. Rêbazên hilberîna antîkorên monoklonal

●Hilberîna Mabs bi teknolojiya Hybridoma
Hîbrîdom şaneyek hîbrîd e ku bi hevgirtina du celeb şaneyan, ango xeta şaneya mîyeloma mişk û şaneyên plazmayê (lîmfosîta B) tê hilberandin, ku tê de şaneya heterozîgot dikare antîkorên berdewam li dijî antîjena balkêş di vitro de hilberîne. Hilberîna xeta şaneya hîbrîdomê ji sê beşan pêk tê: sêwirana antîjenê (hapten, molekulên piçûk û peptîd), îmûnîzasyona heywanan, hevgirtina şaneyan û ceribandina klona erênî. Bi karanîna rêbazên îmûnîzasyona bêhempa, em karîgeriya hevgirtina şaneyan a pir bilind (1-10 hîbrîdom ji her hezar şaneyên B) û tîterên antîkorên bilind bi dest dixin, rêjeya serkeftina me di testên analîtîk ên paşîn de ku ceribandina biyokîmyayî, ceribandinên li ser bingeha şaneyan di vitro de û lêkolînên heywanan vedihewîne, herî zêde dike.

●Hilberîna Mabs bi teknolojiya nîşandana fajê
Nîşandana fajê rêbazek din pêşkêş dike ji bo çêkirina antîkorên monoklonal. Lîmfosîtên B ji xwîna ajalan têne veqetandin û mRNAya wan tê derxistin. Bi rêya PCRê, ev mRNA vediguhere cDNAyê, ku hemî beşên VH û VL zêde dike. Dûv re ev beş li kêleka proteîna PIII ya bakteriyofajê dibin vektorek, bi gelemperî wekî perçeyên guhêrbar ên zincîra yekane (scFv). Piştre, ev avahî ji bo vegirtina E. coli tê bikar anîn, ku di encamê de bi rêya derzîkirinê bi fajek alîkar pirtûkxaneyek ku bi qasî 10^10 şaneyan dihewîne tê afirandin. Dûv re E. coli dikare bakteriyofajê ku beşên VH û VL wekî beşek ji qapaxa xwe vedihewîne derxe. Piştî vê yekê, beşên VH û VL yên taybetî yên ku antîjena balkêş hedef digirin dikarin werin hilbijartin û ji bo ji nû ve derzîkirina E. coli bi bakteriyofajê werin bikar anîn. Dûv re şaneyên ku plazmîdê dihewînin têne veqetandin û rêzkirin.

4.Pişkêşkirina Fusionê

●Yekbûn û Hilbijartina Xaneyan
Hucreyên B yên berhevkirî dû re bi hucreyên mîyelomê re têne yekkirin, ku ew hucreyên penceşêrê ne ku dikarin di kulturê de bêdawî zêde bibin. Yekkirin bi gelemperî bi karanîna teknîkek wekî yekkirina polîetîlen glîkol (PEG) tê bidestxistin.
Piştî yekbûnê, şaneyên hîbrîdomayê di navgînek bijartî de têne çandin ku tenê dihêle hîbrîdom sax bimînin. Navgîn bi gelemperî aminopterin dihewîne, ku pêşî li mezinbûna şaneyên mîyeloma yên neyekbûyî digire.

●Çavdêrîkirin û Girtin
Hucreyên hîbrîdoma yên ku çêdibin ji bo hilberîna antîkorên taybetî ji bo antîjena hedef têne kontrolkirin. Ev bi gelemperî bi karanîna teknîkên wekî ceribandina îmmunosorbent a girêdayî enzîmê (ELISA), Western blot, îmmunoprecipitation, û flow cytometry tê kirin.

Dema ku şaneyên hîbrîdomayê yên ku antîkorê hildiberînin têne destnîşankirin, ew têne klonkirin da ku nifûsek ji şaneyên wekhev çêbikin. Ev yek piştrast dike ku antîkorê ku ji hêla her şaneya hîbrîdomayê ve tê hilberandin wekhev e.

5. Verastkirina Fonksiyonel a Antîkorê
Alpha Lifetech ji bo destnîşankirina antîkorên monoklonal û piştrastkirina taybetmendiya antîkorê, girêdan û fonksiyonê, pejirandina fonksiyonel a antîkorê peyda dike, wekî Western blotting, îmmunohistochemistry, an ceribandinên fonksiyonel.

6. Optimîzasyona Antîbodî
Paqijkirina antîkoran ji supernatantê kulturê bi karanîna teknîkên wekî kromatografiya afînîteya proteîna A an proteîna G, û Alpha Lifetech jî dikare rêbazên guherandina antîkoran peyda bike da ku afînîteya antîkoran baştir bike.

7. Hilberîna antîbodî
Alpha Lifetech dikare antîkorên namzed ji bo sepanên pişkinîna bi rêjeya bilind û hilberîna di pîvana mezin de binirxîne.

pirsên pircarpirsên pircar

Pirs û Bersîvên Pir tên Pirsîn (FAQs) di derbarê pêşveçûna antîkorên monoklonal de

1

Meriv çawa hîbrîdoma fusion a rast hildibijêre?

Di dema pêvajoya hevgirtinê de, 10-15 plakayên mîkrotîter ên 96-qulî bi tevliheviya hîbrîda hevgirtinê têne çandin. Her plakek bi medyaya hilbijartinê ya HAT-IMDM tê xwarin û di înkubatorek karbondîoksîtê de di 37 pileya Celsius de tê parastin. 9-14 roj piştî hevgirtinê, supernatantên hîbrîd ji bo hebûna antîkorê taybetî yê balkêş têne ceribandin.
2

Meriv çawa karîgeriya hilbijartinê baştir dike?

Yekbûna şaneyên plazmayê bi hevpîşeyên wan ên mîyelomê re %100 bi bandor nîne. Tew di bin şert û mercên çêtirîn û teşwîqa herî bibandor de jî, yekbûna şaneyan hîn jî tevlîheviyek ji şaneyên neherikbar û hevgirtî çêdike ku divê werin veqetandin. Ji bo baştirkirina karîgeriya pêvajoya hilbijartinê, şaneyên mîyelomê yên ku ji bo yekbûnê têne bikar anîn, HGPRT, enzîmek sereke di rêça rizgarkirina nukleotîdê de, tune ne. Dûv re tevlîhev di navgînek HAT de hate çandin, ku tê de tenê şaneyên bi enzîma HGPRT, hîbrîdomên ku HGPRT ji şaneyên plazmayê mîras girtine, zindî bûn.
3

Meriv çawa xetên şaneyên hîbrîdomê ji bo çalakiya antîkoran lêkolîn dike?

Nirxandina cûrbecûrên hîbrîd gaveke girîng e. Bi gelemperî, ceribandina supernatantê ya hîbrîdoma, klon û subklonê bi rêya ceribandina îmmunosorbent a girêdayî enzîmê (ELISA), ceribandina Western blot, û rêzkirina hucreyên çalakkirî yên fluoresansê (FACS) tê peyda kirin. Em ê hilbijêrin ku hemî ceribandina supernatantê di laboratuwara xwe de bikin.
4

Rênimayên berfireh li ser çawaniya pêkanîna ceribandina çalakiya antîkoran pêşkêş bikin?

Supernatên hîbrîdoma ku werin ceribandin dikarin ji 500 heta 1440 nimûneyan bin û dê di rojên 9-14-an de ji bo ceribandinê amade bin. Em dikarin di nav sê-pênc rojan de derkevin holê an jî dibe ku hemî di heman rojê de amade bin, ji ber vê yekê girîng e ku laboratûara xerîdar bi hefteyan berê bi ceribandinên ceribandina duyemîn ên taybetî yên bijartî amade be.
5

Çima pêdivî ye ku hîbrîdomên pozîtîf werin subklonkirin?

Piştî ku di prosedûra destpêkê ya ceribandina ELISA de qulên pozîtîf hatin destnîşankirin, hîbrîdom ji bo amadekariya prosedûra binklonkirinê bo qebareyek mezintir, ango plakayên 24-qulî, hatin veguheztin. Binklonkirina hîbrîdoman bi gelemperî bi rêbaza şilkirina sînorkirî tê kirin da ku îzolekirina monoklonên stabîl were misoger kirin. Teknîk tê de şilkirina kulturên hîbrîdomê û belavkirina wan di nav plakayên 96-qulî de heye da ku monoklonalîte (yek şaneyek ji bo her qulî) were bidestxistin. Divê herî kêm du şilkirinên sînorkirî werin kirin da ku xetera pêşxistina nifûsên hîbrîdomên tevlihev kêm bibe.
6

Feydeyên bikaranîna teknolojiya hîbrîdomê ji bo kifşkirina antîkoran çi ne?

Xetên şaneyên hîbrîd ji bo şiyana xwe ya hilberîna antîkoran bi girêdan, aramî û taybetmendiyek bilind bi awayê herî lêçûn-bandor hatine pesinandin.