Affinity өлчөө платформасы
Octet жана Biacore-T2000 платформаларына негизделген Alpha Lifetech ишенимдүү жакындыкты аныктоо кызматтарын көрсөтө алат.
Бааны сураңыз01
Affinity өлчөө платформасы
Octet жана Biacore-T2000 платформасына негизделген Alpha Lifetech ишенимдүү аффиндүүлүктү аныктоо кызматтарын көрсөтө алат. Биз антителолор, клеткалар, белоктор, кичинекей молекулалар ж.б. сыяктуу бир нече үлгүлөр үчүн аффиндүүлүктү аныктоону камсыздай алабыз. Беттик плазмон резонансы (SPR) жана биокатмар интерференциясы (BLI) аффиндүүлүктү аныктоо сыяктуу ар кандай аффиндүүлүктү аныктоо ыкмалары бар.
Alpha Lifetech компаниясы ELISA менен аффиндүүлүктү аныктоону айкалыштырган кесипкөй жана так аффиндүүлүктү аныктоо платформасына ээ, бул дүйнө жүзү боюнча кардарлар үчүн кесипкөй, натыйжалуу, тез жана так аффиндүүлүктү аныктоо натыйжаларын берет. Кардарлар үчүн биз тандоо үчүн эки ыкманы сунуштай алабыз: Тез аффиндүүлүктү аныктоо жана Так аффиндүүлүктү аныктоо. Тез аффиндүүлүктү аныктоо - бул бир концентрацияда аныктоо, ал эми так аффиндүүлүктү аныктоо ар кандай концентрациялардын аффиндүүлүгүн өлчөй алат. Ар кандай кичинекей молекулалык кошулмалардын, пептиддердин, белоктордун, олигонуклеотиддердин жана олигомерлердин, ошондой эле липиддердин, бактериофагдардын, вирустардын жана клеткалардын ортосундагы өз ара аракеттенүүнү изилдөөгө колдонулат. Аффиндүүлүктү өлчөө платформасы аффиндүүлүктү дары-дармектерди текшерүү жана скрининг, антителолорду табуу үчүн негиз түзө алат жана кийинки изилдөөлөрдү жеңилдетет.
Байланыштуу жакындыкка киришүү
Аффиндүүлүк молекулалар аралык өз ара аракеттенүүлөрдү баалоодо, дары-дармектердин аффиндүүлүк анализдеринде жана дары-дармектерди скринингде маанилүү. Молекулалар аралык өз ара аракеттенүүлөрдү төмөнкү теңдемелер менен сүрөттөөгө болот: L + R = LR, мында L эркин лиганддарды, R байланышпаган рецепторлорду, ал эми LR байланышпаган лиганд-рецептор комплекстерин билдирет. Байланыш реакциялары молекулалар аралык өз ара аракеттенүүлөрдү аныктайт, мында реакция учурунда тең салмактуулукка жеткенге чейин байланышкан жана байланышпаган абалдардын ортосунда динамикалык алмашуу жүрөт. Муну реакциянын эки ылдамдык константасы, Kon (байланыш ылдамдыгынын константасы) жана Koff (диссоциация ылдамдыгынын константасы) менен сүрөттөөгө болот. Байланыш константасынын (Ka) тескери мааниси болгон Kd мааниси реакция аффиндүүлүгү үчүн маанилүү константа болгон Koff/Kon болуп саналат. Ошондуктан, эки молекуланын ортосундагы байланыш канчалык тыгыз болсо, аффиндүүлүк ошончолук жогору болот. Kd мааниси канчалык кичине болсо, тескерисинче. Бул теңдемени жарым логарифмдик графикте S формасындагы ийри сызык катары көрсөтүүгө болот, лиганддын концентрациясы x огунда (логарифмдик шкала огунда) жана бөлчөк чек арасы y огунда жайгашкан. Үзүк сызык 0,5 байланыш фракциясынын Kd (1 нМ) деги лиганддын концентрациясын көрсөтөт.
1-сүрөт: Клетканын бетиндеги рецепторго байланышкан лиганддын ар кандай концентрацияларынын сигмоидалдык байланыш ийри сызыгы. (Шилтеме булагы: Хантер С.А., Кокран Ж.Р. Белок-белок өз ара аракеттенүүсүнүн жакындыгын аныктоо үчүн клеткаларды байланыштыруу анализдери: технологиялар жана эске алуулар.)
Жакындыкты аныктоо ыкмалары
ELISA байланыш аффиндүүлүк анализи
Антителолордун жакындыгын изилдөө үчүн кеңири колдонулган ыкма ELISA ыкмасына негизделген, ал өзүнүн ыңгайлуулугу, ылдамдыгы, жөнөкөйлүгү, жогорку сезгичтиги жана күчтүү спецификасы менен мүнөздөлөт. Ал аз өлчөмдөгү реагенттерди (б.а., антителолор жана антигендер) колдонуп, тазалоочу реагенттерге муктаж болбостон, антителолордун жакындыгын өлчөй алат. Антигенди катуу бетке иммобилизациялоо жана аны негизги антитело аркылуу аныктоо менен, белгиленген экинчилик антитело негизги антитело менен реакцияга кирип, фермент менен байланышкан иммуносорбенттик анализдин (ELISA) окугучундагы маалыматтарды окуп жана талдайт.
2-сүрөт: Иштелип чыккан пептиддердин алардын буталарына байланышын баалоо үчүн ELISA сыяктуу анализдер. (Шилтеме булагы: Хажикаримлу, Марьям ж.б., 2022. SARS-CoV-2 беттик протеини S аныктоочу пептиддерди тез иштеп чыгуунун эсептөө ыкмасы.)
Беттик плазмон резонансы (SPR) байланыш аффиндүүлүгүн текшерүү
SPR технологиясы негизинен сынуу көрсөткүчүнүн өзгөрүшүн аныктайт. Салттуу оптикалык кубулуштардын жана жарыктын резонанстык кубулушунун жардамы менен биосенсордук чиптердеги лиганддар менен аналиттердин өз ара аракеттенүүсүн аныктоо үчүн биомолекулалардын өз ара аракеттенүүсү үчүн биосенсордук анализ технологиясын курууга болот. Биологиялык реакциялар учурунда SPR бурчтарынын динамикалык өзгөрүүлөрүн көзөмөлдөө аркылуу биомолекулалардын ортосундагы байланыштын жана өз ара аракеттенүүнүн өзгөчө сигналдарын алууга болот.
3-сүрөт: H10/AGR2 байланышынын беттик плазмондук резонанс (SPR) анализи. (Шилтеме булагы: Гарри, Каролина жана башкалар, 2018. Жаңы пептидди алдыңкы градиент гомологу 2ге (AGR2) каршы аныктоо, мүнөздөө жана колдонуу.)
Био катмардын интерференциясы (BLI) байланыш аффиндүүлүк анализи
Биопленканын интерференция технологиясы - бул негизинен молекулалар аралык өз ара аракеттенүүлөрдү комплекстүү сандык талдоо жана белоктун концентрациясын аныктоо үчүн колдонулган этикеткасыз, реалдуу убакыттагы мониторинг оптикалык аныктоо ыкмасы. Бул технология үлгүдөгү биопленканын калыңдыгындагы өзгөрүүлөрдү түздөн-түз аныктоо үчүн зондго негизделген биосенсорду колдонот. Интерференция спектринин жылышуу өзгөрүүлөрүн аныктоо менен, сенсордун бетинде өз ара аракеттенген биомолекулалардын ортосундагы байланыш жана диссоциация аныкталат жана интерференция спектринин реалдуу убакыттагы жылышуусу (нм) көрсөтүлөт.
4-сүрөт: aLDRG жана хитинолигосахариддердин ортосундагы биокатмар интерферометриясынын (BLI) анализи. (Шилтеме булагы: Ли, Бинг, 2023. LysM домендерине басым жасоо менен грибоктук симбиозго катышкан Armillaria sp. 541 ризоморфтору менен гифаларынын ортосундагы салыштырмалуу транскриптомдун өзгөчөлүктөрү.)
BLI жана SPR технологиясын салыштыруу
| Технологиянын аталышы | BLI (Био-катмар интерферометриясы) | SPR (Беттик плазмон резонансы) |
|---|---|---|
| Принцип | Сенсордун бетиндеги чагылган жарыктын интерференциялык схемасынын өзгөрүүлөрүн өлчөйт, биокатмардагы оптикалык калыңдыктын өзгөрүшү аркылуу молекулярдык өз ара аракеттенүүлөрдү аныктайт. Ал реалдуу убакыттагы байланыш ийри сызыгын (түз өлчөө) камсыз кылат. | Сенсордук чиптин бетине жакын жердеги сынуу көрсөткүчүндөгү сигналдын өзгөрүүлөрүн аныктоо менен молекулярдык өз ара аракеттенүүлөрдү өлчөйт (жарык алтын жана айнек интерфейси менен өз ара аракеттенишкенде, сынуу көрсөткүчүнүн өзгөрүшүнө алып келгенде пайда болот). Маалыматтар резонанс бурчунун өзгөрүшү катары чагылдырылат (кыйыр өлчөө). |
| Өндүрүүчү | Сарториус | GE |
| Аспап | ForteBio биосенсорлору | Ачык SPR аспабы |
| Система | ForteBio октет системасы (молекулярдык өз ара аракеттенүүнү талдоо үчүн) | TraceDrawer (Ridgeview Instruments, Швеция тарабынан иштелип чыккан) |
| Артыкчылыктары | 1. Кеңири үлгү шайкештиги, эң сонун туруктуулук, айрыкча кичинекей молекулаларды аныктоо үчүн (үлгү тазалыгына жана буфердик шарттарга карата атайын талаптар анча катуу эмес). SSA чиптери байланыштыруу изилдөөлөрү үчүн үнөмдүү. 2. SPRге салыштырмалуу тезирээк өткөрүү жөндөмдүүлүгү жана эксперименталдык убакыттын кыскалыгы. | 1. BLIге салыштырмалуу жогорку сезгичтикти сунуш кылган узак өнүгүү тарыхы. 2. Белгилүү бир колдонмолор үчүн, мисалы, жогорку жакындык жана спецификалуулук маалыматтарына ээ сейрек кездешүүчү же баалуу белокторду аныктоо сыяктуу жогорку тактык жана бекемдик. |
| Кемчиликтери | 1. Маалыматтардын тактыгы SPRге салыштырмалуу бир аз төмөн. 2. Аспапты кылдаттык менен тейлөөнү талап кылат. 3. SSA чипинин баасы салыштырмалуу жогору. | 1. Өтө кичинекей молекулаларды аныктоо үчүн буфердик шарттар татаал болушу мүмкүн, бул аныктоонун ийгиликсиз болуу коркунучун жогорулатат. 2. Чиптер, адатта, BLIде колдонулгандарга караганда кымбатыраак. 3. Узак мөөнөттүү эксперименттер учурунда үлгүнүн бууланышы көйгөй жаратышы мүмкүн. |
| Чиптин түрү | SSA чипи | NTA чипи |
Жакындыкты өлчөөнүн көлөмү
Аффиндүүлүктү аныктоо антиген-антитело (күчтүү антиген-антитело, алсыз антиген-антитело), белок-белок, белок-пептид, белок-кичинекей молекула жана белок ДНК/РНК (аптамер) түрлөрүн камтышы мүмкүн. КДны өлчөөдө молярдык концентрациялардын бирин билүү зарыл. Кичинекей молекулалар байланышканда, бир молекулярдык салмак 150 дальтондон кем болбошу керек.
| Түрү | Колдонуу чөйрөсү | Cактык чаралары |
|---|---|---|
| 1. Антиген-антитело | 10^-6дан 10^-12ге чейин | Көпчүлүк антителолордун Kd маанилери 10^-6-10^-7ден 10^-9га чейинки диапазондо болот. Жогорку аффиндүүлүктөгү антителолор 10^-9 чегинде, ал эми жогорку аффиндүүлүктөгү антителолор 10^-12 чегинде болот деп жалпысынан ишенишет. |
| 2. Белок - Кичинекей молекулалар | 10^-4төн 10^-5ке чейин | Кичинекей молекулалардын жана белоктордун KD 10^-4 жана 10^-5 ортосунда, ал эми 10^-3 жана 10^-7 кадимки көрүнүш жана 10^-10го жете албайт. Коваленттик кичинекей молекулалар 10^-10го жетиши мүмкүн. |
| 3. Авидин-Биотин | 10^-14 | Аффиндүүлүк оңой эле спецификалык эмес байланышка өтүшү мүмкүн, ал эми стрептавидин же дегликозилденген аффиндүүлүк колдонулушу мүмкүн. |
| 4. ДНК-белок | 10^-8ден 10^-10го чейин | Жогорку сапаттагы жана толук ДНК; электрофорездин таасиринен сактаныңыз. |
Жакындыкты аныктоо үчүн үлгү талаптары
| Үлгү | Талаптар |
|---|---|
| 1. Чоң молекулалык үлгү | Белок > 50 мкг, антитело > 100 мкг, биотинделген белок > 200 мкг; биотинсиз белок > 2 мг, тазалык талабы > 90%, буфердик эритме: PBS, HEPBS. Имидазол топторун камтый албайт; сапатты көзөмөлдөө талап кылынат. |
| 2. Кичинекей молекула үлгүсү | Саны >1 мг, порошок же суюктук түрүндө, суюктук сууда же DMSOдо эригич болушу керек. Глицерин, имидазол, трегалоза же башка туздарды камтыбаганга аракет кылыңыз; буферде Tris сыяктуу аминокислота топтору бар реагенттерден, көбүнчө PBS, HEPPS ж.б. органикалык реагенттерсиз колдонбогонго аракет кылыңыз. |
Көп үлгүлүү анализ
Alpha Lifetech антителолор, клеткалар, белоктор жана башка биомолекулалар сыяктуу ар кандай үлгүлөр үчүн аффиндүүлүк анализдерин бере алат.
Жетилген технологиялык платформа
Бизде спр байланыштыруучу анализ, bli байланыштыруучу анализ жана elisa байланыштыруучу анализ сыяктуу алдыңкы технологиялар бар.
Ийкемдүү долбоорду тандоо
Кардарлар тез жакындыкты аныктоо жана так жакындыкты аныктоонун ортосунда тандай алышат.
Жогорку тактыктагы натыйжалар
Биздин кесипкөй техникалык командабыз натыйжалуу, так жана ишенимдүү жакындыкты аныктоо натыйжаларын камсыздай алат.
Кейс-стадиИШ
BLI тез аффиндүүлүк анализинин антителосу жана аптамер аффиндүүлүк анализи
SA зондунун өзгөчөлүгү бар биотинделген аптамерлерди кармап, эритип алыңыз. Үлгүнү белгиленген концентрацияга чейин эритип, суюлтуңуз, зондго мүнөздүү кармалган Target 1-5 аптамерлерин катуулантыңыз жана сигнал каныккандан кийин үлгүгө байлаңыз. Андан кийин аларды 96 кудуктуу тарелкага кошуңуз.
5-сүрөт: 96 кудуктуу пластина үлгүлөрү үчүн аныктоо позицияларынын бөлүштүрүлүшү. B сенсорлорду тең салмактоо жана диссоциациялоо үчүн колдонулган буферди билдирет. L: Биотиндин максаты 1-5 аптамер, 221: Үлгү.
Маалыматтардын туруктуулугун жана тактыгын камсыз кылуу үчүн бургулоого көңүл буруңуз жана натыйжаларды алуу үчүн тиешелүү программаны коюңуз:
6-сүрөт: 1, 2 жана 3-максаттуу аптамерлердин жана үлгүлөрдүн ортосундагы өз ара аракеттенүүнүн схемасы. (CH 1 \ 3 \ 5 катып калган 1 \ 2 \ 3-максаттуу аптамер зонду менен үлгүнүн ортосундагы өз ара аракеттенүүнүн сигналын жана маалыматтарын билдирет.)
7-сүрөт: Максат 4 жана 5-аптамерлердин жана үлгүлөрдүн ортосундагы өз ара аракеттенүү схемасы. (CH 1 \ 3 катып калган Максат 4 \ 5 аптамер зонду менен үлгүнүн ортосундагы өз ара аракеттенүүнүн сигналын жана маалыматтарын билдирет.)
натыйжалар көрсөтөт
Төмөнкү натыйжалар алынды: Target 1 адаптеринин орнотулгандан кийинки үлгүгө жакындыгы 9,41 ^ -8 түзгөн; Target 2 адаптеринин орнотулгандан кийинки үлгүгө жакындыгы 8,32 ^ -8; Target 3 адаптеринин орнотулгандан кийинки үлгүгө жакындыгы 8,64 ^ -8; Target 4 адаптеринин орнотулгандан кийинки үлгүгө жакындыгы 3,70 ^ -8; Target 5 адаптеринин орнотулгандан кийинки үлгүгө жакындыгы 3,01 ^ -8.
Эгерде кандайдыр бир суроолоруңуз болсо, каалаган убакта биз менен байланышуудан тартынбаңыз.
Leave Your Message
2018-жылдын 16-июлунда 
0102