Антителолорду табуу платформасы

Alpha Lifetech компаниясы төмөнкү кызматтарды көрсөтө алат: VHH антителолорун аныктоо, scFv антителолорун аныктоо, Fab антителолорун аныктоо, фаг китепканасын куруу кызматы жана башка кызматтар.

БИЗ МЕНЕН БАЙЛАНЫШЫҢЫЗ

Фаг дисплей кызматы менен тааныштыруу

Фагдын дисплейи, фагдын ДНКсынын генетикалык модификациясына негизделген молекулярдык ыкма катары, бул фрагменттерди фагдын бетинде көрсөтүү жана ошентип көптөгөн варианттардан (китепканалардан) белгилүү бир байланыш касиеттерине ээ пептиддик/антитело фрагменттерин тандоо аркылуу белгилүү бир буталарга каршы молекулярдык зонддорду түзүү үчүн молекулярдык жактан күчтүү куралга айланды.

Alpha Lifetech компаниясы фаг дисплей антителолорун иштеп чыгууда он жылдык тажрыйбага ээ жана кардарларыбызга кесипкөй антитело китепканасын куруу жана скрининг кызматын көрсөтө алат. Кардарлардын муктаждыктарына ылайык, биз иммундук китепканалар, табигый китепканалар, синтетикалык китепканалар жана жарым синтетикалык китепканалар сыяктуу антитело китепканаларынын ар кандай түрлөрүн камсыздай алабыз. Антитело гендерин M13 сыяктуу фаг кабык белокторунун гендери менен бириктирген фаг дисплей китепкана технологиясы эң кеңири таралган рекомбинанттык антитело даярдоо технологиясы болуп саналат жана жогорку спецификалык антителолорду иштеп чыгууда кеңири колдонулат.

Alpha Lifetech альпаканы, ламаны, альпаканы жана акулаларды ж.б. иммундайт, алардын натыйжалуулугу 10^5ке жетет. Маалыматтардын аныктыгын жана аныктыгын камсыз кылуу үчүн биз кардарга натыйжалуулук сыноосунун отчетун жөнөтөбүз. Жергиликтүү китепканалардын уулуулугу төмөн жана иммуногендүүлүгү төмөн артыкчылыктары бар. Alpha Lifetechте жаныбарларды иммундабастан антителолорду түздөн-түз текшерүү үчүн колдонулушу мүмкүн болгон көптөгөн даяр жергиликтүү антитело китепканалары бар, ошону менен долбоордун убактысын кыскартат, кардардын сыноосунун жүрүшүн тездетет жана антителонун функционалдык бүтүндүгүн кепилдейт.

1-сүрөт: Фагдык дисплей принциби

Биздин Фаг Дисплей Системасы

M13/T4/T7 фаг дисплей системасынын негизги маалыматы 1-таблицада көрсөтүлгөн.

1-таблица. Фаг дисплейлеринин ар кандай түрлөрү жана алардын мүнөздөмөлөрү.
	M13	Т4	Т7
Геномдун өлчөмү	6407 б.п.	168895 б.п.	39937 б.п.
Протеинди көрсөтүү	pVI, pIII жана pVIII	SOC жана HOC	gp10B
Дисплейдин өлчөмү	>110 кДа pIII болуп саналат
Дисплейдин өлчөмү
Дисплей тыгыздыгы	pIIIде	SOC'то
Дисплей тыгыздыгы	VIII бетте	HOC'то
Жашоо цикли	Лизогения	Литик	Литик

Alpha Lfetech камсыздай алат

Фаг дисплейи генотип менен фенотипти бириктирип, селективдүүлүктү жана амплификацияны күчтүү скрининг мүмкүнчүлүктөрү менен айкалыштырат. Alpha Lifetech фаг дисплей антителолорун иштеп чыгуу үчүн кеңири кызматтарды көрсөтө алат.
Негизги кызматтарга төмөнкүлөр кирет: VHH антитело китепкана платформасы, scFv антитело китепкана платформасы, Fab антитело китепкана платформасы, фаг китепканасын куруу платформасы, фаг китепканасын скрининг платформасы жана антителолорду гумандаштыруу кызматы жана башка кызматтар.

антителолорду иштеп чыгуу - Alpha Lifetech

Сүрөт 2: Фаг дисплейин иштеп чыгуу кызматынын процесси

Фаг дисплей антителолорун иштеп чыгуу процесси

Биз жаныбарларды лабораториябызда экспрессияланган же кардарларыбыз тарабынан берилген белоктор, анын ичинде ар кандай макромолекулярдык белоктор, пептиддер жана мембраналык белоктор менен иммундай алабыз. ELISA натыйжалуулугун текшерүү аркылуу биздин изилдөөчүлөр альпакалардын канынан PBMC бөлүп алууну жана РНКны бөлүп алууну эң жакшы иммундаштыруу натыйжалары менен жүргүзүштү. Тескери транскрипция жана генди амплификациялоо аркылуу биз генди pMESC, pComb3XSS же pCANTAB 5E фаг векторлоруна курдук. TG1 E. coli компетенттүү клеткаларын электротрансформациялоо аркылуу китепкана сыйымдуулугу 10^9дан жогору болгон фаг антитело китепканаларын алууга болот. Чоң китепкана сыйымдуулугу бар антитело китепканалары жакшы ар түрдүүлүккө ээ жана аффиндүүлүккө ээ антителолорду табууга жардам берет. Антитело китепканасынын сапатын камсыз кылуу үчүн биз китепкананын сыйымдуулугун жана китепкананын киргизүү ылдамдыгын мүнөздөйбүз. Акырында, кардарларыбызга керектүү 30-50 ырааттуулукту камсыз кылуу үчүн китепканаларды ырааттуулукка келтиребиз. Андан кийин, биз фаг дисплей китепканасын скринингден өткөрөбүз. Алгач, антиген полипропилен микропластиналарына иммобилизацияланат жана скринингдин 3-5 раундунун жүрүшүндө алсыз байланыш жөндөмүнө ээ фаг-антителолор алынып салынат жана антигенге байланышкан спецификалык клондор сакталып калат. Фаг дисплейи үчүн оң клон алуу үчүн ELISA ыкмасы колдонулат, ал эми ачыткы дисплейи үчүн FACS ыкмасы клеткалардын белгиленген антигендерди колдонуп рекомбинанттык антитело фрагменттерин көрсөтүүсүн камсыз кылуу үчүн колдонулат. Скрининг аркылуу биз жогорку сезгичтикке, спецификалуулукка жана жогорку аффиндүүлүккө ээ антителолорду даярдайбыз.

Сүрөт 3. Фагдын дисплейиндеги антитело синтези процесси

Кызмат көрсөтүүнүн артыкчылыктары
КЫЗМАТ КӨРСӨТҮҮНҮН артыкчылыктары

Alpha Lifetech фаг дисплей технологиясына терең берилген жана кардарларга кеңири жана жакшыраак фаг кызматтарын көрсөтө алат.

Убакыт аралыгы жана жогорку натыйжалуулук

Биздин компания кыска убакыттын ичинде канааттандырарлык антителолорду издей алат; биз кардарлардын муктаждыктарына ылайык ар кандай антителолорду текшерүү эксперименттерин жүргүзө алабыз.

Жогорку продукт сапаты

Биздин компания кардарларга жогорку спецификалуулукка жана туруктуулукка ээ антителолорду даярдоого жардам берет, бул илимий изилдөөлөрдүн натыйжаларын көбөйтөт.

Ар кандай тандоолорду камсыз кылыңыз

Биздин компания көп түрдөгү (адам, чычкан, коён, альпака ж.б.) антитело китепканаларын жана ар кандай типтеги (scfv, Fab, VHH ж.б.) антитело китепканаларын кура алат.

Чоң сыйымдуулук

Биздин антитело китепканабыз 10^9дан ашык антителону камтыйт

Көп берилүүчү суроолор - Фаг дисплейинин жалпы көйгөйлөрү

Фаг дисплей суроолору ◢

С.
Фагдык дисплей технологиясы деген эмне?

А.
Фагды көрсөтүү технологиясы - бул бөтөн максаттуу генди фаг капсиддик белогунун белгилүү бир абалына киргизүү жана бөтөн генди фагдын кадимки функциясына таасир этпестен фагдын бетинде экспрессиялоо. Бир нече айлампа скринингден кийин, күчтүү спецификалуу жана жогорку биологиялык активдүүлүккө ээ максаттуу белок акыры алынды.
С.
Фагдык дисплей технологиясынын кандай артыкчылыктары бар?

А.
Бул технологияны колдонуу менен жогорку сыйымдуулуктагы антитело китепканаларын түзүүгө болот. Скрининг цикли кыска, операциялык процесс жөнөкөй жана колдонуу чөйрөсү кеңири, бул максаттуу пептиддер же белоктор үчүн оптималдуу ырааттуулуктарды аныктоого мүмкүндүк берет. Вируска байланыштуу колдонмолордо изилдөөчүлөр чоң антитело китепканаларын скринингдөө аркылуу маанилүү вирустук эпитопторго байланган антителолорду таба алышат. Бул процесс вирустардын кирүүсүнө, көбөйүшүнө же иммундук качуу механизмдерине тоскоол болуп, ошону менен ооруларды дарылоо үчүн негиз түзө алат.
С.
Гибридома технологиясы менен фаг технологиясынын ортосунда кандай айырма бар?

А.
Фаг-дисплей технологиясы гибридома технологиясына караганда кеңири колдонулат, ал белгилүү бир иммуногендерге каршы аз өлчөмдөгү антителолорду өндүрүү менен гана чектелет. Ал эми фаг-дисплей технологиясы ар кандай иммундук түрлөрдөн алынган антителолордун толук китепканасын көрсөтө алат.
С.
Фагдык дисплей технологиясынын колдонулушу кандай?

А.
Фаг-дисплей технологиясы кеңири колдонулат, анын ичинде патогендик микроорганизмдердин рецепторлорун текшерүү, белоктордун өз ара аракеттенүүсүн изилдөө, клеткалар ортосундагы сигналдардын берилишин көзөмөлдөө, жаныбарлардын ооруларын диагностикалоо жана вакциналарды иштеп чыгуу сыяктуу башка тармактар бар.
С.
Фагдык дисплей технологиясынын келечеги?

А.
Фагды көрсөтүү технологиясы көптөгөн артыкчылыктарды сунуштайт жана ар кандай тармактарда колдонулушу мүмкүн. Бирок, фагды көрсөтүү ыкмасын колдонуу менен рекомбинанттык антителолорду иштеп чыгуудагы негизги кыйынчылык - бул процесстин татаалдыгы жана баасы. Бул ыкма каалаган антителолорду аныктоо жана мүнөздөө үчүн мутация, клондоо жана экспрессияны камтыган молекулярдык биология ыкмаларын, ошондой эле иммунологиялык, биохимиялык жана биофизикалык анализдерди интеграциялоону талап кылат.

Антигенге байланыштуу суроолор ◢

С.
Антигенди презентациялоонун кандай ыкмалары бар?

А.
Антигендин презентациясы абдан маанилүү звено болуп саналат. Антигендин презентациясынын ыкмаларына негизинен түз капталган антиген презентациясы, кыйыр капталган антиген презентациясы, бүт клетканы скрининг аркылуу антиген презентациясы, липосомалар, нано-фосфолипиддик дисктер жана VLPлер аркылуу антиген презентациясы кирет.
С.
Антиген презентациясынын ар кандай түрлөрүнүн ортосунда кандай айырмачылыктар бар?

А.
Түз каптоо ыкмасы салыштырмалуу жөнөкөй, бирок антигендин конформациясын өзгөртүү оңой, ал эми кыйыр каптоо операциясы татаал, бирок ал антигендин конформациясын сактап, презентациянын натыйжалуулугун жогорулатат. Клетканы скринингдөө in vivo реалдуу көрүнүштү симуляциялай алат, бирок спецификалык эмес байланыш көйгөйү бар. Нано-фосфолипиддик диск кичинекей өлчөмдө, жогорку жеткирүү натыйжалуулугуна жана жакшы туруктуулукка ээ; VLPлер антиген менен биригип же антиген менен оролгон, бул жогорку иммуногендүүлүккө жана жакшы коопсуздукка ээ жана күчтүү иммундук жоопту козгой алат.
С.
Фагды дисплей технологиясынын скринингдик натыйжаларына антигендин концентрациясынын таасири кандай?

А.
Эгерде концентрация өтө төмөн болсо, фаг менен байланышуу ыктымалдыгы төмөндөйт, бул скринингдин натыйжалуулугун төмөндөтөт. Тескерисинче, өтө жогорку концентрация спецификалык эмес байланышуу ыктымалдыгын жогорулатып, фондук сигналды жогорулатып, оң клондорду аныктоого тоскоол болушу мүмкүн.
С.
Скрининг процессинде антигендин табигый конформациясын сактап калышын кантип камсыздай алабыз?

А.
Жогорку температурадан, күчтүү кислотадан жана щелочтон качуу үчүн жумшак фиксациялоо ыкмасын колдонсо болот. Антигендин түзүлүшүнө келтирилген зыянды азайтуу үчүн кыйыр каптоо ыкмасы жана биотин-стрептавидин системасы колдонулган. Эгерде антиген мембраналык белок болсо, аны бүтүн клеткалардын бетинде көрсөтүүгө же мембраналык чөйрөнү, мисалы, нано-дискти симуляциялоо үчүн анын табигый мембраналык белок конформациясын сактоо үчүн колдонсо болот.
С.
Фагдык дисплей технологиясы менен текшерилген антителолордун антигендерге байланышуу спецификасын кантип текшерүү керек?

А.
ELISA, Вестерн-блоттинг (WB) жана Иммунофлуоресценция (IF) сыяктуу кадимки эксперименттерден тышкары, антителолордун жана антигендердин байланышуу жана диссоциациялануу процесстерин реалдуу убакыт режиминде көзөмөлдөө үчүн беттик плазмон резонансы (SPR) жана биокатмар интерферометриясы (BLI) аныктоо ыкмаларын колдонсо болот, бул аффиндүүлүктү жана кинетикалык параметрлерди аныктоого мүмкүндүк берет.

Иммунитетке байланыштуу суроолор ◢

С.
Фаг дисплей технологиясында жаныбарлардын жалпы иммундук реакциялары кандай?

А.
Фаг дисплейи адамдар, чычкандар, келемиштер, коёндор, тооктор, төөлөр, альпакалар, уйлар, иттер, койлор, маймылдар жана акулалар сыяктуу антитело өндүрүүчү түрлөрдүн кеңири чөйрөсү үчүн жогорку аффиндүүлүктөгү моноклоналдык антителолорду түзүү үчүн колдонулушу мүмкүн.
С.
Фагды дисплей технологиясында ар кандай жаныбарлардын түрлөрүнөн алынган антитело китепканаларынын мүнөздөмөлөрү жана колдонулуучу сценарийлери кандай?

А.
Чычкан антитело китепканаларын куруу технологиясы жакшы калыптанган, үнөмдүү жана кыска эксперименталдык мөөнөткө ээ, бул аны алдын ала антителолорду текшерүү жана негизги изилдөөлөр үчүн ылайыктуу кылат. Коёндун антителолору күчтүү жакындыкты жана спецификалуулукту көрсөтөт, чычкан антителолору менен салыштырганда эпитопторду таануу диапазону кеңири. Адамдын антителолорун түздөн-түз адамдын антитело китепканаларынан алууга болот, ошону менен адам денесине гетерологиялык антителолор киргизилгенде пайда болушу мүмкүн болгон иммундук реакциялардын алдын алууга болот. Бул ыкма дары-дармектерди изилдөөдө жана иштеп чыгууда, айрыкча терапиялык антителолорду түзүүдө маанилүү мааниге ээ.
С.
Фагдарды көрсөтүү технологиясында колдонулган жалпы жаныбарлардын иммуногени деген эмне?

А.
Жаныбарлардын иммуногендери жалпысынан белок антигенине, полипептиддик антигенге, нуклеин кислотасынын антигенине жана патогенге байланыштуу антигенге бөлүнөт, алардын арасында патогенге байланыштуу антигенге вирус антигени (толук вирус бөлүкчөсү, вирус белогу, вирустун структуралык эмес белок ж.б.), бактериялык антиген (толук бактерия экстракты, клетка дубалынын компоненти, бөлүнүп чыккан белок, токсин ж.б.) жана мите антигени кирет.
С.
Иммундук жооп учурунда жаныбарлардын иммундук толеранттуулук маселесин кантип чечсек болот?

А.
Иммундук антигендерди рекомбинанттык белоктор менен алмаштыруу жана өрт өчүрүүчү вирус бөлүкчөлөрүн вирустардын структуралык белоктору менен алмаштыруу аркылуу иммуногендерди жөнгө салуу. Эксперименталдык дизайнды тууралоо жана иммундук дозаны өзгөртүү.
С.
Фагдык дисплей технологиясында иммуногендердин иммуногендүүлүгүн кантип жакшыртууга болот?

А.
Иммуногендүүлүктү антигендерди бодо малдын кан сары суусунун альбумини сыяктуу ташуучу белоктор менен байланыштыруу аркылуу күчөтүүгө болот. Мындан тышкары, Фройнддун адъюванттары жана алюминий адъюванттары сыяктуу иммундук адъюванттар in vivo жашоо убактысын узартуу жана иммундук клеткалардын активдешүүсүн жана көбөйүшүн стимулдаштыруу, ошону менен иммуногендүүлүктү жакшыртуу үчүн колдонулушу мүмкүн.

Китепкана курулушу боюнча суроолор ◢

С.
Фагдын антитело китепканасы деген эмне?

А.
Фагдын антитело китепканасы - бул антителолордон фаг векторлоруна өзгөрүлмө аймактык гендердин толук топтомун чогултуу жана аларды фагдардын бетинде экспрессиялоо жолу менен түзүлгөн ар түрдүү фаг антителолорунун жыйындысы. Бул процесс фагдын антитело китепканасынын пайда болушуна алып келет.
С.
Фаг антителолорунун китепканасын түзүү процесси

А.
Фагды көрсөтүүнүн жалпы процесси бир нече негизги кадамдарды камтыйт: иммундаштырылган жаныбарлардан перифериялык кандын мононуклеардык клеткаларын (ПККК) бөлүп алуу, жалпы РНКны бөлүп алуу жана аны комплементардуу ДНКга (кДНК) транскрипциялоо, полимераз чынжыр реакциясы (ПЧР) технологиясын колдонуу менен максаттуу генди күчөтүү, максаттуу генди фаг векторуна клондоштуруу жана векторду экспрессиялоо үчүн кожоюн клеткасына айландыруу. Бул процесс жогорку аффиндүүлүктөгү антителолорду тез аныктай алган фагды көрсөтүү китепканасын түзүүгө алып келет. Кийинчерээк, бул китепкана вакциналарды, терапиялык дары-дармектерди жана диагностикалык реагенттерди иштеп чыгуу үчүн баалуу ресурс катары кызмат кыла алат.
С.
Жогорку сапаттагы китепкананы куруунун негизги пункттары кайсылар?

А.

PBMCнин жалпы саны жетиштүү экенине ынаныңыз. РНКнын сапатын деградациясыз камсыз кылыңыз.

Трансформациялоочулардын жалпы санын камсыз кылуу үчүн, китепкананын сыйымдуулугу, адатта, теориялык ар түрдүүлүктүн 10дон 100 эсеге чейин болушу керек.
С.
Фаг антитело китепканасынын классификациялары кандай?

А.
Антитело китепканасынын булагына ылайык, фагдын антитело китепканаларын иммундук фагдын антитело китепканалары жана табигый фагдын антитело китепканалары деп бөлүүгө болот. Бул эки түрдүн ортосундагы негизги айырмачылык жаныбарлардын эмделгендигинде. Мындан тышкары, табигый антитело китепканаларын жарым синтез же синтез аркылуу түзүүгө болот.
С.
Фаг антителолорунун китепканасынын сапатын кантип баалоого болот?

А.
Антитело китепканасынын сапатын баалоо үчүн эки негизги көрсөткүч бар: сактоо сыйымдуулугу жана ар түрдүүлүк. Чоң сактоо сыйымдуулугу, жогорку ар түрдүүлүк менен айкалышып, жогорку аффиндүүлүккө жана спецификалуулукка ээ антителолорду натыйжалуу текшерүүнү камсыз кылат.

Китепкананын текшерүү суроолору ◢

С.
Фагдын антитело китепканасын текшерүү процесси кандай?

А.
Биологиялык элютриация процессинде дисплей китепканасы бекитилген бута менен инкубацияланат жана андан кийин реактивдүү эмес фагдарды алып салуу үчүн кеңири жуулат. Конъюгаттар, адатта, кислоталуу же жогорку туздуу эритме менен элюцияланат жана андан кийин байытуу үчүн ылайыктуу кожоюн клеткаларында күчөтүлөт. 3-5 раунддук скринингден кийин жогорку аффиндүүлүккө ээ антителолор алынат.
С.
Фаг антитело китепканаларын скринингдөө үчүн кандай ыкмалар колдонулат?

А.
Фагдык скрининг ыкмаларына негизинен катуу фазалуу паннинг, суюк фазалуу скрининг жана клеткалык скрининг кирет. Тиешелүү скрининг ыкмасын тандоодо максаттуу молекулалардын мүнөздөмөлөрүн, скрининг процессинин максаттарын жана лабораториялык чөйрөнү эске алуу керек.
С.
Фагдардын оң жана терс скринингдери кандай?

А.
Позитивдүү скрининг - бул максаттуу белокторго байланган фаг антителолорун скринингдөөнүн эң негизги ыкмасы. Терс скрининг спецификалык эмес антителолорду жок кылууга кызмат кылат. Фаг антителолорун скринингдөө процессинде, максаттуу антигендин этикеткасынын, материалдарынын же максаттуу антигенге структуралык окшоштуктары бар башка антигендердин кийлигишүүсүнөн улам спецификалык эмес антителолор аныкталышы мүмкүн. Мындай учурларда, терс скрининг скрининг процессинин натыйжалуулугун жогорулатат.
С.
Спецификалык эмес антителолорду текшерүүдөн кантип качуу керек?

А.

Ар кандай маркерлер менен белгиленген антигендер баштапкы скрининг үчүн артыкчылыктуу болушу мүмкүн, же спецификалык эмес антителолордун үлүшүн азайтуу үчүн терс скрининг колдонулушу мүмкүн.

Бул кырдаалды алдын алуу үчүн сиз тиешелүү пломбалоочу суюктукту алмаштырууну тандай аласыз же кезектешип ар кандай пломбалоочу суюктуктарды колдоно аласыз. Эгерде фондук клетка линиясын (CHO же HEK293) тааныган антитело текшерилсе, сиз скрининг же терс скрининг максаттары үчүн ар кандай фондук клетка линияларын алмаштыра аласыз.
С.
Алынган антителолорду кантип текшерип жана талдап чыгууга болот?

А.
Антителолорду текшерүү ыкмаларына, адатта, ELISA, Вестерн-блоттинг (WB), агым цитометриясы, иммунопреципитация (IP), иммунофлуоресценция (IF), иммуногистохимия жана башка ар кандай эксперименталдык ыкмалар кирет. Alpha Lifetech антителолорду аныктоодо кеңири тажрыйбага ээ жана кийинки эксперименттерде антителолордун натыйжалуулугун камсыз кылган кесипкөй эксперименталдык топко ээ.

Эгерде кандайдыр бир суроолоруңуз болсо, каалаган убакта биз менен байланышуудан тартынбаңыз.

Leave Your Message

Сунушталган кызмат