Антитело инженериясы деген эмне?

Антитело инженериясынын жардамы менен антителолордун молекулярдык өлчөмүн, фармакокинетикасын, иммуногендүүлүгүн, байланыштыруучу жакындыгын, өзгөчөлүгүн жана эффектордук функциясын өзгөртүүгө мүмкүн болду. Антителолорду синтездегенден кийин, антителолордун өзгөчө байланышы аларды клиникалык диагностикада жана дарылоодо абдан баалуу кылат. Антитело инженериясы аркылуу алар дары-дармек жана диагностикалык эрте өнүгүү муктаждыктарын канааттандыра алышат.

Антитело инженериясынын максаты - табигый антителолордун жасай албаган өзгөчө, туруктуу функцияларын долбоорлоо жана өндүрүү, терапиялык антителолордун өндүрүшүнө негиз салуу.

Alpha Lifetech, антитело инженериясындагы өзүнүн кеңири долбоордук тажрыйбасы менен, бир нече түрлөр үчүн ылайыкташтырылган моноклоналдык жана поликлоналдык антитело кызматтарын, ошондой эле фаг дисплейи антитело китепканасын куруу жана скрининг кызматтарын көрсөтө алат. Alpha Lifetech кардарларга сапаттуу биосимилярдык антителолорду жана рекомбинантты протеин продуктуларын, ошондой эле эффективдүү, жогорку спецификалык жана туруктуу антителолорду өндүрүү үчүн тиешелүү кызматтарды көрсөтө алат. Комплекстүү антителолорду, протеиндик платформаларды жана фагдарды көрсөтүү системаларын колдонуу менен биз антитело өндүрүшүнүн өйдө жана ылдый агымын камтыган кызматтарды, анын ичинде антителолорду гумандаштыруу, антителолорду тазалоо, антителолорду секвенирлөө жана антитело валидациясы сыяктуу техникалык кызматтарды көрсөтөбүз.

Антитело инженериясынын пионердик этабы эки технологияга байланыштуу:

--Рекомбинантты ДНК технологиясы

--Гибридома технологиясы

Антитело инженериясынын тез өнүгүшү үч маанилүү технология менен байланыштуу:

--Генди клондоо технологиясы жана полимераздык чынжыр реакциясы

--Белоктун экспрессиясы: Рекомбинантты белоктор ачыткы, таякча сымал вирустар жана өсүмдүктөр сыяктуу экспрессия системалары тарабынан өндүрүлөт.

--Компьютердин жардамы менен структуралык долбоорлоо

Антителолордун биринчи мууну химердик антителолорду өндүрүү үчүн гумандаштырылды, мында чычкандын моноклоналдык антителолорунун өзгөрмө аймагы адамдын IgG молекулаларынын туруктуу аймагы менен байланышкан. Экинчи муундагы чычкандын моноклоналдык антителосунун антигенди бириктирүүчү аймагы (CDR) адамдын IgGсине көчүрүлгөн. CDR аймагын кошпогондо, башка бардык антителолор дээрлик адамдын антителолору жана чычкан клонунун антителолорун адамды дарылоо үчүн колдонууда адамдын чычканга каршы антителолорунун (HAMA) реакциясын болтурбоо үчүн аракеттер жасалган.

 

Фаг дисплей китепканасын куруу үчүн биринчи кадам иммунизацияланган жаныбарлардын В клеткаларынан бөлүнүп алынышы мүмкүн болгон антителолорду коддоочу гендерди алуу (иммундук китепкананын курулушу), түздөн-түз иммунизацияланбаган жаныбарлардан (табигый китепкананын курулушу), ал тургай антителолордун ген фрагменттери менен in vitro чогултулган (синтетикалык китепкананын курулушу). Андан кийин, гендер ПТР аркылуу күчөтүлүп, плазмидаларга киргизилет жана ылайыктуу хост системаларында экспрессияланат (ачыткы экспрессиясы (көбүнчө Pichia pastoris), прокариоттук экспрессия (көбүнчө E. coli), сүт эмүүчүлөрдүн клеткасынын экспрессиясы, өсүмдүк клеткасынын экспрессиясы жана таякча сымал вирустар менен ооруган курт-кумурскалар клеткасынын экспрессиясы). Эң кеңири таралганы E. coli экспрессия системасы, ал фагга белгилүү бир коддоочу антитело ырааттуулугун бириктирет жана фаг кабыкчасынын белокторунун бирин (pIII же pVIII) коддойт. генинин синтези, Жана бактериофагдардын бетинде чагылдырылган. Бул технологиянын өзөгү фаг дисплей китепканасын куруу болуп саналат, анын табигый китепканалардан артыкчылыгы, ал белгилүү бир байланышка ээ болушу мүмкүн. Андан кийин антиген спецификасы бар антителолор биологиялык тандоо процесси аркылуу текшерилет, максаттуу антигендер фиксацияланат, байланышпаган фагтар кайра-кайра жуулат жана андан ары байытуу үчүн байланышкан фагтар жуулат. Кайталоонун үч же андан көп раундунан кийин жогорку спецификалуу жана жогорку жакындыктагы антителолор бөлүнүп алынат.

Fig 3: Антитело китепканасынын курулушу жана скрининги

Рекомбинантты ДНК технологиясы антитело фрагменттерин түзүү үчүн колдонулушу мүмкүн. Фаб антителолору алгач ашказан протеазасы аркылуу гана гидролиздениши мүмкүн (Fab ') 2 фрагменттерин, андан кийин фабдын жеке фрагменттерин түзүү үчүн алар папаин тарабынан сиңилет. Fv фрагменти дисульфиддик байланыштын жоктугунан туруктуулугу начар VH жана VLден турат. Демек, VH жана VL 15-20 аминокислотадан турган кыска пептид аркылуу биригип, молекулярдык салмагы болжол менен 25KDa болгон бир чынжыр өзгөрмө фрагменттин (scFv) антителосун түзүшөт.

Camelidae (Camel, LIama жана Alpaca) антителолордун түзүлүшүн изилдөө антителолордун оор чынжырга ээ жана жеңил чынжырлары жок экенин ачыктады, ошондуктан алар оор чынжыр антителолор (hcAb) деп аталат. Оор чынжырлуу антителолордун өзгөрмө домени 12-15 кДа өлчөмүндөгү бир домендик антителолор же нанободиялар же VHH деп аталат. Мономер катары алар дисульфиддик байланыштарга ээ эмес жана антигендерге өтө жогорку жакындыгы менен абдан туруктуу.

Fig 5: Оор чынжыр антитело жана VHH/ Nanobody

Клетканын эркин экспрессиясы in vitro протеин синтезине жетүү үчүн табигый же синтетикалык ДНКнын экспрессиясын колдонот, адатта E. coli экспрессия тутумун колдонот. Ал протеиндерди тез өндүрөт жана in vivo рекомбинантты протеиндерди көп санда өндүрүүдө клеткалардагы метаболизмдик жана цитотоксикалык жүктөн качат. Ал ошондой эле синтезделиши кыйын болгон протеиндерди чыгара алат, мисалы, которуудан кийин өзгөртүү же мембраналык белокторду синтездөө кыйын.