Антитело инженериясы деген эмне?

Антитело инженериясынын жардамы менен антителолордун молекулярдык өлчөмүн, фармакокинетикасын, иммуногендүүлүгүн, байланыш аффиндүүлүгүн, спецификалуулугун жана эффектордук функциясын өзгөртүүгө мүмкүн болду. Антителолорду синтездегенден кийин, антителолордун спецификалуу байланышы аларды клиникалык диагноз коюуда жана дарылоодо абдан баалуу кылат. Антитело инженериясы аркылуу алар дары-дармек жана диагностикалык эрте өнүгүү муктаждыктарын канааттандыра алат.

Антитело инженериясынын максаты - табигый антителолор жасай албаган өтө спецификалык, туруктуу функцияларды иштеп чыгуу жана өндүрүү, бул терапиялык антителолорду өндүрүүнүн пайдубалын түзүү.

Alpha Lifetech компаниясы антитело инженериясы жаатындагы кеңири долбоордук тажрыйбасы менен бир нече түр үчүн жекелештирилген моноклоналдык жана поликлоналдык антитело кызматтарын, ошондой эле фаг дисплей антитело китепканасын куруу жана скрининг кызматтарын көрсөтө алат. Alpha Lifetech кардарларга натыйжалуу, жогорку спецификалык жана туруктуу антителолорду өндүрүү үчүн сапаттуу биосимилярдык антителолорду жана рекомбинанттык белок продуктуларын, ошондой эле тиешелүү кызматтарды көрсөтө алат. Комплекстүү антитело, белок платформаларын жана фаг дисплей системаларын колдонуу менен биз антитело өндүрүшүнүн жогору жана төмөнкү агымын камтыган кызматтарды көрсөтөбүз, анын ичинде антителолорду гумандаштыруу, антителолорду тазалоо, антителолорду ырааттуулукка келтирүү жана антителолорду валидациялоо сыяктуу техникалык кызматтарды көрсөтөбүз.

Антитело инженериясынын алгачкы этабы эки технология менен байланыштуу:

--Рекомбинанттык ДНК технологиясы

--Гибридома технологиясы

Антитело инженериясынын тез өнүгүшү үч маанилүү технология менен байланыштуу:

--Гендерди клондоо технологиясы жана полимераз чынжыр реакциясы

--Протеин экспрессиясы: Рекомбинанттык белоктор ачыткы, таякча сымал вирустар жана өсүмдүктөр сыяктуу экспрессия системалары тарабынан өндүрүлөт.

--Компьютердин жардамы менен курулган конструкциялык долбоорлоо

Биринчи муундагы антителолор химердик антителолорду өндүрүү үчүн гумандаштырылган, мында чычкандын моноклоналдык антителолорунун өзгөрмөлүү аймагы адамдын IgG молекулаларынын туруктуу аймагы менен байланышкан. Экинчи муундагы чычкандын моноклоналдык антителосунун антиген байланыштыруучу аймагы (CDR) адамдын IgGсине көчүрүлгөн. CDR аймагынан тышкары, башка бардык антителолор дээрлик адамдын антителолору болуп саналат жана адамдарды дарылоо үчүн чычкандын клондук антителолорун колдонууда адамдын чычканга каршы антитело (HAMA) реакциясын индукциялоодон качуу аракеттери көрүлгөн.

 

Фаг дисплей китепканасын куруу үчүн, биринчи кадам - ​​антителолорду коддогон гендерди алуу, аларды иммундаштырылган жаныбарлардын В клеткаларынан бөлүп алууга (иммундук китепкана конструкциясы), иммундаштырылбаган жаныбарлардан түз алууга (табигый китепкана конструкциясы) же ал тургай антитело генинин фрагменттери менен in vitro чогултууга болот (синтетикалык китепкана конструкциясы). Андан кийин гендер ПЦР аркылуу күчөтүлөт, плазмиддерге киргизилет жана тиешелүү кожоюн системаларында (ачыткы экспрессиясы (адатта Pichia pastoris), прокариоттук экспрессия (адатта E. coli), сүт эмүүчүлөрдүн клетка экспрессиясы, өсүмдүк клеткаларынын экспрессиясы жана таякча сымал вирустар менен жуккан курт-кумурска клеткаларынын экспрессиясы) экспрессияланат. Эң кеңири таралганы - E. coli экспрессия системасы, ал фагга белгилүү бир коддогон антитело ырааттуулугун интеграциялайт жана фаг кабыгынын белокторунун бирин (pIII же pVIII) коддойт. Бактериофагдардын бетинде көрсөтүлүүчү , And генинин биригиши. Бул технологиянын өзөгү - фаг дисплей китепканасын куруу, ал табигый китепканаларга караганда өзгөчө байланышка ээ болушу мүмкүн экендиги менен артыкчылыкка ээ. Андан кийин, антигенге спецификасы бар антителолор биологиялык тандоо процесси аркылуу текшерилет, максаттуу антигендер фиксацияланат, байланышпаган фагдар кайра-кайра жуулуп, байланышка чыккан фагдар андан ары байытуу үчүн жуулуп кетет. Үч же андан көп кайталоодон кийин жогорку спецификасы бар жана жогорку аффиндүүлүккө ээ антителолор бөлүнүп алынат.

3-сүрөт: Антитело китепканасын түзүү жана скрининг

Рекомбинанттык ДНК технологиясы антитело фрагменттерин түзүү үчүн колдонулушу мүмкүн. Fab антителолору башында ашказан протеазасы тарабынан гана гидролизденип, (Fab') 2 фрагменттерин пайда кылат, андан кийин алар папаин тарабынан сиңирилип, жеке Fab фрагменттерин пайда кылат. Fv фрагменти VH жана VLден турат, алар дисульфиддик байланыштардын жоктугунан улам начар туруктуулукка ээ. Ошондуктан, VH жана VL болжол менен 25KDa молекулярдык салмагы бар бир чынжырлуу өзгөрмө фрагмент (scFv) антителосун түзүү үчүн 15-20 аминокислотадан турган кыска пептид аркылуу бири-бирине туташат.

Камелидалардын (Camel, LIama жана Alpaca) антителолордун түзүлүшүн изилдөө антителолордун оор чынжырлары гана бар экенин жана жеңил чынжырлары жок экенин аныктады, ошондуктан алар оор чынжырлуу антителолор (hcAb) деп аталат. Оор чынжырлуу антителолордун өзгөрүлмө домени бир домендүү антителолор же наноденелер же VHH деп аталат, алардын өлчөмү 12-15 кДа. Мономерлер катары аларда дисульфиддик байланыштар жок жана алар абдан туруктуу, антигендерге өтө жогорку жакындыкка ээ.

5-сүрөт: Оор чынжырлуу антитело жана VHH/нанободи

Клетканын эркин экспрессиясы in vitro белок синтезине жетүү үчүн табигый же синтетикалык ДНКнын экспрессиясын колдонот, адатта E. coli экспрессия системасын колдонот. Ал белокторду тез өндүрөт жана in vivo рекомбинанттык белокторду көп өлчөмдө өндүргөндө клеткаларга зат алмашуу жана цитотоксикалык жүктү болтурбайт. Ошондой эле, ал синтездөө кыйын болгон белокторду, мисалы, трансляциядан кийин же мембраналык белокторду синтездөөдөн кийин өзгөртүү кыйын болгон белокторду өндүрө алат.