Officium Analyseos Interactionis Proteinorum-Proteinorum
Alpha Lifetech etiam clientibus probationes proteinorum, analysin interactionis proteinorum, probationes interactionis proteinorum inter proteinos (CO-IP, Western Blot, probationes immunopraecipitationis Chromatin), et probationes functionis proteinorum praebere potest ut necessitatibus experimentalibus variorum clientium satisfaciat.
CONTACTA NOS01
Officium Analyseos Interactionis Proteinorum-Proteinorum
Alpha Lifetech, per multos annos in probationibus proteinorum penitus implicata, solidam basim ad functionem proteinorum examinandam construxit, et varia media technica ad interactionem proteinorum verificandam periit, quae tempus investigationi scientificae vel investigationis proiecti servare potest, simul stabiles eventus praebens.
Alpha Lifetech etiam clientibus probationes proteinorum, analysin interactionis proteinorum, probationes interactionis proteinorum inter proteinos (CO-IP, Western Blot, probationes immunopraecipitationis Chromatin), et probationes functionis proteinorum praebere potest ut necessitatibus experimentalibus variorum clientium satisfaciat.
Introductio ad Examen Interactionis Inter Proteina et Proteina
Proteina sunt moleculae exsecutivae gravissimae in omni forma vitae, quae instructionibus in materia genetica conditis respondent. Saepe proteina munera sua perficiunt quasi actores qui cum aliis proteinis interagunt, quod evidentius apparet cum functio proteini in contextu reali cellulae examinatur. Identificatio interactionum inter proteinas maximi momenti est ad investigationem biochemicam singularis proteini. Analysis interactionum proteinorum generum communium sic se habet:
Examen Co-immunopraecipitationis
Principium methodi co-immunopraecipitationis est miscere proteinum destinatum, anticorpus specificum, et globulos magneticos proteini A/G ad incubationem, supernatans proteini non ligati per adsorptionem globulorum magneticorum in craticula magnetica abicitur, et globuli magnetici lavantur ad proteinum et alias impuritates removendas nisi specifice ligati sint.
Fig. 1 Schema experimentorum Co-IP.(Fons referentiae:) Examen coimmunopraecipitationis - PubMed (nih.gov))
Examen detractionis deorsum
Experimentum detractionis est proteinum notum in globulo magnetico figere et substantiam detegendam addere. Eluens detegitur ad adsorptionem proteinorum interagentium.
Anno MCMLXXXVIII, Smith et al. proteinum fusionis GST purificaverunt, quod in experimentis "pull-down" adhibitum est et "Gst pull down" appellatur, id est, signum GST proteino scopo addere, proteinum interagentem per GSH capere, nexum eluere, et per experimentos WB verificare.
Fig. 2 Schema experimentorum GST deorsum spectantium.(Fons referentiae:) Examen GST Pull-Down ad Studium Ligaminis PIF4 In Vitro - PubMed (nih.gov) )
Propositum eius est iones metallicos ut nickel vel cobalt ut medium adhibere, proteinum per chromatographiam affinitatis purificare, et nexum per experimentum WB ad verificationem eluere.
Praeterea, sunt probationes DNA Pull-down (Protein DNA binding assay), RNA Pull-down (Protein RNA interaction assay), et parvae moleculae pull down.
Methodus "DNA Pull-down" (Analysis ligationis DNA proteinorum) est methodus "in vitro" ad ligationem DNA proteinorum determinandam. Utrum proteina specifica cum DNA scopo ligantur, per probationes WB detecta est; fragmenta DNA ignota cum proteinis ligantur, quae fragmenta DNA per detectionem MS cognoscuntur.
Methodus "RNA Pull-down" (examen interactionis RNA inter proteinos) est methodus "in vitro" ad determinandam ligationem RNA cum proteinis. Utrum proteina specifica cum RNA scopo ligantur, per probationes WB detecta est; fragmenta RNA ignota cum proteinis ligantur, quae fragmenta RNA per detectionem MS nota sunt.
Deductio SM (experimenta deductionis moleculorum parvorum) proteinas destinatas invenire potest quae specifice ad moleculas parvas ligant, et cum MS coniuncta, proteinas destinatas moleculorum parvorum accurate examinari possunt, quae in methodum notationis *in vitro* et methodum biologicam orthogonalem dividi possunt.
Experimentum WB
Experimentum WB (etiam experimentum Western Blot vel Western blot appellatum) essentia est reactio specifica antigeni et anticorporis. Principium fundamentale est separare proteinas denaturatas per electrophoresis in gel polyacrylamidico SDS et transferre eas ad vectorem phasis solidae (velut membranam PVDF, membranam NC) per translationem membranae (rotationem humidam vel semi-siccam). Post obstructionem (ut BSA, lac butyri, etc.), anticorpus primarium applicatur ut specifice proteino ligetur, et anticorpus secundarium fluoresceino notatum additur post lavacrum pelliculae. Ligando secundum anticorpus cum anticorpore primario, proteinum destinatum observari potest per evolutionem coloris substrati et chemiluminescentiam. Generaliter adhibetur ad determinandum utrum proteinum specificum in exemplo exprimatur et ad gradum expressionis eius approximate analysandum.
Comparatio Methodi Interactionis Proteinorum-Proteinorum
Experimenta "pull-down" proteinorum similia sunt experimentis Co-IP, quae ambae ad detectionem experimentorum interactionis proteinorum pertinent. Differentia inter has duas methodos est quod experimentis Co-IP proteinas interagentes proteinorum notorum obtinentur, quod authenticitatem quandam habet, sed non potest confirmari utrum proteinae interagentes directe an indirecte interagant. Experimenta "pull-down" adhibentur ad inveniendum proteinum ignotum cum proteino noto interagentem. Directe confirmari potest utrum proteinum notum cum proteino detecto interagat, sed condicionem nexus "in vivo" cognoscere non potest.
Technologia co-immunopraecipitationis ad analysandum utrum interactio inter duas pluresve proteinas exstet, secundum experimenta immunopraecipitationis, adhibetur. Comparata cum aliis technicis experimentalibus analysis interactionis proteinorum (GST Pull-down, Western Blot, Chromatin immunopraecipitation assay, etc.), technologia Co-IP maiorem specificitatem, sensibilitatem, et repetibilitatem habet, quae impedimentum nexus non specifici vitare et interactionem proteinorum in statu naturali reflectere potest.
| GST detrahe | Co-IP | WB | |
|---|---|---|---|
| Commodum | *Facile ad operandum *Aptum ad purificationem variarum proteinarum | *Ad analysin interactionis in vivo *Cum proteino subsequenti identificari potest. | *Specificitas fortis *Qualitativa et quantitativa in vitro |
| Limitatio | *Fortasse nexus non specificus *Ulterior validatio interactionis requiritur. | *Magna dependentia ab anticorporibus *Nexus non specificus fieri potest | *Tempus consumens *Difficile ad usum ad analysin proteinorum magnae scalae |
| Exemplum Applicationis | *Interactiones cognoscere *Complexus proteinicus purificatus | *Studium transductionis signorum *Mechanismus morbi | Analysis subsequens interactionum inter proteinum, inter proteinum et DNA, et inter proteinum et RNA |
Adaptus
Officia ad necessitates tuas accommoda
Experientia
Anni experientiae in productione proteinorum
Technologia
Resultatus traditionis altae qualitatis
Processus Experimenti
Strictus processus administrationis qualitatis
Si quas quaestiones habeas, libenter nobiscum quovis tempore communicare potes.
Leave Your Message
XVI Iulii MMXVIII 
0102