Suggestus Separationis Singularum Cellularum B

Anticorpus monoclonale (mAb), ut pioner medicamentorum anticorporum, plus quam centum anticorpora monoclonalia ad curationem cancri et morborum infectiosorum, in proprio mercato evolutionis medicamentorum probata sunt, et singularem valorem therapeuticum ostendunt. Technologia anticorporis singularum cellularum B, ut nova generatio technologiae evolutionis anticorporis, efficaciter et celeriter anticorpora ex singulis cellulis B separare potest, quod magnum incrementum in technologia productionis anticorporis post hybridoma et exhibitionem phagicam constituit. Technologia separationis singularum cellularum B ad generationem anticorporum contra multas species, ut cuniculos, mures, camelos, oves et gallinas, adhiberi potest. Technologia singularum cellularum B commoda insignes habet, ut specificitatem magnam, activitatem magnam et affinitatem magnam. Alpha Lifetech, in suggestu separationis singularum cellularum B innixa, commoda in tempore examinationis et acquisitione anticorporum altae qualitatis habet. Designationem, synthesim et modificationem antigeni, immunitatem animalium, examinationem locupletationis singularum cellularum B, sequentiationem singularum cellularum, examinationem magnae capacitatis, expressionem et purificationem praebere potest, officia technica uno loco, ut verificationem functionalem, ut variis necessitatibus clientium satisfaciat.

Summarium Technicarum Examinationis Singularum Cellularum B

Methodi examinandi singulas cellulas B imprimis in methodos isolationis fortuitam et isolationem antigenselectivam dividuntur. Separatio fortuitā ad exempla cum alta concentratione isolationis antigenselectivae adhibetur, et solae cellulae B separantur. Simplex est ad operaturum sed multum laboris requirit, et saepe ut primus gradus separationis antigeni-specificae adhibetur. Methodus separationis antigeni-specificae apta est condicionibus ubi contentum anticorporum specificorum, ut anticorporum antitumoralium et anticorporum autoimmunium, parvum est. Relative complexum est cellulas B specificas isolare utens principio immunologico ligationis specificae antigeni et anticorporis ad originalem. Methodus classificationis vulgo adhibita eiusque commoda et incommoda in tabula monstrantur.

	Aditus	Commoda	Incommoda
Fortuitus Separatio	Micromanipulatio	Requisita instrumentorum humilia Operatio simplex	Efficacia humilis Genera limitata cellularum isolatarum
	Microdissectio capta laserica	Alta accuratio positionis Operatio simplex Cellulas similes ex exemplo visualiter elige et impuritates remove.	Processus complicatus praeparationis speciminis Incapacitas ad automationem
	Classificatio cellularum fluorescentia activata	Alta accuratio et efficacia Gradus automationis altus Lata applicatio	Operatio complicata Altae necessitates instrumentorum
Isolatio Selectiva Antigeni	Antigena fluorochromo notata per multiparametrum	Alta accuratio et efficacia Gradus automationis altus Altae capacitatis et multiparametri Facultas isolandi cellulas B in variis stadiis	Operatio complicata Altae necessitates instrumentorum
	Granae magneticae antigeno obductae	Operatio simplex Alta repetibilitas Cellulas B destinatas locupletare potest	Operatio complicata Granae magneticae activitatem biologicam cellularum afficiunt et culturae et operationi post isolationem non favent.
	Microgravura	Alta efficacia Celeritas Alta	Altae necessitates instrumentorum Efficacia humilis
	Examen immunospot matriceale in microplagula	Gradus automationis altus Alta accuratio et efficacia	Operatio complicata Sumptus altus

Processus Servitii Anticorporum Scrutationis Singularum Cellularum B

Immunizatio animalium

Antigenum idoneum animalibus experimentalibus (ut muribus, cuniculis, etc.) ad stimulationem immunitatis elige, ut anticorpora specifica contra antigenum producere possint.

Immunizatio animalium est stadium initiale generationis anticorporum. Immunizatio animalium est usus mechanismi responsus immunis humoralis ipsius organismi; per continuam stimulationem antigenorum, animalia responsum immune fortem producunt, deinde anticorpora specifica contra antigena specifica secernunt.

Collectio et locupletatio cellularum B

Cellulae B e sanguine peripherico, splene, aut nodis lymphaticis animalium immunium isolatae sunt. Hae cellulae B immunologice stimulatae sunt ad anticorpora contra antigena specifica producenda.

Methodis physicis vel chemicis (velut centrifugatione gradientis densitatis, separatio globulorum magneticorum, etc.) locupletatio cellularum B, remotio cellularum impuritatum, auctio puritatis cellularum B et efficacia separationis subsequentis.

Fig. 1 Clonatio et praeparatio anticorporis monoclonalis leporini. Fons referentiae:Clonatio Singularum Cellularum B et Productio Anticorporum Monoclonalium Leporinorum.)

Separatio cellularum B

Selectio Cellularum Fluorescentia Activata (FACS), Separatio Cellularum Magnetica (MACS), Selectio Cellularum Microfluidica (MCS), vel aliae technicae examinationis altae capacitatis, cum notatione antigeno-specifica coniunctae, adhiberi possunt ad examinandas singulas cellulas B ex cellulis B locupletatibus ad producenda anticorpora destinata.

Cum singula cellula B ex multitudine cellularum B mixta separatur, gena eius anticorporum per technologiam sequentiationis cellularum singularum sequendi et analyzandi sunt ut informationes sequentiae DNA regionis variabilis catenae gravis (VH) et regionis variabilis catenae levis (VL) obtineantur. Technologia sequentiationis cellularum singularum praecipue tres gradus comprehendit: isolationem cellulae singularis, amplificationem acidi nucleici intracellularis et analysin sequentiationis. Principium sequentiationis cellularum singularum est amplificare vestigia totius genomi DNA vel RNA cellularum singularum separatarum ut genomum completum vel transcriptoma cum alta cobertura pro sequentiatione magnae capacitatis obtineatur.

Per examinationem magnae capacitatis, sequentiae genorum anticorporum milium cellularum B uno tempore obtineri possunt, celeritatem inventionis anticorporis magnopere accelerantes. Hae informationes sequentiarum ulterius ad constructionem et examinationem bibliothecae anticorporum adhiberi possunt.

Fig. 2 Schema capturae singularum cellularum B, constructionis bibliothecae, examinationis altae capacitatis et sequentiationis.(Fons referentiae:) Sequentiatio receptorum cellularum B singularum ingentis parallelae celerem inventionem diversorum anticorporum antigeno-reactivorum permittit.(.)

Amplificatio genorum anticorporum

Una cellula B finditur ad mRNA liberandum. Deinde, sequentiae cDNA regionis variabilis catenae gravis (VH) et regionis variabilis catenae levis (VL) per reactionem concatenationis polymerasis cum transcriptione reversa (RT-PCR) amplificatae sunt.

Expressio et purificatio anticorporum

Genum regionis variabilis amplificatum in plasmidum vectoris cum gene regionis constantis insertum est ad plasmidum expressionis anticorporis monoclonalis construendum. Deinde, systema expressionis idoneum (systema expressionis eukaryoticum, ut cellulae CHO, vel systema expressionis prokaryoticum, ut Escherichia coli) ad expressionem electum est, et anticorpus monoclonale cum activitate biologica obtinetur. Chromatographia affinitatis proteini A adhibita est ad anticorpora expressa ex cultura cellularum extrahenda et purificanda et ad anticorpora monoclonalia recombinantia altae qualitatis obtinenda.

Validatio anticorporum

Validatio specificitatis, affinitatis et activitatis biologicae ab anticorporibus per ELISA, Western blot, Flow Analysis, et immunopraecipitationem ad confirmandum effectum anticorporum exspectationes implere. Validatio anticorporum est gradus clavis ad qualitatem et fidelitatem anticorporum confirmandam.

Requisita pro immunogeno

(1) Proteinum recombinans: ≥2.5 mg, puritas proteini >85%, pondus moleculare proteini maius quam 10 kDa, concentratio proteini solubilis inter 0.5 et 5 mg/mL. Si purificatio affinitatis antigeni requiritur, 10 mg proteini recombinans additicii requiruntur.

(2) Polypeptida et moleculae parvae: Peptidum nudum ≥10 mg, puritas peptidi >90%, non minus quam 10 AA, copulatio KLH/BSA/OVA vel aliarum proteinarum vectorum; Moleculae parvae aestimationem structurae antea requirunt.

Ordo Operariorum Servitii Separationis Singularum Cellularum B

Gradus	Contenta Servitii	Chronologia
Gradus 1: Immunizatio animalium et detectio ELISA	(1) Animalia quater vel quinquies immunizata sunt, a quarta dosi incipientes, serum collectum est ad ELISA detectionem tituli anticorporum (titulus sericus ELISA antigeni proteinici >10^5; titulus sericus ELISA antigeni peptidici >10^4). Simul, 0.1ml seri ante immunizationem et post immunizationem clientibus ad examinandum mittuntur; si titulus non idoneus est, immunizatio continuabitur vel cliens finem incepti postulabit, et sola pars immunizationis imputabitur; (2) Si titulus qualificatus erat, cellulae PBMC ex sanguine toto isolatae sunt.	Hebdomades decem vel duodecim
Gradus II: Ordinatio singularum cellularum B	(1) Lien collectus est, suspensio singularum cellularum B praeparata est, sanguis periphericus collectus est, et cellulae PBMC isolatae sunt. (2) Indices immunoantigenorum FITC et AF648. (3) Duplici fluorescentia fluxus segregatio + cultura clonorum singularum cellularum B. (4) ELISA identificatio + sequentiatio clonorum positivorum.	Duae vel tres hebdomades
Gradus III: Expressio et validatio anticorporum	(1) Synthesis genorum 6-10 sequentiarum + validatio probationis expressionis mammalium. (2) Identificatio ELISA.	Hebdomades tres vel quattuor
Gradus IV: Traditio	(1) Sequentiae anticorporum: 4-6 sequentiae anticorporum (sequentiae non expressae simul traduntur). (2) Quaeque sequentia expressa 0.2mg anticorporis praebuit. (3) Relatio experimentalis.	Hebdomada una